妊娠期糖尿病母婴血清和胎盘内脂素变化和其和胎儿生长发育相关性探究【摘要】目的：探讨妊娠期糖尿病（GDM）母婴血 清内脂素水平、胎盘及网膜脂肪组织内脂素基因表达及其与 胎儿生长发育的关系方法：采用双抗体夹心酶联免疫吸附 法测定40例妊娠期糖尿病及55例正常孕妇母血清及新生儿 脐血血清中内脂素水平；采用实时荧光定量聚合酶链反应 （Real-time PCR）检测两组胎盘及网膜脂肪组织内脂素mRNA 的表达结果：（1） GDM组孕妇产前BMI、孕期体重增长、 新生儿出生体重高于对照组，差异有统计学意义（P0.05） 结论:GDM孕妇血清及脐血内脂素水平的升高可能参与了 GDM的发生发展以及胎儿宫内发育的调节，循环中内脂素的变化 主要来自于胎盘内脂素基因表达的变化关键词】内脂素；妊娠期糖尿病；胰岛素抵抗；胎盘；脐血妊娠期糖尿病（gestational diabetes mellitus, GDM） 是威胁孕妇、新生儿健康的常见妊娠期并发症，可引起妊娠 期高血压疾病、巨大儿、胎儿宫内窘迫和新生儿低血糖等， 并可增加子代成年后罹患代谢综合征的风险妊娠期糖尿病 发病率有逐年上升的趋势，但其发病机制尚未完全明了。
原 有理论认为胎盘分泌的激素，如雌激素、孕激素、胎盘泌乳 素(HPL)等对胰岛素的拮抗是导致GDM发生的原因之一 近年来研究表明，脂肪组织能分泌一类具有影响胰岛素敏感 性和血糖稳态作用的因子，称为脂肪细胞因子(adipocytokines)o妊娠期胎盘同样能够分泌多种脂肪细胞因子，并参与GDM的发生其中内脏脂肪素(visfatin) 与胰岛素抵抗(insulin resistance, IR)、妊娠期糖尿病 的关系备受关注本研究检测GDM患者母血和脐血血清内脂 素水平，研究GDM患者胎盘组织及网膜脂肪组织中内脂素基 因表达的变化，旨在探讨内脂素与GDM发病及其与新生儿生 长发育的相关性现将研究结果报道如下1资料与方法1. 1 一般资料 选取2013年1-6月在本院产科定期产检 并住院分娩的足月孕妇，参照2011年ADA诊断标准，将孕 24〜28周诊断为GDM的40例孕妇作为研究组(GDM组)，随 机选取同期正常孕妇55名作为对照组所有研究对象均为 单胎妊娠，于37〜42周终止妊娠两组受试者均无心血管 病、无高血压疾病、无肝肾疾病、无感染、无孕前糖尿病以 及甲状腺疾病，定期行常规产前检查直至分娩，且孕期唐氏 筛查和三维超声提示低风险。
告知患者本项研究相关内容、 签署知情同意书，并取得本院医学伦理委员会许可两组孕 妇的年龄、孕次、产次、分娩孕周、孕前BMI比较差异无统 计学意义(P>0・05)； GDM组孕妇产前BMI、孕期体重增长、 新生儿出生体重高于对照组，差异有统计学意义(P 1. 2. 4. 1总RNA提取 取面积为0. 5 cmXO. 5 cm大小的组织 样本在低温液氮环境下研碎，用Trizol (Invitrogen)法提 取总RNAo脱氧核糖核酸酶I去除混杂的基因组DNAo NanoDrop测定RNA浓度，测得所提取的RNA OD 260/0D 280 在1.8〜2.0之间1%琼脂糖凝胶电泳见28、18 s和5sRNA 条带清晰，表明RNA相对分子纯度良好，无降解1.2. 4. 2 Real-time PCR反应参照逆转录试剂盒(Takara)操作说明书合成10 u L cDNA,采用两步法 Real-time PCR 试剂盒(SYBR Green) (Takara)扩增内脂素 及内参磷酸甘油脱氢酶(GAPDH)基因片段内脂素基因扩 增引物序列，上游：5, -TGGAAACCCTCTTGACTGTGT-3，,下游: 5, -GACGTTAATCCCAAGGCCATTAG-3，，PCR 扩增片段长度为 298 bp o内参照GAPDH引物序列，上游：5 -CTTAGCACCCCTGGCCAAG-3 ，， 下 游： 5 ，-GATGTTCTGGAGAGCCCCG-3，，PCR 扩增片段长度为 146 bp。
所需引物均由上海生工生物工程有限公司合成循环条件为 95 C 10 min,然后 95 C 15 s、60 C 1 min,共 40 个循 环使用Roche 480实时荧光定量PCR仪测出样品内脂素及 GAPDH的Ct值用双Z\Ct法计算内脂素mRNA相对于GAPDH 的丰度1.3统计学处理使用SPSS 16.0统计学软件对数据进行处理，计量资料以(xs)表示，比较采用t检验，以P0・05)o3讨论GDM是指妊娠期首次发生或发现的糖代谢异常，一般可 在产后恢复正常IR是GDM重要的发病环节，目前研究认为 胎盘分泌的激素以及脂肪组织分泌的细胞因子与孕期IR有 关，并可能在GDM发生过程中发挥着重要作用［1］内脂素在1994年首次被发现，曾被命名为前B细胞克 隆增强因子(pre-B-cell colony-enhancing factor, PBEF)［2］,之后，此蛋白又被鉴定为烟酰胺腺嚓吟二核昔酸生物 合成中的限速酶，命名为烟酰胺磷酸核糖基转移酶(nicotinamide phosphoribosyltransferase, Nampt) ［3］ o 2005年，Fukuhara等［4］发现此蛋白在内脏脂肪组织中高表 达，故命名为内脏脂肪素，简称内脂素。
