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1、Word文档细菌对于碳水化合物的代谢试验 1.糖(醇、苷)类发酵试验(1)原理:由于各种细菌含有发酵不同糖(醇、苷)类的酶,故分解糖类的力量各不相同,有的能分解多种糖类,有的仅能分解12种糖类,还有的不能分解。细菌分解糖类后的终末产物亦不全都,有的产酸、产气,有的仅产酸,故可利用此特点以鉴别细菌。(2)培育基:在培育基中加入0.5%1%的糖类(单糖、双糖或多糖)、醇类(甘露醇、肌醇等)、苷类(水杨苷等)。培育基可为液体、半固体、固体或微量生化管几种类型。(3)方法:将分别的纯种细菌,以无菌操作接种到糖(醇、苷)类发酵培育基中,置培育箱中培育数小时至两周后,观看结果。若用微量发酵管,或要求培育时
2、间较长时,应保持湿度,以免培育基干燥。(4)结果:接种的细菌,若能分解培育基中的糖(醇、苷)类产酸时,培育基中的指示剂呈酸性反应。若产气可使液体培育基中倒管内或半固体培育基内消失气泡,固体培育基内有裂隙等现象。若不分解,培育基中除有细菌生长外,无任何其他变化。(5)应用:是鉴定细菌最主要和最基本的试验,特殊对肠杆菌科细菌的鉴定尤为重要。2.氧化-发酵试验(O/F试验)(1)原理:细菌在分解葡萄糖的过程中,必需有分子氧参与的,称为氧化型。氧化型细菌在无氧环境中不能分解葡萄糖。细菌在分解葡萄糖的过程中,可以进行无氧降解的,称为发酵型。发酵型细菌无论在有氧或无氧的环境中都能分解葡萄糖。不分解葡萄糖的
3、细菌称为产碱型。利用此试验可区分细菌的代谢类型。(2)培育基:Hugh-Leifson培育基 (3)方法:将待检菌同时穿刺接种两支HL培育基,其中一支培育基滴加无菌的液体石蜡(或其他矿物油),高度不少于1cm.将培育基于35培育48h或更长。(4)结果:两支培育基均无变化为产碱型或不分解糖型;两支培育基均产酸为发酵型;若仅不加石蜡的培育基产酸为氧化型。(5)应用:主要用于肠杆菌科细菌与非发酵菌的鉴别,前者均为发酵型,而后者通常为氧化型或产碱型。也可用于葡萄球菌与微球菌间的鉴别。3.-半乳糖苷酶试验(ONPG试验)(1)原理:有的细菌可产生-半乳糖苷酶,能分解邻-硝基酚-D-半乳糖苷(ONPG)
4、,而生成黄色的邻-硝基酚,在很低浓度下也可检出。(2)试剂:0.75M ONPG溶液:取80mg溶于15ml蒸馏水中,在加入缓冲液(6.9g NaH2P04溶于45ml蒸馏水中,用30% NaOH调整pH为7.0,再加水至50ml)5ml,置4冰箱中保存。0NPG溶液为无色,如消失黄色,则不应再用。(3)方法:从克氏双糖铁培育基上取菌,于0.25ml无菌生理盐水中制成菌悬液,加入一滴甲苯并充分振摇,使酶释放。将试管置37水浴5min,加入0.25ml ONPG试剂,水浴20min3h观看结果。(4)结果:菌悬液呈现黄色为阳性反应,一般在2030min内显色。(5)应用:快速及迟缓分解乳糖的细菌
5、ONPG试验为阳性,而不发酵乳糖的细菌为阴性。本试验主要用于迟缓发酵乳糖菌株的快速鉴定。4.七叶苷水解试验(1)原理:有的细菌可将七叶苷分解成葡萄糖和七叶素,七叶素与培育基中枸橼酸铁的二价铁离于反应,生成黑色的化合物,使培育基呈黑色。(2)培育基:七叶苷培育基、胆汁七叶苷培育基。(3)方法:将待检菌接种于七叶苷培育基中,培育后观看结果。(4)结果:培育基变为黑色为阳性,不变色者为阴性医学教|育网搜集整理。(5)应用:主要用于D群链球菌与其他链球菌的鉴别,前者阳性,后者阴性。也可用于革兰阴性杆菌及厌氧菌的鉴别。5.甲基红试验(1)原理:某些细菌在糖代谢过程中,分解葡萄糖产生丙酮酸,丙酮酸可进一步
6、分解,产生甲酸、乙酸、乳酸等,使培育基的pH降至4.5以下,当加入甲基红试剂则呈红色,为甲基红试验阳性。若细菌分解葡萄糖产酸量少,或产生的酸进一步转化为其他物质(如醇、酮、醚、气体和水等),则培育基的酸度仍在pH6.2以上,故加入甲基红指示剂呈黄色,是为阴性。(2)培育基:葡萄糖蛋白胨水培育基。(3)方法:将待检菌接种于上述培育基中,培育24d,于培育基内加入甲基红试剂,马上观看结果。(4)结果:呈现红色为阳性;橘红色为弱阳性;黄色为阴性。(5)应用:主要用于鉴别大肠埃希菌与产气肠杆菌,前者为阳性,后者为阴性。此外肠杆菌科中沙门菌属、志贺菌属、枸橼酸杆菌属、变形杆菌属等为阳性,而肠杆菌属、哈夫
7、尼亚菌属则为阴性 。6.V-P试验(1)原理:某些细菌在糖代谢过程中,分解葡萄糖产生丙酮酸,丙酮酸脱羧产生乙酰甲基甲醇,乙酰甲基甲醇在碱性环境中,被空气中的氧氧化为二乙酰,进而与培育基内蛋白胨中精氨酸所含的胍基起作用,生成红色化合物,则为V-P试验阳性。若培育基中胍基含量较少,则可加入少量含胍基化合物,如肌酸或肌酐等。试验时加入a-萘酚可加速此反应。(2)培育基:葡萄糖蛋白胨水培育基医学教|育网搜集整理。(3)方法:将待检菌接种于上述培育基中,于35培育48h后加入甲液(6% -萘酚酒精溶液)和乙液(40% KOH溶液),振摇。(4)结果:在数分钟内消失红色为阳性;如无红色消失且于354h后仍如故者即为阴性。(5)应用:本试验常与甲基红试验一起使用,由于前者阳性的细菌,后者通常为阴性5