实验三十六 葡萄糖中一般杂质检查一目的要求1•掌握目视比色和比浊法进行杂质检查的操作方法及要点2. 掌握杂质限量计算方法3. 熟悉进行药物中朵质检査的手段、目的、意义，二实验原理1. 氯化物检查法氯化物在硝酸性溶液中与硝酸银作用，生成氯化银白色浑浊，与一定虽的标准氯化钠 溶液和硝酸银在同样条件下处理生成的氯化银浑浊相比较，测定供试品中氯化物的限屋Cl~+AgNO3 > AgClj2. 恢盐检查法三价铁盐在酸性溶液中与硫貳酸盐牛:成红色可溶性硫餓酸恢络离子，与一定量标 准恢溶液用同法处理后进行比色，判断供试站中恢盐是否超过标准Fcr +6SCN" H+ > [Fc (SCN)6]3_ 红色在酸性条件反应，可防止Fc?一水解，加入过硫酸馈氧化供试站中Fc?一成Fc二同吋可防 止光线使硫孰酸诙还原或分解褪色在有些药物的检查中(如葡萄糖)需要用硝酸氧化供试甜中Fc?+成Fc巴则不再加入 过硫酸镀和盐酸但因硝酸中可能含有能和硫氧酸根离子显色的亚硝酸，所以必须加热煮沸, 除去氧化氮HNO2 + SCN- + H > NO ・ SCN +H2O3. 重金属检査法重金属是指在实验条件下，能与S?-作用牛成硫化物而显色的金属朵质，如:银、铅。
汞、 铜、镉、跳、神、铢、锡、锌、钻、線等在药甜牛产过程中遇到铅的机会较多，且铅在体 内易积蓄中毒，故检査吋以铅为代表硫代乙酰胺(thioacctamidc)&弱酸性(pH约3.5)溶液中 水解，产牛:硫化氮，可与重金属离子结合牛•成有色硫化物的均匀沉淀，可与对照标准液同法 处理比较本方法的适宜目视比色范围为27mL溶液中含铅10U g~20u g相当于标准铅 溶液l~2n)L,检查中根据规定含重金属的限量确定供试晶的取用量CH3CSNH2+H2O > CH3CONH2+H2SPb 2+ + H2S > PbS I4. 种盐检查法中国药典主要采用古蔡氏(Gutzcit)法检査神盐其原理是利用金属锌与酸作用产纶新半 态的氮，与药物中的微量神盐作用牛成具挥发性的神化氮，遇視化汞(或氯化汞)试纸，产纶 黄色至棕色的神斑，与定量标准神溶液所牛:成的神斑比较，可判定药物中含神盐的限量其 反应如下：AsO亍 +3Zn+ +9H4- AsH3 t + 3Zn 2++3H20AsH3 t +2HgBr > 2HBr + AsH(HgBr)2 黄色AsH3 t + 3 HgBr > 3HBr+As(HgBr)3 棕色五价神在酸性溶液中也能被金属锌还原为神化氛，但牛成神化氮的速度较三价神慢，故在反应液中加入碘化钾及酸性氯化亚锡将五价碓还原为三价碑，碘化钾被氧化生成的碘又可被氯化亚锡还原为碘离了。
AsO： +2厂 +2H+ > AsO：3 + 12 + H20AsO； + Sn 2+ +2H「 > AsO； +Sn 4+ + H20图16I2 十 Sn 2+ > 2「+ Sn 肚溶液中的碘离了，与反应中产生的锌离了能形成络合物，使生成砂化氢的反应不 断进行4厂十 Zn2+ > [ZnLi]2-氯化亚锡与碘化钾存在，nJ抑制铸化氢的生成，因钾化氢也能与溟化汞试纸作川 生成锐斑，在试验条件下100|igW存在不会十扰测定氯化亚锡又可与锌作川，在锌 粒表面形成锌锡齐，起去极化作用，从而使氢气均匀而连续地发生由于衙萄糖具冇环状结构，可能与帥盐杂质呈配合物形式存在，所以在检查前， 加溟化钾漠试液进行破坏由于溟是较强的氧化剂，所以在加入反应一段时间后必须 除去残留的澳方可进行下面的操作，否则残留的澳可能氧化碘化钾牛产碘干扰检查5. 葡萄糖酸度的检查验碎仪衙萄糖是川淀粉以无机酸水解或在酶催化下，经过水解得稀匍萄糖液，再经脱色、浓 缩结晶制得，所以需要检查其酸性杂质的量酸碱性杂质的检查可采川指示剂法、酸碱滴定 法和pH指示剂法中国约典采川酸碱滴定法控制衙萄糖中酸性杂质，规定在酚猷指示剂存 在下，衙萄糖中酸性杂质消耗氢氧化钠滴定液(0.02mol/L)不得超过0.20ml。
