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1、实用标准分子生物学试题及答案一、名词解释1 . cDNAW cccDNA cDNAM由mRNAi过反转录酶合成的双链 DNA cccDNAM游离于染色体之外的质粒双链闭合环形 DNA2 .标准折叠单位：蛋白质二级结构单元-螺旋与(3 -折叠通过各 种连接多肽可以组成特殊几何排列的结构块，此种确定的折叠类型通 常称为超二级结构。几乎所有的三级结构都可以用这些折叠类型，乃至他们的组合型来予以描述，因此又将其称为标准折叠单位。3 . CAP 环腺甘酸(cAMP 受体蛋白 CRP(cAMReceptor protein ), cAMPW CRR吉合后所形成的复合物称激活蛋白 CARcAMRactiva
2、ted protein )4 .回文序列：DNA片段上的一段所具有的反向互补序列，常是限制 性酶切位点。5 . micRNA互补干扰RNA称反义RNA与mRN府列互补，可抑制 mRNA勺翻译。6 .核酶：具有催化活性的 RNA在RNA的剪接加工过程中起到自我 催化的作用。7 .模体：蛋白质分子空间结构中存在着某些立体形状和拓扑结构颇 为类似的局部区域8 .信号肽：在蛋白质合成过程中N端有1536个氨基酸残基的肽段， 引导蛋白质的跨膜。9 .弱化子：在操纵区与结构基因之间的一段可以终止转录作用的核 甘酸序列。10 .魔斑：当细菌生长过程中，遇到氨基酸全面缺乏时，细菌将会产 生一个应急反应，停止全
3、部基因的表达。产生这一应急反应的信号是 鸟甘四磷酸（ppGpp）和鸟甘五磷酸（pppGpD。PpGppW pppGpp的作 用不只是一个或几个操纵子，而是影响一大批，所以称他们是超级调 控子或称为魔斑。11 .上游启动子元件：是指对启动子的活性起到一种调节作用的DNA序列，-10区的TATA -35区的TGAC徽增强子，弱化子等。12 . DNA!针：是带有标记的一段已知序列 DNA用以检测未知序列、 筛选目的基因等方面广泛应用。13 . SD序列：是核糖体与 mRN船合序列，对翻译起到调控作用。14 .单克隆抗体：只针对单一抗原决定簇起作用的抗体。15 .考斯质粒：是经过人工构建的一种外源
4、DNAt体，保留噬菌体两 端的CO驱，与质粒连接构成。16 .蓝-白斑筛选：含LacZ基因（编码（3半乳糖甘酶）该酶能分解生 色底物X-gal（5-澳-4-氯-3-呻噪-B-D-半乳糖甘）产生蓝色，从而使 菌株变蓝。当外源DNA插入后，LacZ基因不能表达，菌株呈白色， 以此来筛选重组细菌。称之为蓝-白斑筛选。17 .顺式作用元件：在DN却一段特殊的碱基序列，对基因的表达起 到调控作用的基因元件。18 . Klenow酶：DN膘合酶I大片段，只是从DNA!合酶I全酶中去除了 5 3 外切酶活性19 .锚定PCR用于扩增已知一端序列的目的 DNA在未知序列一端 加上一段多聚dG的尾巴，然后分别用
5、多聚dC和已知的序列作为引物 进行PCRT增。20 .融合蛋白：真核蛋白的基因与外源基因连接，同时表达翻译出的 原基因蛋白与外源蛋白结合在一起所组成的蛋白质。二、填空1 . DNA的物理图谱是DNA分子的（限制性内切酶酶解 ）片段的排 列顺序。2 . RNA酶的剪切分为（自体催化 ）、（异体催化）两种类型。3 .原核生物中有三种起始因子分别是 （IF-1 ）、（ IF-2 ）和（IF-3 ）。4 .蛋白质的跨膜需要（信号肽）的引导，蛋白伴侣的作用是（辅助肽链折叠成天然构象的蛋白质）。5 .启动子中的元件通常可以分为两种：（核心启动子元件）和（上 游启动子元件）。6 .分子生物学的研究内容主要包
