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1、WATERS髙效液相的标准操作规程（SOP）适用于所有使用此仪器者1流动相的处理1.1过滤溶剂溶剂在使用前定要用0.5pm的过滤器过滤，如果使用固体化学试剂（缓冲盐）配制 流动相，过滤特别重要，不能让固体微粒污染泵，阻塞进样器和柱头过滤片。木实验室 有水溶性和脂溶性两种过滤膜供选择（反光面朝上），过滤水溶性流动相吋（如甲醇/ 水），先用12ml甲醇润湿过滤膜，有助于快速抽滤。1.2保持储液瓶的淸洁用普通溶剂瓶作流动相储液器应不定期废弃瓶子，最后次应用HPLC级的水或溶剂 清洗，不能在清洗过程中留下污迹。1.3保证溶剂的质量沱要用HPLC级的溶剂，水也应达到HPLC级，同样也要便用高纯度的缓冲盐
2、。1.4故障及解决方法1.4.1流动相脱气不充分流动相受热，或者流动相不同组分混合吋会有气体产生，气泡进入泵内引起斥力波动， 增加噪音，色谱图上出现毛刺。对试用下列方法解决问题：流动相再脱气；采用更有效 的脱气方法或两种方法配合使用；改系统内混合为系统外预混合。1.4.2流动相供给不畅流动相用完，管道中吸入气体引起泵床力不稳。应经常观察储液器中流动相的杲，加足 流动相保证所有的样品分析完毕。输液管道上装沉子沉至瓶底，储液器盖上留小孔止 好夹住进液管，使英不能上下移动。过滤器阻塞引起管道和泵腔空化，斥力不稳。过滤器被微粒所阻塞或长芻，去掉过滤器 后如果系统运转止讯，说明己找出问题，换上新的过滤器
3、则可有吋候换上新的过滤器 仍然不畅，那就需耍查杳流动相的制备过程，或者换大孔径的过滤器。不管如何，流动 相都需要重新过滤。流速过高、阻力大，造成空化现彖，这是山于过滤器孔径、管道内径、流速和溶剂黏度 等引起的。如果流速大于10ml/min,常会出现这种现象。使用下列方法解决：（1）使 用低流速；（2）换大孔径的过滤器；（3）增加进液管道内径；（4）抬高或加圧储液 器；（5）不用过滤器，但流动相一定要先过滤；（6）储液器盖子太紧，在储液器内 形成真空，打出的流动相不连续。应松开盖子或留有1mm的缝隙；（7）进液管道阻 塞或弯曲使泵抽不到液，注意调整进液管道或更换新的。:其它问题包括渗漏或接头松动
4、、 泵部件损坏等，都能引起供液不正常。1.4.3流动相和储液器被污染山于污染，噪音越來越大，检测器基线上升。污染物町能被泵以稳定的浓度打入系统， 而再以稳定的浓度流出来，所以在色谱图中不出多余的峰。用梯度洗脱时弱流动相可以 使污染物聚在柱顶，流动柑强度增加后污染物町能被洗脱出來个大的伪峰。有时基线 噪音突然増大或突然提高，都是因为反复加进新的流动相或系统用得太久（通宵）所造 成的。新加进的流动相有污染物或者流动相长霉，繁殖了细菌。脏的储液器会污染淸洁的流动相。每种流动和备有专用的储液器，或者定期报废储液器。流动相污染来自这几个方面：试剂质量不高，玻璃器皿不合格；微生物的影响；配制 流动相吋操作
5、不当等。因此要求高纯度化学试剂和HPLC级溶剂。玻璃器皿按规肚淸 洗丁净。为防止微生物生长，每天耍用甲醇淸洗系统。怀疑系统内生长了微生物，对用 稀硝酸冲洗既可（注意不要损坏柱和管道系统）真空脱气时防止泵油带入流动相。用淸洁的惰性塞子、搅棒、过滤器和玻璃器皿配制流 动相。己经污染的流动相一定要废弃掉。2仪器组成及电源本系统可进行多达四元溶剂的梯度洗脱操作2.1仪器组成 本系统ill Waters 600E多溶剂输送系统，四通道在线过滤，7725i进样 器，996型二极管阵列检测器，联想品牌机等虹元组合而成 2.2电源仪器使用时按 泵、检测器、打印机和计算机的顺序,依次接通电源。3 600E高压输
