柿子叶中熊果酸超声波辅助提取工艺探究【摘要】为了充分利用柿子叶中的熊果酸，以柿子 叶为原料，以熊果酸提取率为指标，采用超声波辅助提取了 柿子叶中的熊果酸分别研究了乙醇浓度、料液比、超声波 时间和超声波温度对熊果酸提取率的影响结果表明，熊果 酸提取的最佳工艺条件是：乙醇浓度85%、料液比为1： 12、 超声波时间为25min.超声波温度为45C,在最佳条件下， 熊果酸提取率可达1. 131%o【关键词】柿子叶；超声波；熊果酸；提取工艺柿叶为柿树科，柿树属植物柿的新鲜或干燥叶柿叶味 苦、性寒、无毒，治咳喘，肺气胀以及各种内出血《滇南 本草》记载‘经霜叶敷朦疮”；《本草再新》记载“治咳嗽 吐血，止咳生津”；《分类草药性》记载“治咳嗽气喘消肺 气胀”据报道，柿叶也有抗癌、抗菌、抗衰老、诱导凋亡 [1-3]以及对特异性皮炎的作用经科学研究柿子叶中含有 黄酮类、软质、香豆精类化合物和树脂、还原糖、多糖及有 机酸、胡萝卜素等多种物质，具有抗氧化、降血脂、通利血 脉、清热解毒、生津止渴的作用[4-5] o此外，柿子叶尚含 有五环三菇类化合物，其中熊果酸是其主要成分之一熊果酸(U rso licA cid, UA ),又名乌索酸、乌苏 酸，属A-香树脂醇型五环三菇类化合物。
纯净的熊果酸为 白色针状晶体，易溶于二氧六环和毗唳，可溶于甲醇和乙醇, 微溶于丙酮、苯、氯仿和乙瞇近年来，有关熊果酸的提取 已经成为天然产物加工领域的研究热点之一随着对熊果酸 生物活性的深入研究，其在医药、食品、保健和化妆品等领 域获得了广泛的应用［6-9］熊果酸在自然界分布很广, 是多种天然产物的主要活性成分目前，熊果酸主要从女贞 子、山楂、夏枯草、车前草和苦丁茶等植物中提取［10］, 而很少有在柿子叶中提取的报道，本文对柿子叶中熊果酸的 提取工艺进行研究，旨在为以后的研究工作提供参考一、材料与方法（一） 材料及仪器干柿叶，采集于赣南医学院新校区（圆形红柿）洗净、 干燥、粉碎后备用；熊果酸对照品，北京澳天茂森生物技术 研究院；所用化学试剂中无水乙醇、高氯酸、香草醛、冰醋 酸、乙酸乙酯等均为分析纯Lambda 35 UV/vis spectrometer紫外可见分光光度计、 电子天平、SHB -3型循环水多用真空泵、DZF-6050型真空 干燥箱、HHS- 2型电热恒温水浴锅、FW 177粉碎机和Lucky 数控超声波清洗机等二） 实验方法（1）熊果酸的提取取2 g柿子叶粉，加入适量的浸提液，搅拌，控制超声 波温度为45C,超声波处理25m in。
处理后浸泡1 h,然后 抽滤，取0. 2mL滤液移至试管中，减压蒸干冷却后加0. 3 mL5%香草醛-冰醋酸和0. 8mL的高氯酸，6(TC水浴加热 15min,冷却至室温，用乙酸乙酯定容至5 mL,在549 nm波 长处测吸光度2) 产品的紫外分析精密量取0. 5mL柿子叶提取溶液，同时量取0. 5mL浓 度为0. 2mg M 的熊果酸标准溶液，分别置于具塞试管中， 加热挥去溶剂后，加5%香草醛-冰醋酸0. 3 mL和高氯酸 0. 7mL,然后在6CTC水浴中加热15 min,取出冷却至室温 用乙酸乙酯定容至5mL,摇匀，用Cary 50紫外分光光度计 进行紫外扫描分析，扫描熊果酸标准品和产品的最大吸收 波3) 熊果酸标准曲线的绘制精密称取熊果酸标准品10 mg,用无水乙醇定容于100mL 容量瓶中，即得0. 1 mg /mL的熊果酸标准溶液分别精密 吸取熊果酸标准溶液0.2、0. 3、0. 4、0. 5、0. 6、0. 7、 0. 8、0. 9和1. 0 mL置于具塞试管中，加热挥去溶剂后, 加5%香草醛-冰醋酸0. 3 mL和高氯酸0. 8 mL, 6(TC水 浴中加热15 min,取出冷却后移至5 mL聚酯试管中，用乙 酸乙酯定容，摇匀后在549 nm处测定吸光度，同时以试剂 空白作参比，以吸光度为纵坐标，熊果酸浓度为横坐标，绘 制标准曲线，如图1所示。
