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1、毕 业 论 文（设计）题 目 五味子质量优劣 对五味子甲素、乙素含量影响的研究 指导老师 专业班级 生物技术及应用0701 姓 名 学 号 2010年5月30 日摘要人工经验鉴别五味子质量优劣与现代分析手段检测所得结论间的相互关系。本文用高效液相的分析方法，甲醇超声处理五味子样品，甲醇乙腈水为流动相，检测波长为224nm，30个不同批次的五味子药材作为研究对象，对五味子中的有效成分甲素、乙素进行鉴定分析。结果发现不同批次的五味子中五味子甲素含量变化较大，并与人工经验判别有一定相关性，一等样品的五味子甲素含量在1.6mg/g以上，二等样品均低于0.5mg/g，中间较难判断等级的样品差别较大， 高
2、的甲素含量为4.15mg/g，低的甲素含量为0.18mg/g，而乙素含量基本比较稳定，在1.6mg/g-2.0mg/g之间。因此经验判别对药材优劣的判断是一种可靠的方法，企业可以利用这种快速和直观的方法对药材进行初步而有效的筛选，提高企业生产效率，节省开支。关键词：五味子；质量优劣；五味子甲素；五味子乙素目 录引言. 11材料与方法.11.1实验材料.11.2实验试剂.21.3实验仪器. 21.4实验方法.31.5标准曲线的制备. 31.6供试品检测结果.31.7线性关系.42结果与分析.53讨论 .6参考文献 .7引言五味子甲素和乙素是五味子中的一类主要有效成分，具有抗氧化、抗肿瘤、护肝降酶
3、、抑制肿瘤细胞多药耐药性的产生、对抗心肌灌注性损伤等多种生物学活性。是诸多五味子药材及其制剂质量评价中的一个通常采用的质量指标，多种含有五味子的中成药用其作为指标性成分进行质量控制。本文研究五味子质量优劣对五味子甲素、乙素含量的影响。五味子甲素和乙素最常见的分析方法有薄层色谱扫描法1,2,反相高效液相色谱法3-5，高速逆流色谱法6等。五味子乙素在254nm处有最大的吸收峰，因此常采用254nm处的吸收波长进行测定。HPLC法是目前最常用的分析方法。据报道，最佳的两种样品的预处理方法是甲醇或乙醇回流法和甲醇或乙醇超声法。流动相体系采用甲醇水（酸水或盐溶液体系）7，乙腈水体系8，乙腈水甲醇体系9等
4、。本研究采用甲醇超声处理五味子样品，甲醇乙腈水为流动相，检测波长选224nm。1 材料与方法1.1实验材料 实验材料为采购时间、采购地点以及质量等级不同的北五味子。共选取五味子30批，产地主要为黑龙江、吉林、辽宁等东北三省。采购时间为2008年6月-2009年3月之间。被分析的五味子对象具体编号情况如表1.1。邀请企业与浙江省药检所有经验的药物鉴别人员按照北五味的外观进行分等，鉴别时采用双盲法，综合几位判定人员的意见进行结果判定。具体的参照标准为：一等五味子呈不规则球形或椭圆形，表面紫红色或红褐色, 皱缩, 肉厚, 质柔润，内有肾形种子12粒果肉味酸, 种子有香气,味辛微苦干瘪脸不超过2%；二
5、等五味子表面黑红, 暗红或淡红色, 皱缩, 肉较薄, 干瘪粒不超过20%，其它同一等。以油性大、紫红色、肉厚、气味浓者为质量最佳。表1.1北五味子的具体情况及编号编号采购地采购时间编号采购地采购时间1黑龙江2008年6月16吉林2009年3月2黑龙江2008年6月17吉林2009年3月3辽宁2008年6月18吉林2009年3月4吉林2008年6月19黑龙江2009年3月5吉林2008年6月20黑龙江2009年3月6北潮2008年6月21辽宁2009年3月7磐安2009年1月22黑龙江2009年3月8磐安2009年1月23辽宁2009年3月9磐安2009年1月24辽宁2009年3月10磐安200
6、9年3月25苍南2009年3月11磐安2009年3月26苍南2009年3月12磐安2009年3月27长白山2009年3月13磐安2009年3月28长白山2009年3月14磐安2009年3月29长白山2009年3月15吉林2009年3月30长白山2009年3月1.2实验试剂乙睛(色谱纯，德国Merck公司)甲醇(色谱纯，德国Merck公司)哇哈哈矿泉水甲醇(分析纯，衙州巨化试剂)微孔滤膜(油膜，0.4m)五味子甲素对照品（0764-200807，供含量测定用，中国药品生物制品检定所提供）五味子乙素对照品(117065-200707，供含量测定用，中国药品生物制品检定所提供)1.3实验仪器电子分析
