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1、乳腺癌HER2FISH检测-检测意义、建议及标本准备HER2与乳腺癌乳腺癌是女性恶性肿瘤中发病率最高的一种，正以每年3%4%的速度急剧上开，已成 为女性的笫一杀手。临床上大约20-35%的浸润性乳腺癌存在HER2基因的扩增及蛋白的高 表达。HER2基因（乂名HER2/neu, c-erbB-2）位于17ql2,是表皮生长因子受体（HER）家 族成员之一，HER家族在细胞生理过程中发挥重耍的调节作用。HER2编码相对分子量 185KD的跨膜受体样蛋內，具冇酪鉍酸激酶活性。HER2是重要的乳腺癌预后判断因了， HER2阳性（过表达或扩增）的乳腺癌，临床特点和生物学行为有特殊表现，治疗模式也 与其他
2、类型的乳腺癌有很人的区别。HER2检测方法有免疫组化（IHC）和荧光原位杂交（FISH）等。2014年NCCN乳腺 癌临床实践指南和乳腺癌HER2检测指南2014版均强调：FISH是检测HER2基W状 态的金标准。一. 检测意义1. 判断预后：HER2阳性的乳腺癌浸润性强，无病生存期短，预后差。2. 指导治疗：HER2基因扩增的乳腺癌患者对内分泌治疗药物（如他莫昔芬）产生耐药。 HER2菽因扩增的乳腺癌患者对CMF方案不敏感，宜采川大剂S蔥环类药物和紫杉醇类药 物力*案；HER2基因扩增的乳腺癌忠奍明显受益于Herceptin （赫赛汀，2001年FDA批准上 市）等靶向药物治疗。二. 检测建
3、议IHC和FISH检测HER2的状态一致性很高，但也存在着差异，数裾统计如下表1和表 2示，对于IHC 2+样木必须要用FISH进一步确认结果；0、1+或3+，根据条件，可再做 FISH验证。FISH阳性率IHC 0892565.91+51421129.12+32741555.93+7466089.9表 1: (2004) HER2 Amplification Ratios byFluorescence In Situ Hybridization and Correlationwith Immunohistochemistry in a Cohort of 6556 BreastCancer
4、Tissues. Clinical Breast Cancer表2:2007年卫少部科教司牵头纟H.织全岡73家三级以上饵院历时2年完成“焚光原位杂交技术（FISH）用丁乳腺癌患者Her-2检测的临床研究”课题，检测标本达3368例阴性 wi(%)因此，2014年NCCN乳腺癌临床实践指南和乳腺癌HER2检测指南（2014版） 均建议先进行HER2蛋闩的IHC检测，IHC2+样木进行ISH （FISH、DISH或CISH）检测。HER2 testing by valkiatedWC assay w_ IHC 0,1* IHC 2* IHC 3+Must reflex test with ISH
5、 (if same spedmMi), or order new test with IHC or ISH (if new specimen available).HER2 testing by vilklMtd single-probe ISH 助say2*3Avogt HER2 copynumber 4.0 signsIs/ctllAverage HER2 copy number 4.0 and 6.0 signals/co IIAverage HER2 copy number 6.0 signalsZcellISH0Must rvfltx test with dual-probe Equ
6、ivocal _ ISH or with WC (If same specimen, rmuKor order new test with ISH or IHC(If new specimen available).HER2 testing by valktatod dualprob* ISHatMyHER2/CEP17 ratio iZO HER2/CEP17 ratio 2.0 _Average HER2 copy number 4.0 signals/cell -Average HER2 copy number 4.0 signals/cellAverage HER2 copy numb
7、er 4.0 signals/cll -Average HER2 copy number 24.0 and ISHH ISHB EquivocalresultISHHMust reflex test with IHC (if same specimen), test with alternative ISH chromosome 17 probe, or order a new tost with ISH orlHC(tf new specimen avaibbto).ISH2014年NCCN乳腺癌临床实践指南三. 样本准备：1. 标本类型：（1）手术切除标本；（2）飢针穿刺活检标本；活检标本