从图1可以看出，R2 = 0. 9991,说明熊果酸浓度在2〜 10 ug /mL,具有良好的线性关系4）熊果酸提取率的计算方法式中：Y 熊果酸提取率，%; V 提取液体积，ml；X 熊果酸浓度，P g/ml； W 柿子叶样品质量，go二、结果与讨论（一） 产品的紫外分析对标准品和产品进行紫外分析，结果如图6和图7所 不O由图6可知，熊果酸的最大吸收波长在549nm附近 由图7可知柿子叶提取液在549 nm处出现明显的紫外吸收, 由此可以判断出柿子叶中的提取物为熊果酸二） 单因素实验（1）乙醇浓度对熊果酸提取率的影响按上述试验方法，在超声波时间为30min、超声波温度 为5CTC和料液比为1： 12的条件下，分别取乙醇浓度为75%、 80%、85%、90%和95%进行试验，计算提取率，结果如图2 所示图.2乙醇浓度对提取率的影响从图2可看出当浓度85%时，熊果酸的提取率明显下降故乙醇浓度以85%为宜2) 料液比对熊果酸提取率的影响按上述实验方法，在超声波时间为30min、超声波温度 为50C和乙醇浓度为85%的条件下，液料比分别取1： 4、1： 6、1： 8、1： 10、1： 12和1： 14进行试验，计算提取率， 结果如图3所示。
由图3可知，料液比对熊果酸的提取率有显著的影响， 随着溶剂添加量的增加，熊果酸的提取率逐渐增大，当料液 比达到1： 10时，浸提可达到比较理想的效果此时再增加 提取溶剂量对提取率影响不大考虑到生产成本，故料液比 以1： 10为宜3) 超声波时间对熊果酸提取率的影响按上述实验方法，在乙醇浓度为85%、超声波温度为 5(TC和料液比为1： 12的条件下，超声波时间分别取10、20、 30、40和50 min进行试验，计算提取率，结果如图4所示由图4可看出，随着超声波时间的延长，熊果酸的提取 率也在增加，当超声波时间达到20 min的时候，提取率显 著增加，到30 min的时候达到最大值；当超声波时间超过 30 min后，提取率开始下降这是由于提取过程需要一定的 超声波时间，超声波时间太短，熊果酸得不到完全的游离， 超声波时间过长，过多的醇溶性物质得到游离，从而与熊果 酸竞争溶剂，使得熊果酸的提取率下降，故超声波时间以30 min为宜4) 超声波温度对熊果酸提取率的影响按上述试验方法，在乙醇浓度为85%、超声波时间为30 min和料液比为1： 12的条件下，超声波温度分别取30C、 4(rc、5(rc、6(rc和7(rc进行试验，计算提取率，结果见图 5所示。
由图5可看出，在温度低于5(TC时，随着超声波温度 的升高，熊果酸的提取率呈显著上升趋势，当温度超过5(TC 的时候，熊果酸的提取率增加缓慢，上升趋势不明显故超 声波温度以5(rc比较理想三、结论通过产品的紫外分析表明，柿子叶提取物在549 nm处 出现明显紫外吸收，与熊果酸在549 nm处的特征吸收峰相 符合，说明柿子叶提取物为熊果酸通过分别研究了乙醇浓度、料液比、超声波时间和超声 波温度对熊果酸提取的影响，结果表明柿子叶中提取熊果酸 的最佳工艺条件为：乙醇浓度为85%、料液比为1： 12、超 声波温度为45*和超声波时间为25mino在最佳提取工艺条 件下，提取率为1. 131% o。