7、天平(梅特勒托利多AL-204分析天平，称量范围0.01g-200g)戴安高效液相色谱仪；Diamonsil C18柱(250x4.6mm, 5um; Dikma)超声波清洗器(KQ-100型超声波清洗器，昆山市超声仪器厂)架盘药物天平:（马头牌BP-II型，称量范围0.5g一500g，上海医用激光仪器厂）150mL磨口具塞锥形瓶;10mL的容量瓶1.4实验方法精确称取0.5g五味子样品粗粉(过2号筛)加入25mL甲醇后称重，超声30min后加甲醇补重，静置30min后取上清液用0.4m的微孔滤膜油膜过滤，取第三次的滤液作为供试液待测。检测与分析：色谱柱为Diamonsil C18柱（2504
8、.6mm，5m），流动相为甲醇-水-乙腈(70:23:7)，流速为1.0mLmin-1，柱温为25，检测波长为224 nm，进样量10L，保留时间为30min。1.5标准曲线的制备五味子甲素乙素标准液制备：精密称取6.8mg五味子甲素、8.2mg五味子乙素加入到10ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度，超声溶解后于4条件下保存。分别将储备液稀释为3.4，6.8，10.2，13.6，17.0 mg100mL-1的甲素标准溶液和4.1，8.2，12.3，16.4，20.5mg100mL-1的乙素标准溶液。将标准溶液用0.4m的微孔滤膜油膜过滤后进样量ll按上述分析条件进行HPLC分析。以五味子甲素和乙素
9、的浓度为横坐标、峰面积为纵坐标作图，得浓度与峰面积关系的工作曲线图1.1。五味子乙素标准品五味子甲素标准品图1.1 五味子甲素与五味子乙素标准品色谱图1.6供试品检测结果高效液相的分析方法，用甲醇超声处理五味子样品，甲醇乙腈水为流动相，检测波长为224nm，30个不同批次的五味子药材作为研究对象，对五味子中的有效成分甲素、乙素进行鉴定分析，其中一个供试品图谱，如图1.2。五味子乙素供试品五味子甲素供试品图1.2 供试品色谱图1.7线性关系以五味子甲素和乙素的浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标作图，得出五味子甲素和乙素峰面积与浓度的线性关系见图1.3、图1.4。五味子甲素标准溶液的线性方程Y=8.0
10、441X-0.35，R2=0.9999，结果表明五味子甲素含量在0.034到 0.170mgml-1范围内与峰面积有良好的线性关系，见图1.3；五味子乙素标准溶液的线性方程Y=3.3244X+0.03，R2=0.9994，结果表明五味子乙素含量在0.041到 0.205mgml-1范围内与峰面积有良好的线性关系，见图1.4。图1.3 五味子甲素的标准曲线图1.4 五味子乙素的标准曲线2 结果与分析表2.1 经验鉴别样品的等级与样品中五味子甲素与乙素含量的关系表等级编号五味子甲素含量（mg/g）五味子乙素含量（mg/g）二等20.231.75二等30.391.68二等40.431.56二等60.
11、281.88二等90.461.75二等120.351.86二等160.261.92二等200.341.69二等220.261.78二等270.321.86一等71.951.79一等111.681.82一等151.831.93一等172.251.78一等182.781.86一等191.921.95一等243.561.96一等252.631.88一等292.121.94一等301.761.72中间10.181.64中间51.941.78中间82.181.85中间101.881.84中间131.641.76中间141.981.86中间212.641.94中间233.381.83中间263.141.9
12、6中间284.151.86根据1.4的实验方法，对30种北五味子样品进行了五味子甲素和乙素含量的检测，结果见表2.1。总体上来说，不同批次的五味子中五味子甲素含量变化较大，并与人工经验判别有一定相关性，而乙素含量基本比较稳定，在1.6mg/g-2.0mg/g之间，含量与人工经验判别的相关性不是很大。根据人工经验判别的30个样品中，归结为一等的10个样品的五味子甲素含量均在1.6mg/g以上；而归结为二等的10个样品的五味子甲素含量均低于0.5mg/g。而中间较难判断等级的样品的五味子甲素含量差别较大， 高的28号样品五味子甲素含量为4.15mg/g，低的1号样品五味子甲素含量为0.18mg/g。3 结论在分级明显的五味子样品中，人工经验鉴别的分级与五味子甲素含量呈现出一定的相关性，由于受人工经验判别的局限，对于有些药材的细分并不能真实反应药材的真实质量，因此五味子甲素含量的分级比人工经验鉴别的结果更加具有说服性。而五味子乙素由于含量变化不大不能反应出样品质量的等级区别。因此，五味子甲素含量可以作为五味子药材质量优劣评价的指标之一。根据已经测定的三十批五味子样品，建议将五味子甲素含量列入五味子的质量优劣评价指标体系中来。按照上文方法测定的结果，优等品