内脂素的一大特点 是具有拟胰岛素作用，且具有剂量依赖性妊娠期是孕龄妇 女脂肪组织和体重增加最快的时期，适度增加的脂肪组织有 利于胎儿的正常发育普遍认为，妊娠期血清或血浆内脂素 水平会增高［5-6］妊娠期内脂素合成和分泌来自两个方面一方面，内脏脂肪组织能够产生内脂素，另一方面，胎盘和 胎膜也能产生内脂素［5, 7］o内脂素在妊娠期有3个作用:母儿葡萄糖转运、对抗胰岛素抵抗、预测胰岛素敏感性［5］妊娠期糖尿病作为一种妊娠期代谢综合征，常常与肥胖、脂肪过度堆积等相关联，但GDM孕妇内脂素水平的变化 存在争议一方面，有研究认为GDM孕妇循环内脂素水平低 于正常孕妇，这些学者认为内脂素低水平是引起GDM胰岛素 抵抗的原因之一[6, 8-10] o本研究中笔者对比40例妊娠期 糖尿病患者和55名健康孕妇静脉血清中的内脂素水平发现, GDM患者循环中内脂素的水平高于正常孕妇，GDM患者胎盘 组织中内脂素mRNA表达也较正常孕妇增加，差异均有统计 学意义(P 另外，笔者的研究证实GDM组脐血中内脂 素水平显著高于对照组，推测高内脂素是GDM易产生巨大儿 的原因之一Malamitsi-Puchner等[15]研究发现，脐血内 脂素水平与母血水平相似，两者有明显相关性，提示胎儿血 循环中内脂素可能主要来自母体。
而Mazaki-Tovi等[16]也 认为GDM产妇和巨大儿均是孕期母体高内脂素的独立相关因 素综上所述，在GDM复杂的发病机制中，内脂素可能参与 了孕妇血糖的调节，与GDM的发生发展及胎儿的宫内发育的 调节有关但其具体的作用通路有待于进一步的研究，明确 内脂素在能量代谢、炎症反应等方面的生物学功能，结合其 他脂肪细胞因子的改变，有利于揭示脂肪因子与GDM的关系参考文献[1] Harlev A, Wiznitzer A. New insights on glucose pathophysiology in gestational diabetes and insulin resistance[J]. Curr Diab Rep, 2010, 10 (3)： 242-247.[2] Hausenloy D J. Drug discovery possibilitiesfrom visfa.tin cardiop rotection ? [J]・CurrOp inPharmacol, 2009, 9 (2)： 202-207.[3] Rongvaux A, Shea R J, Mulks M H, et al. Pre-B-cell colony-enhancing factor , whose expression is up regulated in activated lymphocytes, is a nicotinamide phosphoribosyItransferase , a cytosolic enzyme involved in NAD biosynthesis[J]・Eur J Immunol, 2002, 32 (11)： 3225-3234.[4] Fukuhara A , Matsuda M , Nishizawa M , et al.Visfatin： a protein secreted by visceral fat that mimics the effects of insulin[J]・Science, 2005, 307 (5708)： 426-430.[5] Morgan S A, Bringolf J B, Seidel E R. Visfatin expression is elevated in normal human pregnancy[J]. Pep tides, 2008, 29 (8)： 1382-1389.[6] Telejko B, KuzmickiM, ZonenbergA, et al. Visfatinin gestational diabetes : serum level and mRNAexpression in fat and placentai tissue[J]・ Diabetes Res Clin Pract, 2009, 84 (1)： 68-75.[7] Ognjanovic S, Bryant-Greenwood G D・ Pre-B-cell colony-enhancing factor， a novel cytokine of human fetal membranes [J]. Am J Obstet Gynecol, 2002, 187 (4)： 1051-1058.[8] Chan T F, Chen Y L, Lee C H, et al. Decreased plasma visfatin concentrations in women with gestational diabetes mellitus[J].J Soc Gynecol Investig, 2006, 13 (5)： 364-367.[9] Haider D G , Handisurya A , Storka A , et al.Visfatin response to glucose is reduced in women with gestational diabetes mellitus[J]. Diabetes Care, 2007, 30 (7)： 1889-1891..10] Akturk M, Altinova A E, Mert I, et al. Visfatin concentration is decreased in women with gestational diabetes mellitus in the third trimester[J]・J Endocrinol Invest, 2008, 31 (7)： 610-613・[11] Krzyzanowska K, Krugluger W, Mittermayer F, et al. Increased visfatin concentrations in women with gestational diabetes mellitus[J]. Clin Sci (。