6、液泵的操作3.1液相色谱系统泵的流速在0.1-10.0ml/minZfn,要保持泵的良好操作性能，必须维 护系统的淸洁，保证溶剂和试剂的质呆，流动相的过滤和流动相的脱气。下而列出预防 泵故障的注意出项：（1）用高质虽的试剂和HPLC级溶剂；（2）过滤流动相和溶剂;（3）脱气：（4）工作时使用泵头的排水孔不停的用10%甲醇冰的混合溶剂冲洗柱塞 杆；（5）不让水和腐蚀性溶剂滞留在泵中；（6）定期更换垫圈；（7）加润滑油。处 于良好操作状态的泵，应该使色谱图上的基线平稳，保留时间的重复性良好。等度洗脱 时压力波动小于2%o梯度洗脱时压力变化应是缓慢和平稳的。3.2常规准备工作包括：开通电源，溶剂脱气
7、，泵头及溶剂管路除气泡及泵的出动。3.2.1接通系统电源，控制器开通后进行自检，数秒后通过，接受操作指令。3.2.2溶剂瓶脱气打开四通道在线过滤器，脱气15mino3.2.3系统中气泡的排除泵启动时，调节所需要的通道流速为1ml/min,该通道如A 调节为100%。将抽液阀旋至draw位，用针筒抽A液10ml,将抽液阀旋至inject位， 并推出针筒中的液体，将抽液阀旋至run fto此时参比阀排出的液体应连续，如不连续 则重复以上抽液排液操作。重复以上操作分别抽取B, C, D液10mlo将流速减小至0. 2ml/min,将参比阀关闭。柱前气泡如不能排除，则管路在不与色谱柱连接的情况下， 提
8、高流速至9ml/min,数分钟后将流速减至1 ml/mirio ）3.3等度（Isocratic）操作 按direct键，进入isocratic菜单。依次设定流路配比，M 气流速，柱温。设定方法如下：按光标移动键，至闪烁光标出现在所需设定位置上。用 数宁键设定数值，按enter键确认，注意每个流动相英纽.成之和应为100%,设定流速 为0.1ml/min,逐渐増加流速至实验所需的流杲，待系统平衡后开始实验。3.4梯度（Gradient）洗脱操作梯度洗脱需要编制梯度表和程序事件（Program even t）表,在OPERATE GRADIENT屏幕时运行。按program method键，进入
9、梯度编 辑窗口。移动光标键至table #处，输入数字键（1-15）,按enter键，将光标移至梯度衣 第行，依次输入流速和流量配比，分别按enter键确认光标移至第二行，依次输入 梯度时间，流速，配比及曲线号（1-11）,重复以上操作，至梯度衣全部编完，按显示屏 对应功能键save,并记住table #。按Program event键，进入程序事件表的编制， 移动光标键金table#处，输入数字键（1-15）,按enter键，将光标移至事件农第-行， 依次输入事件号(1-10)和开关，按enter键确认，光标移至第二行，依次输入事件吋间， 事件号，和开关，按enter键确认，重复以上过程至事
10、件表完成，按save键储存。3.5梯度程序的运行 按operate methods键，进入梯度方法运行窗口，将光标移至ta ble处，输入欲运行的表号(1-15),按显示屏对应功能键start run,运行。在设置时， 如有疑问，可用HELP提示每个设置的含义。3.6实验结束对泵进行冲洗后,关闭流量,注意流速必须要逐步变化。冲洗顺序:如果 使用有缓冲液的流动相，则停泵前-雄要用HPLC级纯水淸洗HPLC系统。同吋用淸 水淸洗柱塞杆。若停泵存放时间超过天，则停泵前还需用水/甲醇淸洗系统。3.7关闭电源开关。仪器采购指南：液相色谱色谱柱 制备液相色谱关 键 词：waters高效液相sop标准操作规
11、程啤支持:0 次 4感谢：0 次 32008-10-28 10:21:53以W1O|J|的微量进样器直接进样。进样后，快速旋转进样器的把柄，立接把样品进到 色谱柱的柱头。4.2在做标准曲线时，进样浓度应山低到高。5信号检测及数据处理5.1本系统用996型二极管阵列检测器,波长范围在190-800nm,接受全波长光谱。在分析过程中测定吸收信号山计算机进行处理，显示色谱图或光谱图，列出数据处理 结果。测量结束时按规定退出程序后关机。:cA P rSe5.2点灯，指示灯亮。诊断，检杏校准。状态灯点亮，处于准备状态。稳定1小时后 可以用于采集数据。5.3帘规准备工作 按色谱仪、检测器、打印机及计算机顺
