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1、Word文档粪链球菌及检验一、生物学性状 依据最新分类原则，粪链球菌又叫粪肠球菌。应用C多糖抗原，依据兰氏（Lancefield）血清学分类，可将链球菌分成很多群。粪链球菌属于D群。D群链球菌分肠球菌和非肠球菌两类。前者包括粪链球菌（S.faecalis）、屎链球菌（S.faecium）和坚忍链球菌（S.durans）,后者有牛链球菌（S.bovis）和马肠链球菌(S.equinus)。 粪链球菌菌形圆或椭圆，可顺链的方向延长,直径0.5-1.0微米,大多数成双或短链状排列,通常不运动。在丰富培育基上菌落大而光滑，直径1-2mm，全缘，罕见色素。其养分要求低，在一般养分琼脂上也可生长。能在10
2、或45 pH 9.6或含6.5%NaCl肉汤培育基中生长，并能耐65 30分钟。它可利用精氨酸为能源，发酵山梨醇，不发酵阿拉伯糖。在简洁的培育基上生长不需叶酸。 近年来，DNA-DNA杂交结果显示，肠球菌与链球菌属同源程度低，故有学者建议另立肠球菌属，与人类有关者为粪肠球菌（E.faecalis）和屎肠球菌（E.faecium）。 二、致病性 粪链球菌引起的感染有尿路感染、化脓性腹部感染、败血症、心内膜炎和腹泻发烧等。其中败血症最常继发于生殖泌尿性感染，皮肤、胆道、肠道等感染也可作为原发病灶。从自然乳清培育物中分别的菌株，能产生一种细菌素，叫肠球菌素（Enterocin），对单增李斯特氏菌有杀
3、灭作用。 三、流行病学 粪链球菌为条件致病菌，它来源于人和温血动物的粪便，间或消失于感染的尿道及急性心内膜炎。它能够通过食品对人类造成感染，因而常见于很多食品，如火腿肠、炸肉丸、布丁及经过巴氏消毒的牛奶等，粪链球菌进入食物链的主要缘由是不卫生的加工条件所致的，一般与直接的粪便感染无关。粪链球菌引起的感染大多是由于它的侵袭所造成，感染剂量较高，一般大于107个细菌。人、禽感染率最高，亦见于猪、牛、马、山羊、绵羊及兔。 四、检验与掌握 1、检验： 样品制备 取25g或25mL样品，放入225mL灭菌生理盐水中，充分混匀，制成1：10样品稀释液。依据样品的污染程度，制成适当的10倍递增稀释液。 a.
4、多管法： 用适当的稀释液接种一套叠氮化钠葡萄糖肉汤管。接种量为1mL或以下的，使用10mL单料管；接种量为10mL，使用10mL双料管。35培育24-48h，并检查记录各管的混浊状况。用接种环将浑浊管中的培育物划线于PSE平板上，倒置平板于36培育24h。平板上消失的带棕色环的黑色菌落，确证为粪链球菌。依据接种的样品量和确证为是粪链球菌的管数，查MPN表，报告每克样品中的粪链球菌MPN值。 b.滤膜法： 倾注溶化的4-5mL的KF琼脂于平板上，若平板表面有气泡，可用火焰灼除。依据样品的污染程度，使用样液的量为100，10，1.0，0.1或0.01mL。使用灭菌滤膜过滤样液，以能在滤膜上生长出2
5、0-100个菌落为宜。将滤过样液的滤膜紧贴在KF琼脂培育基表面上，避开消失气泡。倒置平板于36培育48h。粪链球菌在KF平板滤膜上形成暗红色至粉红色菌落。将典型菌落接种于脑心浸液斜面上，36培育48h。用其培育物做过氧化氢试验，过氧化氢浓度为3%，阳性反应者为非粪链球菌群细菌。将阴性反应者接种于脑心浸液肉汤，置45.5培育48h；同样方式接种一管胆盐肉汤，置36培育3天。在上述两种状况下生长者为粪链球菌。选择生长20-100个菌落的滤膜，依据所使用的样品量，计算出样品每克（毫升）中的粪链球菌数。 c.平板计数法： 取1mL适当稀释液加入培育皿内，倾入12-15mL的KF或PSE培育基，转动平板
6、充分混合。凝固后置36培育，KF平板培育48h，PSE平板培育24h。粪链球菌在KF平板上形成暗红色至粉红色菌落，边缘整齐，琼脂表面下菌落呈椭圆或晶体状；在PSE平板上形成带棕色环的棕黑色菌落。选择有30-300个菌落的平板进行记数。按粪链球菌数/g(mL)报告结果。 2、掌握 由于粪链球菌可通过食物对人类造成感染，所以应从以下几个方面加以掌握： 加强生产区域的卫生管理，由于粪链球菌主要来源于人畜粪便，所以厕所要合理布局，避开粪便直接污染；生产人员要严格执行个人卫生制度。 在加工过程中，严格留意每个关键点的掌握，把握好诸如温度、水源卫生等要素。 对摆放时间过长的食物，如熟食制品、牛奶或奶制品等，要彻底加热再食用，春夏季尤其要留意。 4