8、。2. 标本固定：所宥乳腺癌标本离体后都应尽快固定（lh内固定）。固定吋应将鉍本每隔5 lOnrn切开，井可在组织问嵌入纱布或滤纸等物。同定液景与所浸泡组织的比例成足够。固定时间以672h为宜。3. 固定液类型：4%中性（磷酸缓冲;醛固定液。4. 组织切片:（1）切片厚度3-5um; （2）应有HE染色切片作为对照。四. 临床上哪些患者需要进行HER2检测1. 所有乳腺原发性浸润癌都应进行HER2检测；2. 只耍能获取肿瘤组织，对兌发灶或转移灶也应该进行HER2检测；3. 如HER2检测结果为阴性，似疚病复发且生物学行为提示可能为HER2阳性肿瘤时，成重 复HER2检测；4. 如HER2检测结
9、果与组织病理学特征不相符吋，如组织学分级为I级的浸润性乳腺癌HER2 阳性,应重复HER2检测。组织学1级的类型腺癌：浸润性导管或小叶癌，ER和PR阳性小管癌（至少90%为纯小管癌）粘液癌（至少90%为纯粘液癌）筛状癌（至少90%为纯筛状癌）腺样囊性癌（至少90%为纯腺样囊性癌）.F1.常为三明性乳腺癌HER2 FISH检测-判读一. 信号观察流程1. 首先在HE/IHC切片上确认肿瘤区域;2. 在10x物镜下，于FISH标木上找到与HE染色切片上相同的组织细胞结构；3. 在40x物镜下扫描整张切片，观察足否存在异质性，要求至少找到2个浸润癌区域，计数 至少20个浸润癌细胞。满意的标本应是75
10、%以上癌细胞核巾有杂交信号；4. 在100x物镜下观察癌细胞核的FISH结果进行信号计数，注意上下调整焦距，以免遗漏信 号。二. 实验失败、不能判读的情况1. W操作等原因，细胞核被损坏，边界不完整；2. 组织过度消化，细胞核边界不完整，DAPI染色浅；3. 组织消化不纪，25%以上的细胞核无信号；4. 发荧光很强或细胞核分辨差，10%细胞核外有信号。三. 计数要求1. 计数区域可结合苏木精伊红染色进行肿瘤细胞标识；2. 选择具较好核分界的区域，要求细胞核人小基本-致、边界完整，DAPI染色均匀、核无 熏佥，绿色着丝粒信号清晰；3. 随机计数确定的肿瘤区域中2030个细胞核中的双色信号，不耍主
11、观选择信号多的核计 数；4. 不要计数仅显示一种颜色信号的细胞核：5. 避免计数分裂像的细胞核或被细胞核分裂及边界不完整核；6. 如果2个同样大小的橘红信号之间距离不足一个常规橘红信号大小，只计为一个信号；7. 若红、绿两信号的比位20或众多信号连接成簇时可不计数，视为基因扩增；8. 苦为临界值，则耑要冉计数20个细胞核中的信兮或由W外一个观察者重新计数，如仍为 临界位，则成在FISH检测报告中注明，或换其它方法或W它蜡块重新检测；9. 若HER2基因扩增在不同癌细胞中存在异质性吋，应在另一癌区域再计算2030个癌细 胞核中的红、绿信号值，报吿其最大值，并加以注释；10. 判读时nJ以将乳腺组
12、织中的正常细胞（如成纤锥细胞、血管内皮细胞、淋巴细胞、正常乳腺上皮细胞）的HER2信号和CSP17信号作为内对照。细胞核部分似信号不在艰*IX域内*计数：埒个细胞核内为两个疳色、两个绿色ir数为:网个橙色倌号和两个绿色m号，个燈 色信号扩敗*小计数，细胞核氓叠，使不能对所打的细胞核区 域进行杏打.有些恺在巫僉区域内。il数为：叫个橙色仿4和两个绿色倍号。个橙 色信号被裂开，计数力：个份色ffi 4和网个绿色个绿 色信兮被裂幵.枪色佑兮也被裂开。计数为:两个橙色信号和个绿色信号*计数力:三个橙色倌号和一个绿色倌兮.计数为:四个橙色倍号和两个绿色信号.O =绿色探针，CEP17 =橙色探针，LSI
13、 HER-2/neu一些常见信号类型及计数方法摘自乳腺癌HER-2基因检测试剂盒（FISH法）说明|$Abbott Moleular Inc.结果判读在淸晰的肿瘤区域，按以上计数要求在至少20个核內计数GSP HER2 （红色）和CSP17 （绿色）信号，分别记录GSPHER2和CSP17的信号总数，再计算平均每个细胞HER2拷 W数、平均每个细胞CSP17拷W数以及GSPHER2和CSP17比值。A. 若HER2/CSP172.0,且平均HER2拷贝数/细胞4.0, HER2阴性；B. 若HER2/CSP172.0,且平均HER2拷贝数/细胞6.0,但2:4.0时，HER2结果不确定；C.
14、若 HER2/CSP1722.0,或 HER2/CSP172.0 而 HER2 拷贝数/细胞6.0, HER2 阳性。乳腺癌HER2检测指南2014版乳腺癌HER2检测指南2014版注：a：对于HER2/CSP17比值2.0，但Y均HER2拷W数/细胞4.0的病例是竹应该视为FISH则性目前 尚存争议，建议对这部分病例在报告中加以备注，提示B前的争议，建议临床医师参考免疫组织化学检 测结果并与患者进行必要的沟通：b：见于均质、连续的浸润细胞，且占浸润癌的10%以上五.HER2 FISH判读标准的变化乳腺癌HER2检测指南2009版判读标准：A. 昔 HER2/CSP171.8，HER2 阴件；
15、B. 若 HER2/CSP17三 1.8,且2.2, HER2 结果不确定;C. 若 HER2/CSP 1722.2，HER2 阳性。新旧判读标准的比较： 2014版新标准的截断值为2.0, 2009版老标准的截断值为1.8和2.2; 2014版新标准不从是HER2/CSP17的比值，需结合HER2苏因的拷W数进行判读；2009 版则仅根裾HER2/CSP17的比值进行判读，不考虑HER2葙謝考W数。新旧判读标准衔接中可能出现的问题： 2014版新标准ili现HER2检测结果不确定的怙况会比2009版标准更少； 2014版新标准判读阴阳性结合了 HER2基因的拷贝数，有些2009版标准判渎结果为阴性 的标本，如果HER2基因拷W数冰0, 2014版新标准则判力阳性。乳腺癌H
