《蟾毒灵大鼠在体肠吸收机制探究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《蟾毒灵大鼠在体肠吸收机制探究（10页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、蟾毒灵大鼠在体肠吸收机制探究作者：刘颖冯年平许洁巫珊张欣【摘要】目的研究蟾毒灵的大鼠在体肠吸收机制。方 法采用大鼠在体肠单向灌流吸收实验模型，并应用重量法校 正灌流液体积，考察吸收部位、药物浓度、pH值及P糖蛋 白(P-gp)抑制剂对药物吸收的影响。结果蟾毒灵的吸收速率 常数(Ka )和表观吸收系数(Papp )分别按照空肠、回肠、十二指肠、结肠的顺序下降。2-20 pgm“的药物浓度对Ka和Papp无显著影响(P 0.05 );灌流液pH值对药物吸 收有影响；含P-gp抑制剂组与不含P-gp抑制剂组相比，Ka 和Papp无显著性差异(P 0.05 b结论蟾毒灵为全肠段吸收，吸收机制为被动扩散
2、，且P-gp对药物的小肠吸收基本 无影响。【关键词】蟾毒灵；肠吸收；单向灌流Abstract : ObjectiveTo evaluate bufalin in situ in testinal absorption mecha nism. MethodsThe rat single-pass intestinal perfusion technique was applied, and the gravimetry was used to correct the perfusion volume. The concentration of bufalin was determined by
3、HPLC. The effects of absorption site, drug concentration, pH value and P-glycoprotein (P-gp) inhibitor on bufalin absorption were studied. ResultsThe order of the drug absorptio n constan t(Ka) and apparent absorption coefficient(Papp) was as follows : jejunum ileum duodenum col on. Drug con centrat
4、io n had little effect on Ka and Papp (P 0.05).pH value of the drug solution affected drug absorption. There was no significanee in Ka and Papp between presence of P-gp inhibitor and no P-gp inhibitor( P 0.05 ) ConclusionBufalin can be absorbed at all intestinal segments. The absorption of bufalin i
5、s a passive diffusion process and not affected by P-gp.Key words : Bufalin; Intestinal absorption; Single-pass intestinal perfusion蟾毒灵是名贵中药蟾酥Venenum Bufonis中的一种有 效成分。蟾毒灵具有较强的抗肿瘤作用，作用机制涉及诱导 细胞凋亡、分化、抑制肿瘤的血管生成等1 3 o近些年， 有学者对蟾毒灵脂质体、透皮给药制剂等方面进行研究报道 4,5,但有关其在体肠吸收的研究未见报道。研究药物 体内吸收部位和机制是药物制剂处方前研究的重要内容，为 剂型的
6、设计提供生物药剂学依据。本实验采用大鼠在体肠段 原位单向灌流法考察蟾毒灵的吸收部位及探讨吸收机制，为 蟾毒灵的制剂研究提供理论依据。1器材1.1试药蟾毒灵原料（江西本草天工科技有限公司）； 蟾毒灵对照品（sigma公司）；盐酸维拉帕米标准品（中国生 物制品检定所b空白灌流液（Krebs-Ringers营养液，自配， 每 1 000 ml 含 NaCI 7.8 g , KCI 0.35 g , NaHCO31.37 g , NaH2PO4 0.32 g , MgCI2 0.02 g ,葡萄糖 1.4g ）;甲醇（色 谱纯，上海安谱科学仪器有限公司）;其余试剂均为分析纯。1.2仪器HL-2B数显恒
