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1、Word文档细菌对于碳水化合物的代谢试验 1.糖（醇、苷）类发酵试验（1）原理：由于各种细菌含有发酵不同糖（醇、苷）类的酶，故分解糖类的力量各不相同，有的能分解多种糖类，有的仅能分解12种糖类，还有的不能分解。细菌分解糖类后的终末产物亦不全都，有的产酸、产气，有的仅产酸，故可利用此特点以鉴别细菌。（2）培育基：在培育基中加入0.5%1%的糖类（单糖、双糖或多糖）、醇类（甘露醇、肌醇等）、苷类（水杨苷等）。培育基可为液体、半固体、固体或微量生化管几种类型。（3）方法：将分别的纯种细菌，以无菌操作接种到糖（醇、苷）类发酵培育基中，置培育箱中培育数小时至两周后，观看结果。若用微量发酵管，或要求培育时
2、间较长时，应保持湿度，以免培育基干燥。（4）结果：接种的细菌，若能分解培育基中的糖（醇、苷）类产酸时，培育基中的指示剂呈酸性反应。若产气可使液体培育基中倒管内或半固体培育基内消失气泡，固体培育基内有裂隙等现象。若不分解，培育基中除有细菌生长外，无任何其他变化。（5）应用：是鉴定细菌最主要和最基本的试验，特殊对肠杆菌科细菌的鉴定尤为重要。2.氧化-发酵试验（O/F试验）（1）原理：细菌在分解葡萄糖的过程中，必需有分子氧参与的，称为氧化型。氧化型细菌在无氧环境中不能分解葡萄糖。细菌在分解葡萄糖的过程中，可以进行无氧降解的，称为发酵型。发酵型细菌无论在有氧或无氧的环境中都能分解葡萄糖。不分解葡萄糖的
3、细菌称为产碱型。利用此试验可区分细菌的代谢类型。（2）培育基：Hugh-Leifson培育基 （3）方法：将待检菌同时穿刺接种两支HL培育基，其中一支培育基滴加无菌的液体石蜡（或其他矿物油），高度不少于1cm.将培育基于35培育48h或更长。（4）结果：两支培育基均无变化为产碱型或不分解糖型；两支培育基均产酸为发酵型；若仅不加石蜡的培育基产酸为氧化型。（5）应用：主要用于肠杆菌科细菌与非发酵菌的鉴别，前者均为发酵型，而后者通常为氧化型或产碱型。也可用于葡萄球菌与微球菌间的鉴别。3.-半乳糖苷酶试验（ONPG试验）（1）原理：有的细菌可产生-半乳糖苷酶，能分解邻-硝基酚-D-半乳糖苷（ONPG）
4、，而生成黄色的邻-硝基酚，在很低浓度下也可检出。（2）试剂：0.75M ONPG溶液：取80mg溶于15ml蒸馏水中，在加入缓冲液（6.9g NaH2P04溶于45ml蒸馏水中，用30% NaOH调整pH为7.0，再加水至50ml）5ml，置4冰箱中保存。0NPG溶液为无色，如消失黄色，则不应再用。（3）方法：从克氏双糖铁培育基上取菌，于0.25ml无菌生理盐水中制成菌悬液，加入一滴甲苯并充分振摇，使酶释放。将试管置37水浴5min，加入0.25ml ONPG试剂，水浴20min3h观看结果。（4）结果：菌悬液呈现黄色为阳性反应，一般在2030min内显色。（5）应用：快速及迟缓分解乳糖的细菌
5、ONPG试验为阳性，而不发酵乳糖的细菌为阴性。本试验主要用于迟缓发酵乳糖菌株的快速鉴定。4.七叶苷水解试验（1）原理：有的细菌可将七叶苷分解成葡萄糖和七叶素，七叶素与培育基中枸橼酸铁的二价铁离于反应，生成黑色的化合物，使培育基呈黑色。（2）培育基：七叶苷培育基、胆汁七叶苷培育基。（3）方法：将待检菌接种于七叶苷培育基中，培育后观看结果。（4）结果：培育基变为黑色为阳性，不变色者为阴性医学教|育网搜集整理。（5）应用：主要用于D群链球菌与其他链球菌的鉴别，前者阳性，后者阴性。也可用于革兰阴性杆菌及厌氧菌的鉴别。5.甲基红试验（1）原理：某些细菌在糖代谢过程中，分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸可进一步
6、分解，产生甲酸、乙酸、乳酸等，使培育基的pH降至4.5以下，当加入甲基红试剂则呈红色，为甲基红试验阳性。若细菌分解葡萄糖产酸量少，或产生的酸进一步转化为其他物质（如醇、酮、醚、气体和水等），则培育基的酸度仍在pH6.2以上，故加入甲基红指示剂呈黄色，是为阴性。（2）培育基：葡萄糖蛋白胨水培育基。（3）方法：将待检菌接种于上述培育基中，培育24d，于培育基内加入甲基红试剂，马上观看结果。（4）结果：呈现红色为阳性；橘红色为弱阳性；黄色为阴性。（5）应用：主要用于鉴别大肠埃希菌与产气肠杆菌，前者为阳性，后者为阴性。此外肠杆菌科中沙门菌属、志贺菌属、枸橼酸杆菌属、变形杆菌属等为阳性，而肠杆菌属、哈夫
7、尼亚菌属则为阴性 。6.V-P试验（1）原理：某些细菌在糖代谢过程中，分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸脱羧产生乙酰甲基甲醇，乙酰甲基甲醇在碱性环境中，被空气中的氧氧化为二乙酰，进而与培育基内蛋白胨中精氨酸所含的胍基起作用，生成红色化合物，则为V-P试验阳性。若培育基中胍基含量较少，则可加入少量含胍基化合物，如肌酸或肌酐等。试验时加入a-萘酚可加速此反应。（2）培育基：葡萄糖蛋白胨水培育基医学教|育网搜集整理。（3）方法：将待检菌接种于上述培育基中，于35培育48h后加入甲液（6% -萘酚酒精溶液）和乙液（40% KOH溶液），振摇。（4）结果：在数分钟内消失红色为阳性；如无红色消失且于354h后仍如故者即为阴性。（5）应用：本试验常与甲基红试验一起使用，由于前者阳性的细菌，后者通常为阴性5
