衣原体及检验一、概述（一）概念衣原体是一群体积较小，能通过细菌滤器，细胞内专性寄生，并有独特发育周期的原核细胞型微生物由于它具有一些与细菌类似的生物学特性，现归属于广义的细菌范畴二）分类与命名1. 传统分类法按第九版Bergey 细菌学分类手册，衣原体属于衣原体目、衣原体科、 衣原体属 根据衣原体的抗原构造和DNA同源性的特点， 将衣原体属分为四个种，包括沙眼衣原体、肺炎衣原体、鹦鹉热衣原体和家畜衣原体能引起人类致病的主要是前三种沙眼衣原体可分三个生物亚种，即沙眼生物亚种、性病淋巴肉芽肿生物亚种（LGV ）及鼠生物亚种其中沙眼亚种又分A K14 个血清型； LGV生物亚种又分4 个血清型L1、L2、L2a 和 L3前两个亚种对人类有致病性，鼠亚种则不侵犯人类肺炎衣原体是衣原体属中的一个新种只有一个血清型，即TWAR 组2. 分子生物学特性分类法该法主要是从衣原体种系发生上分析和评价传统分类法二、生物学性状1. 发育繁殖周期与形态染色衣原体在宿主细胞内生长繁殖有独特的发育周期，可见到两种形态结构不同的颗粒1）原体 ：呈球形或椭圆形，直径约0.3 m ，外有胞壁，内含致密的核质，为成熟的衣原体。
吉姆萨染色呈紫色，Macchiavello染色呈红色在细胞外较为稳定，无繁殖能力，但有高度的感染性2）网状体又称始体：呈球形或椭圆形，直径0.5 1m ，无胞壁，胞浆内无致密的核质，而有纤细的网状结构 吉姆萨染色和Macchiavello染色均呈蓝色为衣原体发育周期中的繁殖型，代谢活泼，不能自胞外存活，无感染性衣原体的发育周期：原体当与易感细胞表面的特异受体吸附后，通过细胞的吞饮作用进入细胞，形成吞噬小泡原体在泡内变软，增大为网状体约8 小时后，网状体在空泡内以二分裂方式繁殖、聚集，构成各种形状的包涵体 感染 1824 小时后，网状体浓缩形成具有坚韧细胞壁的原体， 最后随宿主细胞破裂而释出，再感染新的易感细胞，开始新的发育周期每个发育周期约需40 72 小时2. 抗原成分衣原体的抗原性相当复杂，有属、种、型等特异性抗原 1）属特异性抗原： 衣原体细胞壁LPS为属特异性补体结合抗原其与革兰阴性菌LPS结构不同，缺乏O-多糖和部分核心多糖，无典型内毒素生物学活性长期应用于衣原体血清学诊断2）种特异性抗原：主要位于外膜蛋白（MOMP）上 3）型特异性抗原： 也位于 MOMP 上， 用单克隆抗体作微量免疫荧光试验可识别衣原体各血清型。
3. 分离培养特性衣原体专性细胞内寄生绝大多数能在68 日龄鸡胚卵黄囊中生长繁殖， 并可在卵黄囊膜中找到包涵体、原体和始体颗粒， 也可在传代细胞 （如 HeLa-299 和 Mc-Coy等细胞株）中培养4. 抵抗力衣原体抵抗力弱，沙眼衣原体感染材料在3537条件下，经48 小时左右即失去活性不耐热，加热50经 30 分钟或 5660 5 10 分钟可杀死，但耐寒，在冰冻条件下可存活数年鹦鹉热衣原体比沙眼衣原体稳定对四环素、青霉素、红霉素、螺旋霉素、利福平较敏感三、临床意义人类衣原体病主要包括：（一）沙眼衣原体1. 沙眼由沙眼生物亚种A、B、Ba和 C四个血清型引起 主要通过眼 - 眼或眼 - 手- 眼（常通过公用毛巾等媒介）的途径进行直接或间接接触传播2. 包涵体结膜炎由沙眼生物亚种B、Ba、 D 、Da、 E、F、G、H 、I 、Ia 、J、K血清型引起包括婴儿及成人两类婴儿经产道时该亚种可致包涵体结膜炎和婴幼儿肺炎3. 泌尿生殖道感染主要由沙眼生物亚种D-K 血清型引起，是经性接触传播引起的非淋菌性泌尿生殖道感染的主要病原衣原体感染是男性尿道炎最常见的病因之一未经治疗者多数转为慢性，周期性加重，或可合并附睾炎、前列腺炎等。