6、含 （结构分子生物学）、（基因表达 与调控）、（DNA重组技术）三部分。7 .证明DN渥遗传物质的两个关键性实验是 （肺炎球菌感染小鼠）、 （T2噬菌体感染大肠杆菌）这两个实验中主要的论点证据是：（生物体吸收的外源DN峨变了其遗传潜能）。8 . hnRNA与mRNA间的差别主要有两点：（hnRNA在转变为 mRNA 的过程中经过剪接，）、（mRNA勺5末端被加上一个 m7pGpp由冒子，在 mRNA3末端多了 一个多聚腺甘酸（polyA）尾巴）。9 .蛋白质多亚基形式的优点是（亚基对 DNA勺利用来说是一种经济 的方法）、（可以减少蛋白质合成过程中随机的错误对蛋白质活性的 影响）、（活性能够非
7、常有效和迅速地被打开和被关闭）。10 .蛋白质折叠机制首先成核理论的主要内容包括（成核）、（结构充实）、（最后重排）。11 .半乳糖对细菌有双重作用；一方面（可以作为碳源供细胞生长 ）； 另一方面（它又是细胞壁的成分 ）。所以需要一个不依赖于 cAML CRP的启动子S2进行本底水平的永久型合成；同时需要一个依赖于 cAMFCR用勺启动子S1对高水平合成进行调节。有G时转录从（S2 ） 开始，无G时转录从（S1 ）开始。12 . DNA1组技术也称为（基因克隆）或（分子克隆）。最终目的是（把一个生物体中的遗传信息 DNA转入另一个生物体）。典型的DNA 重组实验通常包含以下几个步骤：提取供体生
8、物的目的基因（或称外源基因），酶接连接到另一 DNA 分子上（克隆载体），形成一个新的重组DN粉子。将这个重组DN砌子转入受体细胞并在受体细胞中复制保存，这个 过程称为转化。对那些吸收了重组 DNA勺受体细胞进行筛选和鉴定。对含有重组DNA勺细胞进行大量培养，检测外援基因是否表达。13、质粒的复制类型有两种：受到宿主细胞蛋白质合成的严格控制的称为（严紧型质粒），不受宿主细胞蛋白质合成的严格控制称为 （松 弛型质粒）。14. PCR勺反应体系要具有以下条件：a、被分离的目的基因两条链各一端序列相互补的DNA引物（约20个碱基左右）。b、具有热稳定性的酶如：TagDNAt合酶。c、dNTPd、作为
9、模板的目的DNA#列15. PCR勺基本反应过程包括：（变性）、（退火）、（延伸）三个阶段。16、转基因动物的基本过程通常包括：将克隆的外源基因导入到一个受精卵或胚胎干细胞的细胞核中；接种后的受精卵或胚胎干细胞移植到雌性的子宫；完成胚胎发育，生长为后代并带有外源基因；利用这些能产生外源蛋白的动物作为种畜，培育新的纯合系。17 .杂交瘤细胞系的产生是由（脾 B）细胞与（骨髓瘤）细胞杂交 产生的，由于（脾细胞）可以利用次黄喋吟，（骨细胞）提供细胞 分裂功能，所以能在HATW养基中生长。18 .随着研究的深入第一代抗体称为（多克隆抗体）、第二代（单克 隆抗体）、第三代（基因工程抗体 ）。19 .目前
10、对昆虫病毒的基因工程改造主要集中于杆状病毒， 表现在引 入（外源毒蛋白基因）；（扰乱昆虫正常生活周期的基因 ）；（对病 毒基因进行修饰）。20 .哺乳类RN婢合酶II启动子中常见的元件 TATA GC CAATW对 应的反式作用蛋白因子分别是（TFIID ）、（ SP-1 ）和（CTF/NF1 ）。21 . RN膘合酶II的基本转录因子有、 TFH -A、TFH -B、TFII-D、TF H-E他们的结合顺序是： （D、A、B、E ）。其中TFII-D的功能是（与TATA盒结合）。22 .与DNA结合的转录因子大多以二聚体形式起作用，转录因子与 DNA结合的功能域常见有以下几种（螺旋-转角-螺
