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1、支原体快速培养诊断儿童肺炎支原体感染的临床研究萱燕芬 范静 刘乾 夏 马玲娣*（南京医科大学附II常州第二人民医院中心实验室，常州213003 ）摘要：目的 探讨肺炎支原体（MP）快速培养法在诊断儿童MP感染中的临床 价值，并分析其影响因素。方法 MP快速培养鉴定患儿咽试子标本，被动凝 集法检测血清MP抗体，分析MP感染的相关临床因素。结果 MP快速培养与 MP-Ab检测诊断MP感染的阳性率基本一致，差异不大（P二0.556）。女性儿童 MP培养的阳性率（46.26%）略高于男性（42.16%）。3-5岁幼儿的MP培养阳性 率（54.05%）明显高于其他各组（PV0.001 ）。冬、春季MP培
2、养阳性率分别为 48.05%和 49.03%,显著高于夏秋两季（26.26%和 36.97%） （PV0.001）。MP 感 染患儿体温增高、咳嗽、咳痰等症状与MP培养结果无明显相关性，血液常规分 析中性粒细胞比值显著上升，与其他呼吸道感染相似，尚不能作为诊断MP感染 的独立指证。结论 MP感染冬春易发，儿童易感。MP感染缺乏特界的临床症 状和体征,MP快速培养对早期快速诊断儿童MP感染具有重要临床价值和意义。关键词：肺炎支原体；快速液体培养；早期诊断；抗体检测通讯作者：马玲娣 (Email： lingdimawsh), 0519-88107307Clinical study on MP ra
3、pid culture for diagonosis of mycoplasma pneumoniae infectionDONG Yan-fen, FAN Jing, LIU Qian, XIA Lei, MA Ling-di*.Laboratory center, Changzhou Second Hospital, Nanjing Medical University, Jiangsu 213000, ChinaCorresponding author： MA 厶ing-di. (Email： lingdimavvsh I)Abstract Objective To evaluate t
4、he clinical value of rapid culture of Mycoplasma Pneumoniae (MP) in diagnosis of MP for children and explore the potential influence factors related to the MP rapid culture. Methods The rapid MP culture was made for acute respiratory infections9 throat swabs, and passive agglutination detected serum
5、 MP antibody. Meanwhile the multiple related factors which can influence the MP infection were analyzed Results Female children patients positive rate of MP cultivation was 46.26%; higher than male childrens 42.16%. The positive rate of rapid MP cultivation for children aged 3-5 years is 54.05%, hig
6、her than the other groups (p0.001 ). The results of rapid MP cultivation was different in different seasons. The positive rate of rapid MP cultivation in winter and spring are 48.05% and 49.03%, respectively, obviously higher than that in summer and autumn (26.26% and 36.97%, respectively) (p0.00l).
7、 Moreover, the positive rate of rapid culture for MP was in line with the rusults of serum of MPAb detection (p=0.556). No evidence was found between the commen clinical signs such as fever, cough, expectoration and infection of Mp The increasing percentage of blood neutrophile granulocyte was simil
8、ar to the respiratory infection resulting from the other pathogenic microorganism, suggesting this can not be viewed as an independent index for diagnosis of MP inflection. Conclusion MP inflection is common in both winter and spring, children and old people is easily infected group. Children aged 3