在女性可引起尿道炎、宫颈炎、阴道炎、盆腔炎，也可与妇女不孕症有关衣原体常与淋病奈瑟菌混合感染，淋病奈瑟菌对衣原体的繁殖起激活和促进作用4. 性病淋巴肉芽肿由沙眼衣原体LGV生物亚种（ L1、L2、L2a、L3）血清型引起，主要通过性接触传播引起以化脓性腹股沟淋巴结炎为特征的性病，又称第四性病主要侵犯淋巴组织，女性以累及会阴、肛门、直肠及盆腔淋巴结多见，男性以累及腹股沟淋巴结为常见，发生化脓性炎症和慢性肉芽肿，有些可形成瘘管二） 鹦鹉热衣原体主要引起鸟类或家禽感染，由感染该衣原体的鸟类等动物的粪便污染环境，以气溶胶形式传给人类使人类发生上呼吸道感染、肺炎和毒血症 典型临床表现为非典型肺炎也有引起心内膜炎的报道三）肺炎衣原体其传播方式主要是人与人之间经飞沫或呼吸道分泌物传播引起青少年急性呼吸道感染，以肺炎为主 ，常可呈地方性、散发性流行，也可引起支气管炎、咽炎等该衣原体也可引起慢性感染，其与急性心肌梗死和慢性冠心病的关系越来越引起注意四、微生物检验1. 标本采集与处理（1）沙眼衣原体：沙眼和包涵体结膜炎的患者，取眼穹隆部及睑结膜病灶作刮片子宫颈炎取子宫颈刮片上皮细胞或分泌物作涂片标本置于运送培养基中送检，常用的运送培养基为 2SP培养基。
性病淋巴肉芽肿患者可取腹股沟淋巴结脓液，也可取直肠拭子或活检材料送检2）鹦鹉热衣原体：采取患者血液、痰液或咽喉含漱液，痰标本用约2 10 倍的灭菌肉汤或组织培养液洗脱附着在标本上的病原体，用力振摇， 制成悬液， 置室温 12 小时后，低速离心取上清液接种尸检材料取肝、脾、肺等组织，也可采腹腔和心包渗出液3）肺炎衣原体：一般利用拭子经鼻前庭插入鼻咽部，旋转后取出，利用转运培养基，冷藏送检也可采集气管内痰液或肺泡灌洗液要求24 小时内接种或置-70 保存2. 直接显微镜检查染色镜检，寻找上皮细胞细胞质内的包涵体包涵体即指在易感细胞内含增殖的始体和子代原体的空泡根据包涵体的形态、在细胞内的位置及染色性等特性，对鉴别衣原体有意义1）吉姆萨（ Giemsa）染色 ：原体呈紫红色，始体呈蓝色，包涵体呈深紫色沙眼衣原体包涵体密度低，呈空泡形 鹦鹉热衣原体和肺炎衣原体包涵体呈深密度的卵圆形，肺炎衣原体在HeLa细胞中的包涵体形态与鹦鹉热衣原体十分相似，但不像鹦鹉热衣原体具有多形性2）碘液染色 ：标本经甲醛固定后，用Lugol 碘液染 10 分钟，水洗后镜检因包涵体的基质含有丰富的糖原，可被碘液染成深褐色，而细胞的其他部分呈黄色。
沙眼衣原体含糖原，碘液染色阳性鹦鹉热衣原体和肺炎衣原体碘液染色阴性3）可利用抗LPS单抗进行直接法荧光抗体染色检测上皮细胞内的衣原体抗原3. 酶免法检测抗原可检测临床标本中的可溶性抗原4. 核酸检测按 MOPO 基因序列或其他具有种、型特异性的核酸片段，构建特异性引物或探针，利用 PCR 、核酸探针技术进行检测按 16SrRNA基因序列设计引物一般具有属特异性5. 分离培养各种衣原体均可在鸡胚卵黄囊和组织细胞内生长繁殖，鹦鹉热衣原体常用小鼠分离1）鸡胚卵黄囊接种：将检查标本加适当抗生素（如链霉素等）处理后接种于鸡胚卵黄囊分离培养2）细胞培养：目前常用的细胞有两种：即经X线照射的McCoy细胞和 HeLa 细胞 不同种的衣原体有各自最适合的培养细胞系沙眼衣原体多用McCoy细胞，鹦鹉热衣原体适合用 Hela 229 细胞系进行培养肺炎衣原体适合用HEP-2和 HL细胞系进行培养为了达到较好的培养效果，可对细胞系进行一定处理，可以用 DEAE葡聚糖预处理， 以便增加分离率，也可以用细胞生长抑制剂，抑制宿主细胞生长，以利于衣原体的分离培养3）小白鼠接种：小白鼠对不同种衣原体的敏感性不同，对沙眼衣原体不敏感，主要用于鹦鹉热衣原体的分离。
