《血型的鉴定方法及操作讲义教材》由会员分享，可在线阅读，更多相关《血型的鉴定方法及操作讲义教材（58页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、红细胞血型系统及其检测重庆医科大学临床血液教研室血型的发现n1900年，ABO血型系统n1940年，Rh血型系统 Karl Landsteiner血型（blood type)n狭义地讲，存在于红细胞上的特异性同种抗原。n广义地讲，是人类遗传多态性的一种表现，血液中各种成分都有其各自型别。红细胞血型抗体n天然抗体、免疫抗体n规则抗体、不规则抗体n完全抗体，不完全抗体n同种抗体，自身抗体天然抗体和免疫抗体n天然抗体：ABO血型系统中，A型个体血浆中天然存在抗B，B型个体血浆中存在抗A。多数天然抗体是IgM型，最佳反应温度为室温或更低。n免疫抗体：一般通过输血、妊娠、注射三种方式接受抗原刺激，多数免
2、疫抗体是IgG型，最佳反应温度是37oC。天然抗体和免疫抗体特性比较规则抗体和不规则抗体n规则抗体：ABO系统产生抗、抗是有规律的。Landsteiner规律：型抗，型抗，型抗，抗n不规则抗体：除ABO 系统外，其他系统产生的抗体均不符合上述规律。正常人血液中一般没有不规则抗体，又称为意外抗体（unexpected antibody）。完全抗体和不完全抗体n完全抗体：在盐水介质中能凝集红细胞抗体，多为IgM抗体。n不完全抗体：能使红细胞致敏，但在盐水质中不能凝集红细胞，需要通过抗球蛋白法或其他非盐水介质法进行检测，多为IgG抗体。抗IgG同种抗体、自身抗体n同种抗体：针对患者缺乏的抗原所产生的
3、抗体即为同种抗体，如Rh阴性者输血后产生的抗抗体。n自身抗体：针对自身抗原产生的抗体，如引起自身免疫型溶血性贫血。红细胞血型n红细胞血型分类： ISBT（The International Society of Blood Transfusion) 2002年，29个系统，200多个抗原 目前，30个系统，300多个抗原一、ABO血型系统1. ABO血型抗原和抗体特性2.ABO血型的遗传与生化（1）ABO基因型与表型 A型AA，AO B型BB，BO AB型AB O型O A，B是显性基因，O是隐性基因 ABO基因不是产生ABO抗原的遗传密码（2）ABO血型的生化合成nH基因 L-fucocylt
4、ransferase，19chr nA基因 N-acetyl-0-galactosaminyltransferase，9chr nB基因galactosyltransferase, 9chrnO基因无效基因，不产生转移酶，O型红细胞含有H物质基因酶合成抗原思考：A、B、AB型红细胞是否存在H物质？（3）ABH可溶性抗原形成n分泌型血型物质：ABH抗原存在于红细胞、内皮细胞、血小板、淋巴细胞、上皮细胞等，也可出现在除脑脊液外的分泌液中，唾液中最丰富。nSe，se基因与体液分泌有关，Se编码 L-fucocyltransferase，形成分泌液中的H抗原，H也可转化为A或B抗原，Se不影响红细胞上
5、ABH形成，Se为分泌型；se为非分泌型；19chr。分泌型血型物质的意义：n在RBC抗原弱表达个体中确定ABO血型。n检测唾液、羊水中的血型物质，辅助鉴定血型和预测胎儿血型。n能中和天然抗体（IgM），有助鉴别Ab性质。3.ABO亚型：n亚型：同一血型抗原的结构、性能（质）或抗原位点数（量）存在一定差异。nA亚型：A1，A2，A3，Ax，Ay，AmnB亚型：B1，B2，B3，Bx，Bm二、Rh血型系统n1940年，Landerstein和Wiener用恒河猴（rhesus）RBC免疫家兔或豚鼠，得到一种抗体，可与85%白种人红细胞发生反应。nRh系统有50个抗原，最复杂，重要性仅次于ABO血
6、型。1.遗传与发育规律n胎儿早期充分发育，脐带血/新生儿红细胞同成人。n基因位于1chr，分别命名为RHD，RHCE，RHD编码D抗原，RHCE编码不同组合的CE抗原，ce，cE，Ce，CE。2.命名和种类n三种命名方式 Fisher-Race、数字命名法、现代命名法Fisher-Race命名法（CDE命名法）3.Rh血型种类nD、E、C、e、cn抗原的强弱次序 DECce5.Rh抗体nRh抗体产生 天然抗体罕见 主要通过输血和妊娠免疫产生IgG 初次免疫后36月出现，再次免疫后3周达高峰nRh抗体种类 抗D，抗E，抗C，抗c，抗eABO和Rh血型系统的临床意义n安全输血的主要保证n新生儿溶血
7、病的诊断n器官移植的必要条件n其他：遗传学研究，法医学鉴定四、ABO和Rh血型鉴定n常用方法： 盐水介质法、酶介质法、抗人球蛋白法、聚凝胺法 试管法、玻片法、微柱凝胶法1.盐水介质法（salt medium test）n原理：根据IgM类抗体与红细胞膜上特异性抗原能发生凝集反应。 正定型：已知血型抗体试剂 + 红细胞 反定型：已知标准红细胞 + 血清鉴定红细胞上血型抗原鉴定血清中抗体n反应条件：生理盐水介质，室温，肉眼可见凝集反应n平板法，试管法，微孔板法，试管离心法最可信赖。n应用：ABO血型定型、RhD抗原定型（IgG+IgM，IgM单克隆抗体），交叉合血结果判断注意事项（一）：n标准血清
