《青蛙骨髓细胞染色体标本的制备及染色体的核型分析(共5页)》由会员分享，可在线阅读，更多相关《青蛙骨髓细胞染色体标本的制备及染色体的核型分析(共5页)（5页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、精选优质文档-倾情为你奉上青蛙骨髓细胞染色体标本的制备及染色体的核型分析陈钧瑜（中山大学生命科学学院08级生物技术 广州 ）摘要：染色体组型具有物种的特异性，它们在遗传过程中是相对稳定的，因此可以作为物种分类的基本依据之一。本实验以青蛙的骨髓为材料，制备了青蛙骨髓细胞染色体标本，选择形态完好的中期分裂相进行拍照放大，用常规统计方法测量染色体的相对长度、臂比和着丝粒指数等。结果表明青蛙骨髓细胞二倍染色体数目为26，可配成13对同源染色体，其中有5对大型染色体（相对长度9%）和8对小型染色体（相对长度 7.0为端部着丝粒染色体（t）；着丝粒指数在50.0%37.5%之间称中部着丝粒染色体（m）；着
2、丝粒指数在37.5%25.0%之间称亚中部着丝粒染色体（sm）；着丝粒指数在25.0%12.5%之间称亚端部着丝粒染色体（st）；着丝粒指数在12.5%0.0%之间称端部着丝粒染色体（t）；相对长度 9 %的为大型染色体组，相对长度 14.0，很容易区分。2-5号染色体相对长度9.00-12.30。依据相对长度和臂指数，2、4号两对染色体为中部着丝粒染色体，3、5号两对染色体为亚中部着丝粒染色体。组（6-13号染色体）。为小型染色体（相对长度7.0），其中8、9、10、11、13五对为中部着丝点染色体，7号与8号染色体形状相似，平均相对长度相差较小，不易区分。6、7、12号染色体为亚中部着丝粒
3、染色体。4 讨论核型图中13对染色体配对情况良好，除了个别染色体未伸展完全或图像分辨率的问题，造成了些许同源染色体差异。 41对细胞类型的选择：制作核型分析的染色体标本应选择分裂活性强的组织细胞类型，如本例中的蛙骨髓细胞，由于有丰富的细胞质和高度分裂能力，因此不必经体外培养，也不需要植物血球凝集素的刺激，可直接观察到分裂细胞。再经秋水仙素处理后，就被阻断在有丝分裂的中期，再经离心、低渗、固定、滴片等步骤，便可制作出理想的染色体标本242传统分析方法和运用Adobe Photoshop进行核型分析优劣比较：传统的建立一个物种核型图的方法是选择一个分散良好的有丝分裂中期的细胞拍照、冲洗；将照片上每
4、条染色体一一剪下，测定每条染色体长度及各条臂长，再将染色体人工配对，按一定的规则将配对的染色体排列、粘贴，最后再翻拍成照片。这个流程耗时而繁杂。当一个物种(如人类)染色体数较多时核型分析更是如此。如果染色体间存在交叉重叠，则只能多洗几张照片，沿着可能的轮廓线，将叠在下面的一条染色体连同另一条染色体的残臂一同剪下来体排列在核型图中。在某些情况下，这种做法会得到令人误会的假象3。43 实验过程中的注意事项2：4.3.1低渗处理是实验成败的关键，其目的是使细胞体积胀大，染色体松散。低渗处理时间过长，会造成细胞破裂，染色体丢失，不能准确计数；时间不足则染色体成团，不伸展，观察时无法区分和计数。在室温较
5、低时，宜在恒温箱中用37C低渗20min。4.3.2要掌握好秋水仙素的浓度和处理时间，浓度过高，处理时间过长，都会使染色体过分收缩，不仅由于染色体缩成一团不利于对其形态进行分析，甚至得到的长度数据没有任何意义。4.3.3染色要深一些，但是脱色的时候要脱干净，这样才能保证染色体背景间有较大的对比度，图像也会更加清晰美观。参考文献：1 吴仲庆. 水产生物遗传育种学. 厦门:厦门大学出版社,7-25.2 王金发,何炎明. 细胞生物学实验教程. 第一版. 北京：科学出版社, 2004: 83-85.3 杨大翔.用Adobe Photoshop进行核型分析.农业网络信息，2005，(3)：45-474
6、Levan A, Fredge K, Sangberg A A. Normene latrure for contromeric position on chromosomes. Herditas, 1964, 52: 201-220.The marrow cells chromosome preparation and karyotype analysis of frogChen Junyu（School of Life Science, Sun Yat-sen University, Guangzhou, ）Abstract: There are specificities of the
7、species in the karyotype, which keeps the relative stability in the inheritable process. Therefore, it has been one of the indexes to identify the kinds of animals. We utilize marrow cells from the frog to prepare for the chromosomal samples. The metaphase figure of divided cells is chosen and have photograph