用小鼠腹腔、颅内或滴鼻接种6. 检测抗体用补体结合试验、微量免疫荧光法、酶免法检测抗体五、治疗原则四环素类及大环内酯类对衣原体有较高的活性，青霉素类、磺胺、氧氟沙星以及利福平等也有一定的活性，磺胺对肺炎衣原体无效孕妇、 哺乳期妇女以及儿童禁用四环素而首选红霉素例题】下列何种微生物能通过滤器A.军团菌B.分枝结核杆菌C.衣原体D.肺炎克雷伯杆菌E.流感嗜血杆菌正确答案C 答案解析衣原体是一群体积较小，能通过细菌滤器，细胞内专性寄生，并有独特发育周期的原核细胞型微生物例题】下列说法正确的是A.衣原体与病毒结构相似B.衣原体可引起非典型肺炎C.衣原体对抗生素不敏感D.衣原体无自己的酶系统E.衣原体不能通过滤器正确答案B 答案解析人类衣原体病主要包括沙眼衣原体、鹦鹉热衣原体和肺炎衣原体其中，鹦鹉热衣原体主要引起鸟类或家禽感染，由感染该衣原体的鸟类等动物的粪便污染环境，以气溶胶形式传给人使人发生上呼吸道感染、肺炎和毒血症典型临床表现为非典型肺炎例题】下列关于衣原体网状体的叙述正确的是A.无感染性B.具有高感染性C.有细胞壁结构D.无繁殖能力E.生长成为原体正确答案A 答案解析网状体又称始体，呈球形或椭圆形，直径0.5 1 m ，无胞壁，胞浆内无致密的核质，而有纤细的网状结构。
姬姆萨染色和Macchiavello染色均呈蓝色为衣原体发育周期中的繁殖型，代谢活泼，不能自胞外存活，无感染性微生物学与检验题库及答案一. 名词解释1. 医院感染2. 肥达反应 3. 内基小体 4. 噬菌体： 5. 血浆凝固酶 6. 败血症 7. 灭菌 8. 药物敏感试验 9. 外 - 斐氏试验 10.L 型细菌 11. 菌群失调：12. 微生物 13. 细菌 14. 最小抑菌浓度 15. 菌落 16. 汹涌发酵 17. 无菌操作18. 流感杆菌“卫星现象” 19. 培养基 20. 包涵体 21. 正常菌群 22. 内毒素23. 干扰现象： 24. 菌血症 25 菌丝：二. 填空题1 L 型细菌是指（）2 杀灭物体上所有微生物的方法称为（）3 细菌 H-O 变异是指（）4 药敏试验所用标准培养基是，所用菌液相当于（）个细菌 ml ，细菌接种采用 （）划线接种法5 细菌致病因素包括（）、（） 和（） 6 细菌引起的全身感染包括（）、（） 、（） 和（） 四种类型7 不染色标本检查主要用于观察细菌的（）8 影响革兰染色结果的关键步骤是（）9 有动力细菌在半固体培养基中的生长现象是穿刺接种线（），无动力细菌穿刺接种线（）。
10 糖发酵试验用于观察细菌分解糖是否产（）和 （） 11 靛基质试验的原理为，细菌产生的色氨酸酶分解蛋白胨中的色氨酸而生成（），此代谢产物与加入的试剂反应，生成（）12 链球菌根据溶血现象分为（）、 （）和（）三种类型13 葡萄球菌触酶试验结果为（）性，链球菌触酶试验结果为（）性14 呈现脐窝状菌落的球菌是（）15 抗 O 试验是测定病人血清中（）抗体效价的试验，用于风湿热等疾病的辅助诊断16 血平板上呈现草绿色溶血环的病原性球菌是（）和（） 17 IMViC 试验包括（）、（） 、（） 和（） 四项试验18 分解乳糖的细菌在肠道选择平板上呈现（）菌落，不分解乳糖则为（）菌落19 KIA 斜面红色表明，底层黄色、有气泡表明（）、（） ，有黑色沉淀表明（）试验阳性20 霍乱弧菌生物型包括（）和 （）21 AIDS 的传染源是（）和（），传播途径主要有（），（）和（）22 真菌菌落有（）、（） 和（） 三种23 病毒培养方法有（）、（） 和（） 24 病毒的基本结构由（）和（） 组成，有些病毒还具有（）25 流感病毒根据抗原结构不同分（）、（） 、（） 三型，其中容易引起流感大流行的是其中的（）型。
26 防止微生物进入机体和物品的操作方法称为（）27 含菌量较多的标本（如粪便）的接种通常采用（）接种法28 能引起性病的病原性球菌是（）29 普通琼脂培养基的灭菌应采用 （） 法，含糖培养基灭菌所需温度通常为 （） 30 无菌室空气消毒常采用（）法31 不染色标本检查的目的主要是观察细菌的（）现象32 细菌在液体培养基中一般表现为（）、（）（）、 三种生长现象33 IMViC 试。