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1、第第8 8章章 维生素的测定维生素的测定8.1 8.1 维生素维生素B6B6的测定的测定8.2 VB28.2 VB2的测定的测定8.3 8.3 高效液相色谱法测定维生素高效液相色谱法测定维生素 维生素:维持人体生理功能所必需的、含维生素:维持人体生理功能所必需的、含量极少但具有重要生理功能的、含量极微量极少但具有重要生理功能的、含量极微的天然有机物质。的天然有机物质。 维生素种类:维生素种类: 水溶性水溶性:VB1:VB1、VB2VB2、VB6VB6、VB12VB12、VCVC 脂溶性:脂溶性:VAVA、VDVD、VEVE、VKVK 维生素维生素B1B1。保持循环、消化、神经和肌内正常功能;调
2、。保持循环、消化、神经和肌内正常功能;调整胃肠道的功能;构成脱羧酶的辅酶,参加糖的代谢;能整胃肠道的功能;构成脱羧酶的辅酶,参加糖的代谢;能预防脚气病。预防脚气病。 维生素维生素B2B2。又叫核黄素。核典素是体内许多重要辅酶类。又叫核黄素。核典素是体内许多重要辅酶类的组成成分,这些酶能在体内物质代谢过程中传递氢,它的组成成分,这些酶能在体内物质代谢过程中传递氢,它还是蛋白质、糖、脂肪酸代谢和能量利用与组成所必需的还是蛋白质、糖、脂肪酸代谢和能量利用与组成所必需的物质。能促进生长发育,保护眼睛、皮肤的健康。物质。能促进生长发育,保护眼睛、皮肤的健康。 维生素维生素B5(B5(泛酸泛酸) )。抗应
3、激、抗寒冷、抗感染、防止某些抗。抗应激、抗寒冷、抗感染、防止某些抗生素的毒性,消除术后腹胀。生素的毒性,消除术后腹胀。 维生素维生素B6B6。在蛋白质代谢中起重要作用。治疗神经衰弱。在蛋白质代谢中起重要作用。治疗神经衰弱、眩晕、动脉粥样硬化等。、眩晕、动脉粥样硬化等。 维生素维生素B12B12(钴胺素)。抗脂肪肝,促进维生素(钴胺素)。抗脂肪肝,促进维生素A A在肝中在肝中的贮存;促进细胞发育成熟和机体代谢;治疗恶性贫血。的贮存;促进细胞发育成熟和机体代谢;治疗恶性贫血。 维生素维生素B13B13(乳酸清)。(乳酸清)。 维生素维生素P P。 维生素维生素PP(PP(烟酸烟酸) )。在细胞生理
4、氧化过程中。在细胞生理氧化过程中起传递氢作用,具有防治癞皮病的功效。起传递氢作用,具有防治癞皮病的功效。 维生素维生素M(M(叶酸叶酸) )。抗贫血;维护细胞的正常。抗贫血;维护细胞的正常生长和免疫系统的功能。生长和免疫系统的功能。 维生素维生素T T。帮助血液的凝固和血小板的形成。帮助血液的凝固和血小板的形成。 维生素维生素U U。治疗溃疡上有重要的作用。治疗溃疡上有重要的作用。8.1 8.1 维生素维生素B6B6测定测定 1 1、适用范围、适用范围 本标准适用于所添加维生素本标准适用于所添加维生素B6B6的测定。的测定。 测定范围为测定范围为0.080.083.5g/mL3.5g/mL。2
5、 2、 原理用水提取,在原理用水提取,在pH7pH7条件下,用荧光法条件下,用荧光法测定维生素测定维生素B6B6。维生素B6测定 3 3、 试剂和溶液试剂和溶液 3.1 pH73.1 pH7缓冲液称取缓冲液称取29.3023g29.3023g磷酸氢二钠(磷酸氢二钠(GB 1263GB 1263)和)和3.8115g3.8115g柠檬酸,于柠檬酸,于100mL100mL容量瓶中,用煮沸后冷容量瓶中,用煮沸后冷却的水,溶解并定容至刻度。混匀备用。却的水,溶解并定容至刻度。混匀备用。 3.2 3.2 维生素维生素B6B6标准贮备溶液称取标准贮备溶液称取40mg40mg(中国药典参(中国药典参照标准)
