《基于UPLC-MS技术的拉坦前列素滴眼液中15S-拉坦前列素分析》由会员分享，可在线阅读，更多相关《基于UPLC-MS技术的拉坦前列素滴眼液中15S-拉坦前列素分析（21页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、基于UPLC-MS技术的拉坦前列素滴眼液 中15S-拉坦前列素分析胡立新临祈市食品药品检验检测中心摘要：A的:建立超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱法定量检测拉坦前 列素滴眼液中15S-拉坦前列素。方法:采用色谱柱Thermo Accucore-Cl8 (2. 1mmX 150 mm, 2.6um):流动相为甲醇-乙腈-水(用冰乙酸调节p H3. 0) (48:12:40);流速为 0.3mL、min_1;柱温为 35C;进样量为 10uL。采用 HESI 离子源，正离子扫描模式，扫描范围为m/z 300600。釆用Full MS模式提取离子 方式检测，拉坦前列素与15S-拉坦前列
2、素的检测离子均为M+Napm/z 455.2770.003;电喷雾离子源雾化温度为300(?;毛细管电压为3.50 1 V;离子 传输管温度为320C。鞘气为50 arb;辅助气为10 arb;分辨率为(R) 70 000。 结果：15S-拉坦前列素质量浓度在0.998 89. 98 ng m I?范围内线性关系良好， 相关系数为r=0. 999 8，平均回收率为96. 8% (n:9);定量限为0. 029 96 ng m LH;3批样品中15S-拉坦前列素的含量分别为0. 11%、0.24%、0.06%。结论:经方 法学验证，本方法可检测拉坦前列素滴眼液中15S-拉坦前列素立体异构体杂 质
3、。关键词：拉坦前列素;15S-拉坦前列素;液相色谱-质谱联用;差向异构体;杂质分析;作者简介：胡立新 Tel: (0539) 8056520;E-mai 1:44306861 lqq. com收稿日期：2017年1月3 RAnalysis of 15S-latanoprost in latanoprost eye drops by UPLC-Q-orbitrap mass spectrometerHU Li-xinLinyi Institute for Food and Drug Control;Abstract：Object!ve:MTo determine 15S-latanoprost
4、in latanoprost eye drops by UPLC-Q-orbitrap mass spectrometer. cthods:Thc separation was carried out on an Thermo Accucore-Cis (2. 1 mmX 150 mm, 2. 6 u m) column with the mobile phase consisting of methanol - acetonitrile-water (pH was adjusted to 3. 0 with acetic acid) (48 : 12 40) , the flow rate
5、was 0. 3 m L min 1 and the column temperature was 35C, and the injection volume was 10 u L. HRST was employed, the sample was analyzed in the positive mode, with the probe heater temperature at 300C, capillary temperature 320C, and m/z range was from 300 to 600, and detected atM+Na m/z 455. 277土0. 0
6、03 for both latanoprost and 15 S-latanoprost. Results:The calibration curve of 15S_1 atanoprost was a good linearity within concentration range of 0. 998 8-19. 98 ng mL1，and the correlation coefficients was 0. 999 8. The limits of 15S-latanoprost was 0. 029 96 ng m L1，the average recovery of 15S-lat
7、anoprost was 96. 8% (n=9) . The contents of 15S-latanoprost in 3 batches of samples were 0. 11%，0.24%，0. 06%respectively.Conclusion:The methodology validation proved that the method is useful as a quality control method for trace analysis of 15S-latanoprost in latanoprost eye drops.Keyword：latanopro
8、st; 15S-latanoprost; LC-MS; epimer; impurity determination;Received： 2017 年 1 月 3 曰拉坦前列素(latanoprost)是一种新型苯棊替代的丙棊醋前列素PGF2。，是选 择性匕受体激动剂，是以异丙酯力存在形式的前体药物U1。它通过角膜被吸收, 在酯酶的作用下水解为具有生物活性的游离酸，以增加房水的巩膜色素外流达 到降低眼压、改变眼的颜色2-3、减少房水外流41，临床上作为治疗青光眼及 高眼压症的首选药物5-8。在拉坦前列素的合成策略中，是以科里内酯作为起 始原料，进行两个侧链基团的合成UM。该方法立体选择性差，产
