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1、每代细胞每代细胞滞留期 lag phase概述 传代:恢复期 适应期 原代培养:开始时细胞 必须经历的时期2种情况 分散细胞接种:游离- - 吸附- -潜伏期 组织块: 潜伏期 滞留期过程: 游离:悬浮,胞质回缩, 全部细胞变为圆球形 吸附:贴附底物,一般24小时内 贴壁 潜伏期:可有运动活动,基本无增殖, 少见分裂相 滞留期影响因素滞留期的长短与细胞种类、按种的细胞密度、培养条件等因素有关。1.细胞密度 接种分散细胞,接种的密度越大、数量越多， 细胞群体越容易适应体外环境，潜伏期就短。 相反，即便是在很小的培养空间内， 如接种的细胞数量不够大，潜伏期仍会较长 滞留期-影响因素2.细胞类型传代
2、培养的细胞之滞留期 比原代培养的细胞短。 单个细胞快,细胞大团慢,组织块慢连续细胞系与发生恶性转化的细胞 比有限细胞系与正常二倍体细胞的短来源 胚胎组织:短, 成体:长 滞留期-影响因素3.细胞机能状态 不良者慢4.培养条件 培养液,pH,底物 不利:污染,有毒 指数生长期 exponential (log) phase概述 潜伏期结束后 即开始指数生长期， 或称对数生长期。 细胞生长所需 各种营养条件具备后进入特点 是细胞增生最活跃、活力最旺盛的阶段 培养物中细胞数量呈指数增长, 细胞群体均一 实验理想 判断细胞生长的指标判断细胞生长的指标指数生长期内细胞分裂活动的程度(增殖活性) 可作为判
3、断细胞生长是否旺盛的重要指标1.有丝分裂指数(MI):培养物中分裂相数量占 全部细胞数量的百分比 统计时，每瓶至少需计数1000个细胞。 一般细胞的MI约为0.10.5% 原代培养物的MI比继代培养物低。 连续细胞系和肿瘤细胞高，可达3%5%。2.细胞群体倍增时间:培养物中细胞数量翻倍的平均时间间接反映细胞活力和增殖活动强弱，有3.MTT法：反映细胞内一种酶活性程度4.标记核苷酸(3H-TdR)掺入量：反映DNA合成细胞的增殖活性与细胞种类、供体年龄以及培养条件等多种因素密切相关。细胞生长一定阶段(指数生长期一般持续35 d）,即可长满培养器皿，相互汇合成片 (铺满 confluence汇合)
4、 铺满：细胞彼此连接成层长满器皿底壁。(细胞相互之间紧密接 触，所有可供生长的区域己被利用)。正常细胞(非转化细胞)，当细胞相互接触 连接成片，出现接触抑制 接触抑制以后，虽然运动受抑制， 但只要营养成分充足，仍可短期的分裂增殖 只有当细胞密度增大到一定程度， 细胞便不再分裂增殖。 为密度依赖性细胞生长抑制当细胞分裂停止后，细胞数量即不再增加 进入平台期 平台期 Plateau (stationary) phase概述 细胞铺满后再1-2倍增, 进入 细胞达饱和密度, 可存活 仍有代谢活动，但基本不分裂 细胞数量维持在某一水平上， 生长活动停滞. 饱和密度：在培养细胞的平台期，可供细胞 生长的
5、底物面枳己被生长的细胞所占滿，细 胞虽尚有活力但已不再分裂增殖。细胞数目 不再增加时，即达细胞生长的饱和密度 特点 (1)细胞数量 细胞达饱和密度 密度抑制 停止生长原因: 细胞数量多、生长地区占满、 营养消耗、培养液中代谢废物积聚渐多 细胞停止生长。即使经常更换培养液， 细胞也会变性,从生长基质表面脱落、死亡 唯有进行传代方可缓解特点 (2)细胞活动小, 细胞膜的活动小(3)生长组分下降: 010%(4)及时转代 若细胞已中毒，即使传代， 也会影响下一代细胞的功能状况 培养细胞的生长曲线培养细胞都可在接种以后的不同培养时间，计数培养物的细胞数量(一般以细胞密度代替)，绘制出 时间密度曲线， 即培养细胞的生长曲线不同种类的细胞的生长曲线各有其特点，可反映细胞的生物学特征
