《PFAFFL Method for real timePCR》由会员分享，可在线阅读，更多相关《PFAFFL Method for real timePCR（2页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、PFAFFL Method for real time PCR简介：荧光定量PCR方法：用于相对定量。适用条件：目标基因与内标基因扩增效率相差较大，特别适用于国内习惯于将内标与目标分开扩增。优点：不需要标准曲线，结果比delta-delta-Ct法更加精确。缺点：需要知道在Ct值处的扩增效率，好在OM3已经可以提供该值。数学推导：M01：处理1目标基因初始拷贝数 Mn1：处理1目标基因n次循环后拷贝数M02：处理2目标基因初始拷贝数 Mn2：处理2目标基因n次循环后拷贝数N01：处理1内标基因初始拷贝数 Nn1：处理1目标基因n次循环后拷贝数N02：处理2内标基因初始拷贝数 Nn2：处理1目标
2、基因n次循环后拷贝数EM：目标基因扩增效率 EN：内标基因扩增效率CtM2：处理2目标基因的Ct值 CtM1：处理1目标基因的Ct值CtN2：处理2内标基因的Ct值 CtM1：处理1内标基因的Ct值目标基因扩增结果：Mn2=M02(1+ EM)nMn1=M01(1+ EM)n将Ct带入：Mct2=M02(1+ EM)CtM2=A(域值)Mct1=M01(1+ EM) CtM1=A(域值)两式相除得：M02/M01=(1+ EM) CtM2CtM1 1同理得：N02/N01=(1+ EN) CtN2CtN1 2两个处理的目标基因相对表达量为：(利用1式和2式)(M02/N02) ：（M01/N01）=(1+ EM) CtM2CtM1/(1+ EN) CtN2CtN1