9、生的差向异 构体杂质15S-拉坦前列素与拉坦前列素物理化学性质相近，极性差异较小，在 精制纯化阶段，很难将15S-拉坦前列素完全除去11。由于滴眼液中主成分的 浓度仅50ug*mL,难于直接测定其有关物质。目前，进1_1药品注册标准12 和国内生产企业注册标准m中，仅在原料药检验标准中对该杂质的限量进行 控制，对于制剂并没有进行该杂质的控制。文献U41报道利用乙酸乙酯进行提取 浓缩后，采用正相色谱的方法进行测定。由于提取过程复杂，很难避免样品在提 取过程中发生降解，且样品中的微量杂质提取不完全而产生损失。本实验采用基 于超高效液相-四极杆-静电场轨道阱质谱系统技术，利用高分辨质谱技术的高 分辨
10、率和高灵敏度15,实现对拉坦前列素滴眼液中的差向异构体杂质15S-拉坦前列素进行分析，建立拉坦前列素滴眼液中的15S-拉坦前列素含量测定方 法。所建方法专属性强、灵敏度高，为拉坦前列素滴眼液质量控制提供参考。图拉坦前列素和拉坦前列素结构式Fig. 1 Structure of latanoprost and 15S-latanoprost下载原图A.拉坦前列素（latanoprost） B. 15S-拉坦前列素（15S-latanoprost）1仪器与试药Agilent 1290 Infinity 超高效液相色谱仪（美国 Agilent 公司），Q Exactive Focus四极杆-静电场轨
11、道阱高分辨质谱系统（美国Thermo Fisher Scientific 公司），配有HESI源及Xcalibur 4. 0数据处理系统。Mettler XP 205电子分 析天平（瑞士 METTLER TOLEDO 公司，d=0. 01 mg） , Milli-Q 纯化水（Millipore, Bedford, USA）。色谱柱为 Thermo Accucore-C18 （2. ImmX 150 mm, 2. 6um;填 料:十八烷基硅烷键合硅胶;赛默飞世尔公司）拉坦前列素对照品（批号:R008T0,含量:97.4%，购于美国药典委员会）;15S- 拉坦前列素对照品（批号:LTIM11201
12、,含量:99.9%，购于美国药典委员会）。拉 坦前列素滴眼液（批号:60160401, A企业;批号:5013, B企业;批号:L92219, C 企业;规格均为:2.5 m L:125ug）。乙腈及甲醇均为色谱纯，冰醋酸为优级纯， 高纯水，其他试剂均为优级纯。2方法与结果2.1色谱与质谱条件色谱柱为Thermo AccucoreCis （2.1 mmxl50 mm, 2. 6 um;填料:十八焼基硅焼键 合硅胶）；流动相为甲醇-乙腈-水（用冰乙酸调节p H3.0） （48:12:40）:流速 为0.3 m L.min;柱温为35C;进样量为IOpL。采用HESI离子源，正离子扫描 模式，扫描
13、范围为m/z 30CT600。采用Full MS模式提取离子方式检测，拉坦前 列素与15S-拉坦前列素的检测离子均为M+Ndm/z 455. 2770. 003;电喷雾离子 源雾化温度为300C ;毛细管电压为3. 50k V;离子传输管温度为320C ;鞘气为50 arb;辅助气为10 arb;分辨率为（R） 70 000。2.2溶液的制备2. 2.1供试品溶液精密量取拉坦前列素滴眼液适量，用流动相稀释制成每1 m L约含拉坦前列素 lug的溶液。2.2.2拉坦前列素对照品贮备溶液精密称取拉坦前列素对照品适量，用流动相溶解并稀释制成每lm L约含拉坦前 列素1 u g的溶液。2.2.3 15
14、S-拉坦前列素对照品贮备溶液精密称取15S-拉坦前列素对照品适量，用流动和溶解并稀释制成每1 m L约含 15S-拉坦前列素1 ug的溶液。2.2.4系统适用性试验溶液精密量取拉坦前列素对照品储备溶液和15S-拉坦前列素对照品储备溶液各1 mL 并用流动相定容至100 m L。2.2.5空白辅料溶液按照处方的比例，取各辅料制备不含拉tt前列素的空白辅料溶液。2. 2.6光降解溶液取拉坦前列素滴眼液适量，倒入石英比色皿中，置紫外光灯（254 nm）下放置 约7 h。精密量取经光照射后的拉坦前列素滴眼液适量，用流动相稀释制成每1 m L约含拉坦前列素1 y g的溶液。2.3目标离子的选择取“2.2
15、.2”项下拉坦前列素对照品储备溶液与“2.2.3”项下15S-拉坦前列素 对照品贮备溶液，分别分析，采用正离子方式在m/z30（T600扫描。拉坦前列素与15S-拉坦前列素是立体异构体，它们的单同位素质量均为432. 2870 (C26H.1()05), 经计算可知 m/z 433.2948 (cal. 433. 2948, D=0)为M+H, m/z 455.2766 (cal. 455. 2768, DM. 4x10)为M+Na，m/z 471.2507 (cal. 471. 2507, D=0)为 M+K,见图2。根据化合物在质谱中的信号响应的强弱，选择M+Nam/z 455. 2770. 003为目标离子进行定量分析。R3_161229184844 #3192 RT:14. 22 AV:1 NL:4. 57E7T:FTMS+p ESI FullIIs300. 0000-600. 0000100-90-80-70-60-50-40-30-20-10-382.4406 1397.2379.263 15 391.284 I 4(30032034036038040R3_161229184844 #3425 RT:15. 26 AV:1 NL:4. 93E7 T:FTMS+p ESI Full ms300. 0000-600.0000lOO-i90-S 70-i382.440 4