12、序接通电源。5.4 进入 Millennium32 菜单,按 Login,输入 User Name and Pass Word Jh,按 0 Ko5.5 按 Configure System 进入子菜单，在建 New chromatography System,先删 III的，单击 Project ,建 New chromatography System,选择所需要的 W600,及检 测器(PDA or ELSD)，输入 System Name,按 Finisho5.5使用Run Sample窗口可采集处理和报告数据5.5.1 从 Millennium32 登录窗口,双击 Run Sample
13、。7 TL5-g5.5.2从Run Sample对话框，选择色谱系统并中击确定，将建立BusLAC/E连接。5.5.3从菜单条中选择EditNew Method Set单击Yes。5.5.4单击New Create以创建新仪器方法。屏幕上显示Edit Instrument Method 单击各仪器。以编辑仪器参数，然后选择FileSave As以命名、标记(约束应用环境)并保存方法。然后选择FileExit。5.5.5出现Select Instrument Method对话框。选择刚刚创建的方法，然后单击Next。向导将提示用户输入适用于方法的信息。5.5.6 Method Set Edito
14、r对话框将出现。核实信息,然后选择File Exit。5.5.7在Run Sample对话框中，单击Sample选项卡,在样品表中输入样品信息。 使用水平滚动条访问每行中的所有信息。5.5.8单击工具条上的（Amounts）,为各标准样晶瓶输入纽份名称和浓度。选择Fi le Exit,返回 Run Sample。5.5.9核实运行模式是否设置成Run And Process或Run And Reporto如有必要，使用下拉列表更改该条目。5.5.10 选择 File Save Sample Set Method 以保存方法。5.5.11使用Intrument Method下拉列表选择仪器方法。
15、单击设置。5.5.12要收集数据，请单击工具条上的（绿灯）。5.6使用处理向导创建处理方法5.6.1 从 Millennium32 登录窗口，双击 Browse Project 选择耍使用的 Project5.6.2 W击通道选项卡，然后卩击工具条上的（Review）。出现杳看屏幕.5.6.3单击工具条上的（Process Method Wizard），然后单击确定。从下拉列表中选择适为的处理类烈，然后单击确定。向导将引导您逐步完成积分和校止参数的设置。5.6.4要在处理方法中输入某纽份的多个浓度，或给它添加高级积分，请选择View 处理方法布局5.6.5选择FileSave As Metho
16、d Set,将该处理方法保存为方法组的部分。5.7查看结果5.7.1在Project窗口中，单击Result选项卡5.7.2加亮显示感兴趣的样品（未知样或标准样），然后单击Review图标。查看窗口 显示色谱、保留时间和组份名称。5.7.3单击窗口底部状态条中的Peak选项卡,显示峰信息。对于PDA数据，如果在 处理方法中选择了 Peak Purity和Library,则会显示此两者的信息。5.7.4要查看校止曲线，请选择Window Calibration05.7.5要杏看结果的所有详细信息，请选择Window Resulto 5.7.6要打印结果,请从Project窗口单击Result选项卡，然后选择要打印的结果。单 击