6、维生素照标准)维生素B6B6,或复合维生素(中国药典参照标,或复合维生素(中国药典参照标准)准)B640mgB640mg, B1100mg B1100mg,B250mgB250mg(精确至(精确至0.0001g0.0001g)于)于100mL100mL容量瓶中,加水溶解定容至刻度,此液容量瓶中,加水溶解定容至刻度,此液1mL1mL含含400g400g的维生素的维生素B6B6。 3.3 3.3 维生素维生素B6B6标准工作溶液标准工作溶液 吸取(吸取(3.23.2)贮备液)贮备液1mL1mL于于100mL100mL容量瓶中加水稀容量瓶中加水稀释至刻度,混匀,此液释至刻度,混匀,此液1mL1mL含
7、含4g4g的维生素的维生素B6B6。维生素B6测定 4 4 仪器设备仪器设备 4.1 4.1 荧光分光光度计;荧光分光光度计; 4.2 4.2 分析天平:感量分析天平:感量0.0001g0.0001g。 4.3 4.3 实验室用器皿实验室用器皿 容量瓶容量瓶 1000mL 1000mL,100mL100mL,50mL50mL,25mL25mL。 刻度移液管刻度移液管 10mL 10mL,5mL5mL,1mL1mL。维生素B6测定 5 5 、分析步骤、分析步骤 5.1 5.1 试样的选取和制备试样的选取和制备 选取有代表性的试样,粉碎通过选取有代表性的试样,粉碎通过0.28mm0.28mm孔筛,
8、孔筛,用四分法缩减至用四分法缩减至100g100g,密封保存,以防试样维,密封保存,以防试样维生素生素B6B6变化或变质。变化或变质。 5.2 5.2 测定步骤测定步骤 5.2.1 5.2.1 维生素维生素B6B6的提取的提取 称取试样称取试样0.50.52g2g,(精确至,(精确至0.0001g0.0001g)于)于100mL100mL容量瓶中,加水溶解后,定容至刻度,振容量瓶中,加水溶解后,定容至刻度,振荡荡1 12min2min,静置待沉清,或离心(,静置待沉清,或离心(400r/min400r/min)10min10min。 维生素B6测定 5.2.2 5.2.2 试样的测定试样的测定
9、 移取试样的上清液移取试样的上清液1mL1mL(40gVB640gVB6)于)于25mL25mL容量瓶中,加入(容量瓶中,加入(3.13.1)pH7pH7缓冲液至刻度,混缓冲液至刻度,混匀,用匀,用1cm1cm石英比色杯,置入荧光分光光度计内石英比色杯,置入荧光分光光度计内,于激发波长,于激发波长326nm326nm、发射波长、发射波长395nm395nm测定其测定其荧光强度。荧光强度。 同时做空白试验。同时做空白试验。维生素B6测定 5.2.3 5.2.3 工作曲线的绘制工作曲线的绘制 取取0.000.00,0.500.50,1.001.00,1.501.50,2.002.00,2.50mL
10、2.50mL维生维生素素B6B6标准工作液(标准工作液(3.33.3)分别于)分别于25mL25mL容量瓶中容量瓶中,加入,加入pH7pH7缓冲液(缓冲液(3.13.1)至刻度,混匀,用)至刻度,混匀,用1cm1cm石英比色杯,置入荧光分光光度计内,于激石英比色杯,置入荧光分光光度计内,于激发波长发波长326nm326nm、发射波长、发射波长395nm395nm测定其荧光强测定其荧光强度,以荧光强度为纵坐标,维生素度,以荧光强度为纵坐标,维生素B6B6量为横坐量为横坐标,绘制工作曲线。标,绘制工作曲线。维生素B6测定 6 6 分析结果计算和表述分析结果计算和表述 维生素维生素B6B6的含量(的
11、含量(mg/kgmg/kg)按下式计算:)按下式计算: VB6VB6(mg/kgmg/kg)MD/WMD/W(1000/10001000/1000)MD/W MD/W 式中:式中:MM工作曲线上查得维生素工作曲线上查得维生素B6B6含量,含量,g/mLg/mL; WW试样的质量,试样的质量,g g; DD试样的总体积,试样的总体积,mLmL。维生素维生素B6B6测定测定 7 7 、允许差、允许差 7.1 7.1 每个试样称取两份平行测定,取算术平均值每个试样称取两份平行测定,取算术平均值为测定结果并保留两位小数。为测定结果并保留两位小数。 7.2 7.2 维生素维生素B6B6含量少于含量少于4