8、：健康壮年人混合血清，培养细胞株的单克隆抗体n要求： 高效价：抗A、抗B1：128 高亲和性：15s内出现凝集，3min后凝集块 1mm2 单克隆抗体具有检出A2，A2B的能力 冷凝集素效价 1：4 无菌，病毒灭活注意事项（二）：n红细胞试剂：三个健康者同型新鲜红细胞混合，用生理盐水洗涤三次。n红细胞悬液不能过浓或过淡，5%生理盐水红细胞悬液注意事项（三）：n所有器材清洁干燥n一般先加血清，后加红细胞n反应温度：IgM抗体反应最适温度为40C，为防止冷凝集素干扰，采用室温，370C反应减弱n离心时间和速度：3000g,30sn反定型不宜用玻片法n结果核对，避免笔误n正、反定型结果一致才能报告，
9、否则查找原因正反定型不一致的可能原因（一）：n操作技术上的错误：主要原因 离心过度或不足 细胞与血清反应比例不适当 阳性反应产生溶血现象而未能识别 漏加试剂、结果判读错误等 正反定型不一致的可能原因（二）：n出现假阴性的常见原因： 某些白血病患者和难治性贫血等导致ABO抗原减弱； 免疫系统尚未健全的新生儿、4月6月内婴儿、抗体水平下降的老人； 亚型红细胞抗原性弱，难以检出； 低丙种球蛋白血症患者，血清定型时不凝集或弱凝集。 正反定型不一致的可能原因（三）n出现假阳性的常见原因： 红细胞出现多凝集现象； 严重肠道革兰氏阴性杆菌感染，可使红细胞获得类B现象； 异常的血浆蛋白升高、白蛋白/球蛋白异常
10、，高浓度纤维蛋白原造成假凝集现象； 待检血清中有不规则抗体存在； 右旋糖酐、静脉注射某些造影剂等引起红细胞 类似凝集。 方法学评价n简单，灵敏度低，只适合IgM抗体n试管法：需时短，离心增强凝集，可发现亚型和较弱的反应，正、反定型皆适合n玻片法：适合大规模血型普查，反应时间长，有时漏掉弱反应，反定型不适合。2.酶介质法（enzymic medium test）：n原理和方法：主要用于Rh血型鉴定（IgG抗体）蛋白水解酶增强IgG抗体的凝集作用注意事项：nRh血型不需作反定型n每次实验均需作阳性、阴性对照方法学评价n简单经济n稳定性、准确性较差，不能检出MN、Duffy血型系统3.抗人球蛋白实验
11、（Coombs test）n原理和方法抗IgG待测红细胞 + 抗RhD（IgG）+ 抗人球蛋白红细胞凝集应用延伸：n检测红细胞同种抗体的经典方法，新生儿溶血、病、溶血性输血反应、自身免疫性溶血性贫血n直接Coombs（direct antiglobulin test, DAT）n间接Coombs（indirect antiglobulin test, IDAT）DAT：检查红细胞是否致敏IDAT：检测血清中不完全抗体4.聚凝胺介质法（polybrene test）n原理和方法 低离子强度盐溶液（low ionic strength salt solution, LISS)：降低介质离子强度，增
12、加抗原抗体结合 聚凝胺：中和红细胞表面负电荷，使红细胞发生非特异性凝集。 重悬液（resuspension)方法学评价n适于各类抗体（IgM，IgG）n快速、灵敏、可靠n对检测Kell血型系统抗体不理想，不能用肝素抗凝。5.微柱凝胶法(gel cards with microtubes)n1986年法国人Dr. Yves Lappierre发明n1994年，获美国FDA认证原理和方法n葡聚糖做成微型凝胶柱，上端为反应室，下端凝胶柱为抗原抗体凝集反应的介质。n抗原与抗体结合后离心，经过凝胶分子筛作用，游离红细胞在凝胶底部，而与抗体结合凝集的红细胞位于凝胶上部或悬浮于凝胶中。 反应室凝胶柱结果判读
13、：n阳性结果：红细胞凝集块位于凝胶表面或凝胶中，和（或）出现溶血。注意事项：n专用水平离心机n假阳性：镰型红细胞、巨幼红细胞 白细胞过多 纤维蛋白原未完全去除 细菌污染，血浆蛋白异常n假阴性：抗原抗体比例不合适n不适用于直接Coombs阳性的红细胞标本、酶处理的红细胞标本方法学评价n灵敏度和准确性高，实验结果重复性好，可长时间保存n自动化程度高，实验过程标准化，ISO9000/CE认证n成本高应用延伸：用于ABO正反定型，交叉配血、其他血型抗原检测（CcEe）、不规则抗体检测、Coombs实验凝胶柱中性胶抗人球蛋白胶特异性胶三、交叉配血（cross matching）n定义检测意义n是安全输血的重要步骤n进一步验证血型鉴定是否正确n发现ABO、Rh血型以外的其他抗体常用方法及评价结果判断（同型输血）n主侧、次侧管均无凝集、无溶血，表示配血相容，献血者血液可以输注；n出现主侧、次侧试管或单独一侧试管内红细胞凝集和（或）溶血，则表明两血不相容，献血者血液不可输注 。n同型输注是输血的基本原则n紧急情况下
