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1、Word文档细菌的芽胞染色 （一）试验目的：学习细菌的芽胞染色法 （二）试验原理：细菌的芽胞具有厚而致密的壁，透性低，不易着色，若用一般染色法只能使菌体着色而芽胞不着色（芽胞呈无色透亮状）。芽胞染色法就是依据芽胞既难以染色而一旦染上色后又难以脱色这一特点而设计的。全部的芽胞染色法都基于同一个原则：除了用着色力强的染料外，还需要加热，以促进芽胞着色。当染芽胞时，菌体也会着色，然后水洗，芽胞染上的颜色难以渗出，而菌体会脱色。然后用对比度强的染料对菌体复染，使菌体和芽胞呈现出不同的颜色，因而能更明显地衬托出芽胞，便于观看。 （三）试验器材 1.活材料：培育36小时的苏云金杆菌（Bacillus th
2、uringiensis）或者枯草杆菌（Bacillus subtilis）。 2.染色液和试剂：5%孔雀绿水溶液、0.5%蕃红水溶液见附录二（一）6、5。 3.器材：小试管（75mm10mm）、烧杯（300mL）、滴管、玻片搁架、接种环、擦镜纸、镊子、显微镜等。 （四）试验方法 1.改良的Schaeffer和Fulton氏染色法 （1）制备菌液：加12滴无菌水于小试管中，用接种环从斜面上挑取23环的菌体于试管中并充分打匀，制成浓稠的菌液。 （2）加染色液：加5%孔雀绿水溶液23滴于小试管中，用接种环搅拌使染料与菌液充分混合。 （3）加热：将此试管浸于沸水浴（烧杯），加热1520min。 （4）
3、涂片：用接种环从试管底部挑数环菌液于干净的载玻片上，做成涂面，晾干。 （5）固定：将涂片通过酒精灯火焰3次。 （6）脱色：用水洗直至流出的水中无孔雀绿颜色为止。 （7）复染：加蕃红水溶液染色5min后，倾去染色液，不用水洗，直接用吸水纸吸干。 （8）镜检：先低倍，再高倍，最终用油镜观看。 结果：芽胞呈绿色，芽胞囊和菌体为红色。 2.Schaeffer与Fulton氏染色法 （1）涂片：按常规方法将待检细菌制成一薄的涂片。 （2）晾干固定：待涂片晾干后在酒精灯火焰上通过23次。 （3）染色： 加染色液：加5%孔雀绿水溶液于涂片处（染料以铺满涂片为度），然后将涂片放在铜板上，用酒精灯火焰加热至染液
4、冒蒸汽时开头计算时间，约维持15-20min。加热过程中要随时添加染色液，切勿让标本干枯。（加热时温度不能太高）。 水洗：待玻片冷却后 ，用水轻轻地冲洗，直至流出的水中无染色液为止。 复染：用蕃红液染色5min。 （4）水洗、晾干或吸干。 （5）镜检：先低倍，再高倍，最终在油镜下观看芽胞和菌体的形态。 结果：芽胞呈绿色，菌体为红色。 （五）试验作业： 绘出所用材料的芽胞和菌体的形态图。 （六）留意事项 1.供芽胞染色用的菌种应掌握菌龄。 2.改良法在节省染料、简化操作及提高标本质量等方面都较常规涂片法优越，可优先使用。 3.用改良法时，欲得到好的涂片，首先要制备浓稠的菌液，其次是从小试管中取染色的菌液时，应先用接种环充分搅拌，然后再挑取菌液，否则菌体沉于管底，涂片时菌体太少。 3
