单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版副标题样式*1葡萄糖浓度的测定 考试考试实验目的及要求 掌握邻甲苯胺法法测定葡萄糖含量的原理和方法学会取液器及紫外分光光度计的使用了解葡萄糖浓度测定的意义实验仪器及试剂 772型分光光度计；试管；移液管；水浴锅邻甲苯胺试剂：硫脲2.5g，邻甲苯胺150ml及2.4%硼酸100ml，用冰醋酸溶解，在1000ml容量瓶内调至到刻度 葡萄糖标准贮存液：10mg/ml测定葡萄糖浓度的方法Folin-吴宪法： 利用葡萄糖的还原性，在与碱性铜试剂共热时，是铜离子还原成亚铜离子邻甲苯胺法：利用醛糖在热醋酸溶液中与苯胺类缩合生成青色的Schiff碱葡萄糖氧化酶法 ：利用葡萄糖氧化酶对葡萄糖的氧化作用Folin-吴宪法历史n中国旅美生化和分子生物学家吴宪在美国哈佛大学Otto Folin教授指导下，完成了题为“一个血液分析系统”的博士论文；n Folin与吴宪建立的无蛋白血滤液制备，血糖、非蛋白氮、尿素、肌酐、肌酸等测定方法，奠定了血液化学分析的基础 ；n其中以“Folin吴宪法”著称，在1920到1950年间用于世界上许多病人的诊断和治疗的追踪 Otto FolinHsien WuFolin-吴宪法原理n葡萄糖的半缩醛羟基具有还原性，在加热条件下可使碱性铜试剂中的Cu2+还原为黄色的氧化亚铜沉淀，而其本身被氧化为羧基。
n氧化亚铜可使磷钼酸还原成蓝色的钼蓝，蓝色的深度与葡萄糖的浓度成正比，故可用比色法测定钼蓝的光吸收值来测定葡萄糖的浓度葡萄糖氧化酶法原理n醌亚胺在480-550nm范围内有最大吸收峰，且醌亚胺的量与葡萄糖的量成正比，利用比色法测定醌亚胺的量即可计算出血糖的含量邻甲苯胺法原理葡萄糖在热醋酸溶液中脱水后与邻甲苯胺缩合，生成青色的Schiff碱，其颜色深浅与葡萄糖含量成正比，其反应式如下：葡萄糖标准溶液制备取10ml容量瓶6只，分别编号、 ；依次加入葡萄糖标准贮存液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0ml；以H2O稀释至10ml，混匀以上葡萄糖标准液浓度分别为50、100、200、300、400mg/100ml实验步骤123456测定管邻甲苯胺试剂（ml）5.05.05.05.05.05.05.0样品 （ml）00.10.10.10.10.10.1蒸馏水（ml） 0.1000000样品样品试剂试剂混匀后置沸水浴中煮沸15分钟，取出置冷水中冷却用分光光度计在波长630nm处进行比色，以“1”管作空白校零，读取各管吸光度实验步骤数据处理以吸光度为纵坐标，相应管中的葡萄糖浓度为横坐标，以样品 “2” “3” “4” “5” “6”为基础在坐标纸上绘制标准曲线。
根据测定管的吸光度，查标准曲线，得到未知样品中的葡萄糖浓度 实验注意事项测定血糖必须采用空腹血若用抗凝血最好采用氟化钠抗凝剂邻甲苯胺法，试剂酸度很大，操作过程需谨慎取加热试管时务必当心烫伤思考题血糖测定有何临床价值？三种测定方法各有何优缺点？。