11、旋）、（锌指模体）、（碱性-亮氨酸拉链模体）。23 .限制性内切酶的切割方式有三种类型分别是（在对称轴 5侧切 割产生5粘端）、（在对称轴3侧切割产生3粘端（在对称轴处 切割产生平段）。24 .质粒DNAM有三种不同的构型分别是：（SC构型）、（oc构型）、 （L构型）。在电泳中最前面的是（SC构型）。25 .外源基因表达系统，主要有（大肠杆菌）、（酵母）、（昆虫）和（哺乳类细胞表）。26 .转基因动物常用的方法有：（逆转录病毒感染法）、（DNA显微注 射法）、（胚胎干细胞法）。三、简答1 .分别说出5种以上RNA勺功能？转运RNA tRNA转运氨基酸核蛋白体RNA rRNA核蛋白体组成成信使
12、RNA mRN旗白质合成模板不均一核RNA hnRNA熟mRNA）前体小核RNA snRNA#与hnRNA勺剪接小胞浆RNA scRNA/7SL-RNAg白质内质网定位合成的信号识别体的组成成分反义RNA anRNA/micRNA寸基因的表达起调节作用核 酶Ribozyme RNA有酶活性的RNA2 .原核生物与真核生物启动子的主要差别？原核生物TTGACA - TATAAT 起始位点-35 -10真核生物增强子-GC -CAAT-TATAA 5mGpp-起始位点-110 -70 -253 .对天然质粒的人工构建主要表现在哪些方面？天然质粒往往存在着缺陷，因而不适合用作基因工程的载体，必须对
13、之进行改造构建：a、加入合适的选择标记基因，如两个以上，易于用作选择，通常是抗 生素基因。b、增加或减少合适的酶切位点，便于重组。c、缩短长度，切去不必要的片段，提高导入效率，增加装载量。d、改变复制子，变严紧为松弛，变少拷贝为多拷贝。e、根据基因工程的特殊要求加装特殊的基因元件4 .举例说明差示筛选组织特异 cDNA勺方法？制备两种细胞群体，目的基因在其中一种细胞中表达或高表达， 在另 一种细胞中不表达或低表达，然后通过杂交对比找到目的基因。例如：在肿瘤发生和发展过程中，肿瘤细胞会呈现与正常细胞表达水 平不同的mRNA因此，可以通过差示杂交筛选出与肿瘤相关的基因。 也可利用诱导的方法，筛选出
14、诱导表达的基因。5 .杂交瘤细胞系的产生与筛选？脾B细胞+骨髓瘤细胞，加聚乙二醇（PEG促进细胞融合，HAT培养 基中培养（内含次黄喋吟、氨基蝶吟、T）生长出来的脾B-骨髓瘤融 合细胞继续扩大培养。细胞融合物中包含：脾-脾融合细胞：不能生长，脾细胞不能体外培养。骨-骨融合细胞：不能利用次黄喋吟，但可通过第二途 径利用叶酸还 原酶合成喋吟。氨基蝶吟对叶酸还原酶有抑制作用，因此不能生长。骨-脾融合细胞：在HAT中能生长，脾细胞可以利用次黄喋吟，骨细 胞提供细胞分裂功能。6、利用双脱氧末端终止法（Sanger法）测定DN级结构的原理与 方法？原理是采用核甘酸链终止剂一2, 3,-双脱氧核甘酸终止DN
15、A勺延长。由于它缺少形成3/5/磷酸二脂键所需要的3-OH, 一旦参入到DNA连 中，此DNAJ就不能进一步延长。根据碱基配对原则，每当DNA!合 酶需要dNM渗入到正常延长的DNAU中时，就有两种可能性，一是参入ddNTP,结果导致脱氧核甘酸链延长的终止；二是参入dNTP,使DNAU仍可继续延长，直至参入下一个 ddNTP根据这一方法，就可 得到一组以ddNT闿尾的长短不一的DNAt段。方法是分成四组分别为 ddAMP ddGMP ddCMP ddTM我应后，聚丙 烯酰胺凝胶电泳按泳带可读出 DNAff列。7、激活蛋白（CAP对转录的正调控作用？环腺甘酸（cAMP 受体蛋白 CRP（cAMP receptor protein ）, cAMP 与CRP结合后所形成的复合物称激活蛋白CAP （ cAMPactivatedprotein ）。当大肠杆菌生长在缺乏葡萄糖的培养基中时，CAP合成量增加，CAP具有激活乳糖（Lac）等启动子的功能。一些依赖于 CRP 的启动子缺乏一般启动子所具有的典型的-35区序列特征（TTGACA 因此RNA合合酶难以与其结合。CAP的存在（功能）：能显著提高酶与启动子结合常数。主要表现以