9、-5 years is susceptible to MP infection. The patients with MP inflection is lack of special clinical sings and symptoms. The rapid MP cultivation plays a significant role in early rapid diagnosis of infection with MRKey words: Mycoplasma Pneumoniae; Rapid culture; Early diagnosis; Antibody detection
10、肺炎支原体（mycoplasma pneumoniae, MP）是能独立生长的最小微生物，大 小约为200nmo MP除引起上呼吸道感染、支气管炎、肺炎等急性呼吸道感染外, 亦可引起机体多系统多脏器的损害山。MP感染可发牛于任何年龄，以儿童居多0。 MP感染多缺乏典型的临床症状和体征，临床常通过咽拭子聚合酶链反应（PCR）法 和血清MP被动凝集法（MP-Ab）检测，但受病程和条件制约，早期诊断较为困难。 为了探讨MP快速培养在诊断肺炎支原体感染中的临床价值和意义，我们对我院 儿科收治的2011例疑似MP急性呼吸道感染患儿进行了MP快速液体培养，以了解 不同年龄及性别患儿MP感染的发生情况及相关
11、的影响因素，并将其结果与 MP-Ab检测法进行了比较，现将结果报告如下。1资料与方法1.1病例选择2008年5月-2009年4月于我院就诊的疑似MP急性呼吸道感染患儿2011 例，其中入院收治患儿383例，门诊就诊患儿1628例。患儿按年龄分为4组： 婴儿期（W1岁）139例，幼儿期（12岁）294例，学龄前（35岁）803例， 学龄期（612岁）775例。所有患儿均于就诊当日由儿科护士无菌采集咽试子标 本，同一病人只取首次采样结果进行分析。1.2方法121 MP快速液体培养：MP快速鉴定培养基购自陕西百盛园生物技术科技公 司。操作严格按试剂说明进行：以无菌生理盐水浸湿棉拭子，在就诊患儿口咽喉
12、 部（最好是扁桃体发炎部位）捻转数次后，取出并迅速置于已打开盖的MP快速 鉴定培养基小瓶中，在瓶内搅动数次后，去除咽拭子瓶外多余部分，盖上瓶塞， 将培养瓶置于37C孵箱中，培养24h后观察结果。结果判断：24h后瓶内培养基 颜色由原来的红色澄清变成黄色澄清判为阳性，培养基颜色保持不变或变浑浊判 为阴性。1.2.2 MP-Ab检测：被动凝集法SERODIA-MYCOTT MP-Ab诊断试剂盒购自 口本富士瑞必欧株式会社。检测原理：人工合成的MP （Mac株）细胞膜致敏的 明胶颗粒可与人血清中存在的MP-Ab （IgA+IgM+IgG）发生肉眼可见的凝集反 应，通过观察其凝集反应的发生对患儿血清中
13、的MPAb进行半定量分析。无菌 抽取患儿2ml全血，离心后去除红细胞及其它有形成分，在微量反应板上按倍比 稀释法依次加入血清、血清稀释液和明胶颗粒，室温静置3h后，通过平板观测 器与标准凝集图像进行对比，读取结果。结果判定：样品与未致敏粒子（阴性对 照）（1 ：20稀释）的反应判为阴性（），与致敏粒子（1： 40稀释）反应判为（ + ）, 以出现阳性反应时未致敏粒子的最终稀释倍数作为MP-Ab抗体的滴度；此外， 不论样品与未致敏粒子呈现何种反映图像，只要样品与致敏粒子（1： 40稀释） 无反应即可判为阴性。1.2.3 MP快速液体培养与MP-Ab血清学检测结果比较：对临床上已确诊为急 性呼吸道
14、感染，疑似MP感染收治入院的200名患儿留取咽拭子标本进行MP快 速培养，同时常规留取患儿血液标本，被动凝集法检测血清中MP-Ab滴度，对 两种方法获得的检测结果进行比较，以评价两种检测方法用于MP感染实验室诊 断的吻合性和临床符合率。1.2.4不同性别、年龄、季节MP培养结果分析：统计不同性别及年龄组患儿中 MP快速培养的阳性率，研究MP感染的发牛和分布状况，分析年龄或性别与 MP感染的关系；同时将样本按采集时间做如下分组：春（35月份），夏（6-8 月份），秋（911月份），冬（12-2月份），分析不同季节采样MP培养的阳性率, 了解MP感染发生率与季节的关系。1.2.5 MP感染临床症状
15、与MP培养结果的多因素相关分析：收集其中194例疑 似MP感染入院呼吸道感染患儿的临床病例资料，调查了患儿感染后的一般情况 及临床基本症状体征（包括咳嗽、咳痰、体温等），同时留取患儿血液标木行血液常规分析，进一步分析其临床症状、体征、实验室检查结果与MP感染的关系。SPSS 13.0软件进行数据的统计学分析，单因素分类计数资料行卡方检验,P0.05 有统计学意义；多因素因素相关分析采用logstic法进行。2结果2MP培养与MP-Ab检测结果比较检测T 200例患儿，其中55例MP培养阳性（27.50%）, 49例MP-Ab检测 阳性（24.50%）,两种方法所得到的MP阳性率无显著差异（表1
16、）。此外，200 例患儿中128例患儿两种方法得到的结果较为一致，其中16例MP培养和MP-Ab检测均为阳性，112例均为阴性；72例患儿结果MP培养和MP-Ab检测的结果 差异较大，但总体分析两种方法所得到的检测结果一致性不佳(Kappa-Value=0.066)(表 2,图 I)。表1 MP培养与MP-Ab检测阳性率分析(n=200)Analysis of the MP culture and MP-Ab positive rate (n = 200)阳性例数阳性率()配对卡方检验MP快速培养MP-Ab检测554927.5024.500.556表2 MP培养与MP-Ab检测结果比较(n=200)Comparis of the results of MP culture and MP-Ab test (n = 200)MPAb(+