12、0mg/kg40mg/kg以下,平行测定以下,平行测定结果相对差值不大于结果相对差值不大于1010,维生素,维生素B6B6含量大于含量大于40mg/kg40mg/kg的平行测定结果相对差值不大于的平行测定结果相对差值不大于5 5。/P/P8.2 8.2 维生素维生素B2B2测定测定 1 1、适用范围、适用范围 本标准规定了饲料中维生素本标准规定了饲料中维生素B2B2测定方法。测定方法。 本标准适用于维生素本标准适用于维生素B2B2的测定。待测液中维生的测定。待测液中维生素素 B2B2检测浓度为检测浓度为0.050.050.2g/mL0.2g/mL。维生素B2测定 2 2、方法原理、方法原理 维
13、生素维生素B2B2(即核黄素(即核黄素C17H20N1O6C17H20N1O6)在)在440nm440nm紫外光激发下产生绿色荧光,在一定浓度范围内紫外光激发下产生绿色荧光,在一定浓度范围内 其荧光强度与核黄素浓度成正比。用连二亚硫酸其荧光强度与核黄素浓度成正比。用连二亚硫酸钠还原核黄素成无荧光物质,由还原前后荧光钠还原核黄素成无荧光物质,由还原前后荧光 强度之差与内标荧光强度的比值,计算样品核黄强度之差与内标荧光强度的比值,计算样品核黄素的含量。素的含量。维生素B2测定 3 3、试剂和溶液、试剂和溶液 3.1 3.1 盐酸溶液,盐酸溶液,0.1mol/L0.1mol/L:将:将8.5mL8.
14、5mL盐酸(盐酸(GB GB 622622)用水稀释至)用水稀释至1000mL1000mL。 3.2 3.2 盐酸溶液,盐酸溶液,1mol/L1mol/L。 3.3 3.3 氢氧化钠(氢氧化钠(GB 629GB 629)溶液,)溶液,1mol/L1mol/L。 3.4 3.4 冰乙酸(冰乙酸(GB 676GB 676)。)。 3.5 3.5 冰乙酸溶液,冰乙酸溶液,0.02mol/L0.02mol/L:将:将1.8mL1.8mL冰乙酸用冰乙酸用水稀释至水稀释至1000mL1000mL。 3.6 3.6 高锰酸钾(高锰酸钾(GB 643GB 643)溶液,)溶液,40g/L40g/L。 3.7
15、3.7 过氧化氢(过氧化氢(HG 31082HG 31082)溶液,)溶液,100mL/L100mL/L。现用现配。现用现配。 维生素B2测定 3.8 3.8 核酸素标准溶液核酸素标准溶液 3.8.1 3.8.1 核黄素贮备液核黄素贮备液:核黄素(中国药典参照标准):核黄素(中国药典参照标准),于五氧化二磷干燥器中干燥,于五氧化二磷干燥器中干燥24h24h,称取,称取0.0500g0.0500g,溶,溶解于解于0.02mol/L0.02mol/L乙酸溶液(乙酸溶液(4.54.5)中,在蒸汽浴上恒速搅)中,在蒸汽浴上恒速搅动直至溶解,冷却后稀释至动直至溶解,冷却后稀释至500mL500mL。盛入
16、棕色瓶滴加甲。盛入棕色瓶滴加甲苯覆盖,低温(苯覆盖,低温(4 4)保存。)保存。 该溶液每毫升含该溶液每毫升含0.1mg0.1mg核黄素。核黄素。 3.8.2 3.8.2 核黄素贮备液核黄素贮备液:取核黄素贮备液:取核黄素贮备液(4.8.14.8.1)10mL10mL用用0.02mol/L0.02mol/L乙酸溶液稀释至乙酸溶液稀释至100mL100mL,盛于棕色,盛于棕色瓶中滴加甲苯覆盖,低温(瓶中滴加甲苯覆盖,低温(4 4)保存。)保存。 该溶液每毫升中含该溶液每毫升中含10g10g核黄素。核黄素。 3.8.3 3.8.3 核黄素标准工作液:取核黄素贮备液核黄素标准工作液:取核黄素贮备液(4.8. 24.8. 2) 10mL10mL,用水稀释至,用水稀释至 100mL 100mL。现用现配。现用现配。 该溶液每毫升中含该溶液每毫升中含1g1g核黄素。核黄素。维生素B2测定 3.9 3.9 荧光素标准溶液荧光素标准溶液 3.9.1 3.9.1 荧光素贮备液:称取荧光素(荧光素贮备液:称取荧光素(Q/HG 22786Q/HG 22786)0.0500g0.0500g,用水稀释至,用水稀