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1、 HPV的分子诊断 HPV全称为人乳头瘤病毒，可以侵犯人类女性的子宫，导致患有宫颈癌。宫颈癌是世界上最常见的妇科肿瘤之一，在一些发展中国家发病率最高，而且在近几年来，年轻患者的宫颈癌病例逐年增多。在我国，宫颈癌是最重要的疾病之一。一、关于HPV（人乳头瘤病毒）人乳头瘤病毒（HPV）是DNA病毒的一种类型，早期基因e1-e7编码7种早期蛋白，主要参与病毒的复制、转录、翻译调控和细胞转化，E6和e7基因可以结合正常到恶性的细胞，其蛋白可以干扰肿瘤抑制蛋白，E6可以结合并增加p53的降解，E7可能结合并拮抗PRB，从而损害这两种抑癌基因产物抑制细胞分裂和增殖的功能。较小的caprid蛋白。在HPV类
2、型中有一种共同的抗原，即特异性抗原，它与牛乳头瘤病毒（BPV）有交叉反应，L2蛋白是一种类型特异性抗原，不同类型之间不存在交叉反应，了解HPV的分子生物学特性是分子诊断的基础。二、人乳头瘤病毒会给人类带来那些危害人类感染HPV可导致生殖系统疾病，近年来，随着现代医学技术的进步，HPV感染的发病率逐年上升，由于患者病情的不断进步，可能对围产期患者产生严重影响，同时高危HPV人群感染者可能导致不同年龄段的抑郁症。在感染早期，HPV可以复制基底上皮细胞中的病毒蛋白而不引起全身炎症反应，但持续感染可能进一步改变细胞因子和趋化因子的表达，这种病毒蛋白可以持续复制并在基底细胞中释放病毒颗粒，HPV还可以改
3、变一些抑癌基因的功能，促进宫颈癌的发生。目前，宫颈癌的重要治疗方法是手术联合放疗和化疗，术后视网膜病变发生率高，无可靠的非血管指标可预测复发、转移和预后。但是最近新发现了通过PCR来监测血液中的HPV的DNA分子，来确定是否患得了宫颈癌，那么HPV的分子诊断又是如何进行的呢？三、HPV的DNA分子诊断方法1、首先介绍一下标本的收集方法采集被测者清晨未进食前的静脉血，离心沉淀取上清液，保存于零下80。2、然后提取病毒DNA根据说明，使用高纯度病毒核酸试剂盒，具体操作如下：将200微升血清样品与等量的粘合剂缓冲液和50微升蛋白酶K混合，置于72水浴中10min，加入100微升粘合剂缓冲液搅拌均匀，
4、将混合物转移到过滤管中并以8000 rpm离心1min，丢弃过滤液。向过滤管中加入500微升抑制缓冲液，8000rpm离心1min，丢弃过滤液。向过滤管中加入450微升洗涤缓冲液，8000rpm离心1min，丢弃过滤液。以8000rpm离心1分钟，13000rpm离心10秒，然后丢弃滤液，将50微升洗脱液安装在过滤管中，以8000rpm离心1分钟，得到滤液为纯化的病毒DNA，然后20保存。3、然后将提取的病毒DNA放到PCR仪中进行PCR反应，观察结果。实时荧光定量PCR是新发展起来的一种基因检测技术。它既保持了PCR技术的灵敏度和速度，又克服了假阳性污染和定量分析不准确的缺点，具有重复性好、
5、操作简便、价格低廉等优点。四、HPV分子诊断的优点它可作为治疗宫颈癌之后的检测依据。虽然宫颈癌的早期诊断并不困难，但治疗后仍缺乏特异性监测指标。为了测定宫颈癌患者血清HPV的DNA并进行分型，其理论基础是对HPV感染与宫颈癌关系的认识逐渐统一，HPV感染是宫颈癌和宫颈癌发生的必要因素，在宫颈病变中，HPV的DNA以游离形式存在，在宫颈癌中HPV的DNA已整合到宿主细胞DNA中，且为单克隆。E2基因编码的E2蛋白失活可导致E6和E7基因的过度表达，E6和E7蛋白可分别抑制p53和pRb蛋白在细胞周期和细胞转化中的负调控，导致致癌性。五、HPV分子诊断的发展由于HPV尚未在活细胞中成功分离，根据细
6、胞培养很难培养出HPV，人体感染HPV后，体内产生的主要抗衣壳蛋白可能长期存在于体内。该抗体是新感染还是既往感染，因此，HPV感染新诊断的发展主要依赖于分子生物学对病毒DNA的检测。六、HPV分子诊断的应用有大量的研究数据以及证据表明，高危型HPV与宫颈癌有密切的关联，尤其是HPV16与宫颈癌有显著相关性，而且HPV是引起尖锐湿疣的主要原因。对疑似尖锐湿疣标本进行荧光定量PCR检测，发现HPV6和HPV11感染于皮肤和粘膜，外观正常，推测其处于尖锐湿疣感染的潜伏期或亚临床期，不仅可以发展为尖锐湿疣，而且具有很强的传染性；HPV在丘疹赘生物中的检出率明显低于整体水平，是诊断尖锐湿疣、假牙、珍珠罂粟和异位皮脂腺早期损害的依据，而传统的酸试验难以鉴别。七、小结宫颈癌患者血清中HPV的DNA分子检出率很高，而且HPV16的检出率高于HPV18的检出率。因此可以通过监测血清中的HPV的DNA分子来判断宫颈癌的患有，复发与愈后转移。HPV DNA的检测为分析HPV类型和病毒载量提供了检测方法，并进一步探讨了病毒载量与疾病进程和预后的关系，为女性生殖道发育过程中HPV感染的早期诊断和疫苗株的筛选提供了可靠依据，减少和预防宫颈癌及不稳定病变的发生，在以后的临床应用中可以广泛推广使用。 -全文完-