7、流泵（上海沪西分析仪器厂）; 红外灯（上海安大照明电器有限公司）;Angilent1200series 高效液相色谱仪;Agilent G1314A紫外检测器;Agilent 8453紫外-可见分光光度计；BP210S电子天平（德国 Sartorius ） PHS-3S型pH 1+（上海精密科学仪器有限公司）; DKB-501A型超级恒温水槽（上海精宏实验设备有限公司L1.3动物SD大鼠，清洁级，雄性（20020 ） g，上 海中医药大学实验动物中心提供，合格证号 SCXK（沪）2003-0002。2方法与结果 2.1 HPLC分析方法的建立 2.1.1色谱条件色谱柱为Diamonsil OD
8、S C18色谱柱(250 mmx4.6 mm,5 pm, column No : 99903 );流动相为甲醇:水(70:30 );流速1.0 mlmin/ ;柱温30C ;检 测波长300 nm ;进样量20 pl。2.1.2方法学验证 用Krebs-Ringes营养液分别配制蟾毒灵溶液、维拉帕米溶液。分别取上述两种溶液及空白Krebs-RingerJs营养液进样，在“2W项下色谱条件下测定, 色谱图如图1 3所示。空白Krebs-Ringers营养液及维拉 帕米在此条件下对蟾毒灵的测定均无干扰。精密称取蟾毒灵 对照品适量,用空白Krebs-RingerJs营养液配制0.2 , 1.0 ,
9、2.0 , 5.0 , 10.0 , 15.0 , 20.0 pg ml/ 的蟾毒灵溶液，进样， 测定。以蟾毒灵峰面积(A )对浓度(C)作线性回归，得蟾毒灵的标准曲线方程为：A=13.107C-0.476 6 , r=0.999 5(n=3)o线性范围0220pg ml/。高、中、低3种浓度 的回收率为98.2%-101.1%( n=5 )，日内、日间精密度RSD 均小于2% ( n=5 L图1空白Krebs-RingerJs营养液HPLC图(略)2.2蟾毒灵在肠灌流液中的稳定性考察用空白Krebs-Ringes营养液分别配制高(20 pgml-1 中(10 pg ml-1),低(2 pg
10、ml-1 )浓度的蟾毒灵溶液作为供试液, 置于37C恒温水浴中，分别于0 , 30 , 60 , 90 , 120 min取 样，按“2.1.1”项下色谱条件测定，并计算浓度。在120 min 内蟾毒灵于肠灌流液中的含量无明显变化，RSD 0.05 ）,其余肠段两两间均有显 著性差异（PvO.05 ）;对于Papp ,空肠和回肠间无显著性 差异（P0.05 ）,十二指肠和结肠间也无显著性差异（P 0.05 ）b Ka和Papp分别按照空肠、回肠、十二指肠、结肠 的顺序下降，空肠和回肠的 较相近。蟾毒灵在小肠各段均 有吸收，但不存在特异性的吸收部位。2.3.2.2药物浓度对药物吸收的影响分别用浓
11、度为1 ,5 , 15 pg- ml-1的蟾毒灵供试液进行空肠段的灌流实验。结 果见表2o经SPSS软件进行AN OVA分析，结果表明药物浓度在考察范围内对Ka和Papp无显著性影响（P0.05 ）, 说明药物主要以被动扩散的形式被转运吸收。表1不同吸收部位对药物Ka和Papp的影响（略）表2不同药物浓度对药物Ka和Papp的影响（略）2.3.2.3灌流液pH值对药物吸收的影响 分别用pH值 为5.4,6.8和7.8蟾毒灵供试液（5 pg- ml-1 ）的进行空肠 段的灌流实验。结果见表3。经AN OVA分析 蟾毒灵在pH7.8 的灌流液中的Ka和Papp均与pH5.4和pH6.8有显著性差
12、异（P v 0.05 ）,pH5.4和pH6.8间无显著性差异（P 0.05 不同灌流液pH值对药物Ka和Papp的影响（略）2.3.2.4 P糖蛋白（P-gp）对药物肠吸收的影响P-gp是肠细胞上的转运蛋白（也称为“药物溢岀泵” b它通过将其底物药物从肠上皮细胞转运回至肠腔而影响药物吸收。以盐酸 维拉帕米作为P-gp抑制剂，分别用含0 ,0.1 ,0.5 mmolL-1 维拉帕米的蟾毒灵供试液（5 pg ml-1 ）,在远端回肠段进行 灌流实验7 对于含有维拉帕米组的供试液组，灌流前用 含有相同浓度的维拉帕米的空白灌流液平衡孵育待灌流肠 段30 min（见表4 ）经ANOVA分析，含维拉帕米
13、组与不含 维拉帕米组的K a和Papp无显著性差异（P 0.05 ）,表明 P-gp对蟾毒灵基本无肠道外排作用，对其小肠吸收无显著影 响。表4维拉帕米浓度对药物K a和Papp的影响（略）3讨论在常用的研究药物肠吸收在体、体内、离体3种模型中,在体模型是最常用方法。在体肠灌流方式有振动灌流循环灌流和单向单向灌流的灌流速度较慢（0.2ml min-1 ）,较接近体内肠道的环境，与相对长时间（4 6 h）高速回流循环液的循环灌流相比，对肠壁粘膜的损伤小。由于蟾毒灵在肠灌流液中的溶解度较低 小于40pgml1 ）, 适合采用单向灌流。聂淑芳等6 人对重量法和酚红法在单向灌流技术中的应用进行了评价，结果表明重量法更适合体积的校正，能显著减少实验误差。因此，本实
