岛津LC-20AT高效液相色谱操作步骤1、 流动相的处理♦共有5个流动相储液瓶一般RP-HPLC中，A （无机相）、B （有机相）为 分析流动相；C （水）、D （甲醇）用于柱子后处理清洗；50%甲醇■水用于清 洗自动进样针♦流动相体积Va、b=100+总流速x比例系数x分析时间（mL）； Vc＞300mL； Vd-3 5OmL ； V50%甲OOmL♦所有流动相须用0.22um孔径滤膜过滤（根据有机相和无机相选用相应滤膜）, 清洗储液瓶，不能在清洗过程中留下污迹，并超声30min,超声完成后禁止 剧烈摇晃2、 开机♦开启插座电源 一►电脑开机♦打开仪器电源（LC—20AT最后打开，等待数秒后“control”扌旨示灯亮）♦打开软件（Labsolution ―► 仪器 一► LC—20A）,若连接正常则软件 显不LC就绪3、 自动排气♦将各流动相过滤头缓慢放入流动相中♦在简单设置界面设置总流速为0.2mL/mim在自动排气界面设置自动排气参 数（A、B、C、D各流动相＞5min,自动进样器＞25min）,不勾选“排气结 束后运行控制器”♦“下载” 一► “执行自动排气”♦等待排气结束4、 样品处理♦ 稀释后的样品（浓度约lmg/mL,不宜过高）用注射器经0.22um 滤器注 入样品瓶♦样品应N2/3样品瓶体积（1.5mL样品瓶）♦按序号依次将样品瓶放入自动进样器的样品架上♦切记：将样品架推到底！5、系统平衡及设置分析条件♦自动排气完成后，设置柱温、检测波长等参数（建议柱温高于环境10C）, 用梯度洗脱初始流动相平衡柱子（流动相比例与梯度洗脱初始比例一致）♦ “下载”一 “激活/取消激活仪器”，此吋系统显示：等待柱温稳定♦缓慢增加总流速至样品分析所需流速，Vmax=lml/min （每隔1分钟增大 0.2mL/min,注意每次增大都点击“下载”）♦在时间程序界面设置梯度洗脱条件♦若要保存方法文件：文件 ——►方法文件另存♦等待基线平稳（留意泵压力是否稳定），待系统显示：LC就绪，右击，进行基线测试斜率（一般＜3000即可） ♦开始测样6 •“单次分析开始，减“批处理”6.1单次分析开始♦依次输入样品名（样品ID可有可无）、样品瓶、瓶架（1）、进样体积等 ♦注意数据文件所在文件夹，输入数据文件名 一►打开♦确定6.2批处理♦“向导”♦“新建"，样品组号（1）,选择“未知样品”，依次输入文件名及其他♦注意批处理文件所在文件夹，勾选“数据文件名自动递增"、不勾选“自动创 建文件名"♦完成♦选中全部序列♦开始批处理7•柱子后处理：先用易溶解样品的流动相清洗（一般用高比例有机相长期不使10%甲醇洗30min,再用90 %甲醇洗30min；用保存于纯甲醇中方法一：♦在简单设置界面设置：流动相C-90%；流动相D-10% ―下载♦切换柱温箱off♦ 30min后设置：流动相C-10%；流动相D-90% 一►下载方法二（推荐）：♦设置洗柱程序♦"下载”♦ “单次分析开始” 一►样品瓶输入“・1”文件名“洗柱”♦系统提示“禁用采集” 一►确定8.数据处理（打开Labsolution 再解析）8.1标准曲线♦数据处理一►打开文件一 “向导”♦勾选特征峰、外标法♦依次输入最大级别数（标曲的点数）、单位、化合物名、浓度等 一完成♦应用到方法——►方法另存为♦主项目一批处理一打开批处理文件♦填写表格：首行（标准、初始化标准点），（标准样数与前面的最大级别数相 对应，剩下的为未知）、（文件方法为先前保存的方法，向下填充）、（标准样 品级别号分别1.2.3.4.5未矢II样品0）♦批处理再解析开始——►批处理文件另存♦主项目一 校准曲线（可找到已做成的标曲）8.2生成报告♦打开要牛成报告的数据文件♦视图 ——►手动积分栏，处理数据文件♦生成报告♦右击“展性"进行调整，预览、打印8.3检测限、定量限的确定、扣除背景(略)9•实验结束后，“切换泵ON/OFF”确认泵泵压力降为零——＞ 关软件一＞再关仪器10•电脑关机一＞ 关闭插座电源。
＞注意事项＞ LC-20A(G)液相教学视频要在英文目录下才可以播放, 不能含中文字＞在流速较大时，若发现泵压力接近19MPa尚有上升趋势,必须马上降低流速。