三仪器与试剂水浴锅，50mL比色管，量筒，50mL烧杯；葡萄糖，稀硝酸，硝酸银，硝酸，硫氧酸 镀,醋酸盐缓冲液(pH3.5),硫代乙酰胺，甘汕，氢氧化钠，澳化钾，碘化钾,20目无碑锌 粒，氯化亚锡，醋酸铅，漠化汞试纸，贝诺酯，对氨基酚，甲醇溶液(1->2),碱性亚硝基 铁氧化钠试液，氢氧化钠滴定液(0.02mol/L), 1ml吸量管四操作步骤1. 葡萄糖中氯化物取木品0.6g,加水溶解使成25mL (如被检药物溶液呈碱性，可滴加硝酸使遇石蕊试纸 显中性反应)，再加稀硝酸10mL,溶液如不澄清，nJ滤过；置50mL纳氏比色管中，加水使 成约40mL,摇匀，即得供试液另取标准氯化钠溶液(lOpgCl / mL) 6.0mL置50mL氏比 色管中，加稀硝酸10mL,用水稀释使成约40mL,摇匀，即得对照液向供试液与对照液 中分别加硝酸银试液l.OmL,用水稀释使成50mL,摇匀，暗处放置5分钟，同置黑色背景 上，从比色管上方向下观察，如发生浑浊，样品管不得比对照管更浓0.01 %)o2. 葡萄糖中铁盐检查取本品2.0g,置50ml烧杯中，加水20ml溶解后，加硝酸3滴，缓缓煮沸5分钟，放 冷，定量转移至50mL纳氏比色管中，加水稀释使成45ml,加硫氧酸彼溶液(30 - 100)3ml , 摇匀，如显色，与标准铁溶液2.0ml用同一方法制成的对照液比较，不得更深(0.001%) o4. 葡萄糖中重金属的检查取本品4.0g置25mL纳氏比色管中，加23mL水溶解后，加醋酸盐缓冲液(pH3.5)2mL, 加硫代乙酰胺试液2mL,放置2分钟示，与标准铅溶^(10pg Pb 2+/ml)-定量用同一方法 制成的对照液同置白纸上自上向下比较，不得更深。
5ppm)o附：硫代乙酰胺试液配制：取硫代乙酰胺4g,加水使溶解成100mL,置冰箱中保存 临用前取混合液(由氢氧化钠J&(lmol/L)15mL,水5.0mL及L油20mL组成)5.0mL,加上 述硫代乙酰胺溶液l.OmL,置水浴上加热20秒钟，冷却，立即使用5. 葡萄糖酸度检查取本品2.0g,加水20ml溶解后，加酚瞅指示液3滴与氢氧化钠滴定液 (0.02mol/L)0.20ml ,应显粉红色6. 葡萄糖中碑盐的检查取本品2g,迸检碑瓶中，加水5mL溶解后，加稀硫酸5mL与漠化钾溟试液0.5mL, 置水浴上加热约20分钟，使保持稍过量的溟存在，必要时，再补加澳化钾溟试液适量，并 随时补充蒸发的水分，放冷，加盐酸5mL与水适量使成28mL,加碘化钾试液5mL及酸性 氯化亚锡试液5滴，在室温放置10分钟后，加锌粒2g,迅速将瓶塞塞紧(瓶塞上已安放好 装冇醋酸铅棉及澳化汞试纸的检砂管)，保持反应温度在25C〜40C,反应45分钟，取出溟 化汞试纸，将生成的砂斑与标准砂溶液(l|igAs3+/ml)一定量制成的标准砂斑比较，颜色不得 更深，含砂量不得超过百万分Z—(lppm)标准砂斑的制备：精密吸取标准砂溶M(l|Jg/ml)2mL置另一检砂瓶中，加盐酸5mL 与水21mL,自“加碘化钾试液5mL及……起”依法操作即可。
五操作注意事项1. 纳氏比色管的选择与洗涤比色或比浊操作，一•般均在纳氏比色管中进行，因此在选用比色管时，必须注意使样 品与标准管的体积相等，玻璃色质一致，最好不带任何颜色，管上的刻度均匀，如有差别， 不得相差2mm纳氏比色管用后应立即冲洗，比色管洗涤时避免用毛刷或去污粉等洗刷， 以免管壁划出条痕影响比色或比浊2. 平行操作原则进行比色、比浊、砂盐检查时，样品液与对照液的实验条件应尽可能一致，严格按照 操作步骤平行操作，按规定顺序加入试剂比色，比浊前可利川手腕转动360的旋摇使比 色管内试剂充分混匀比色方法一般是将两管同置于口色背景上，从侧面观察；比浊方法是 将两管同迸于黑色或白色背景上，自上而卜•地观察3. 实验中应准确选川量具，杂质检查中允许的i吴差为10%,量筒的绝对误差为ImL, 刻度吸管的绝对谋差为0.01〜O.lmL,在实验中，应根据样品、标准液的取川量正确选川量 器例如，取标准液2mL应选择刻度吸管或移液管吸取标准液取样品2g,允许的谋差为 0.2g,可选用称量精度为O.lg的普通犬平4. 进行铁盐检查时，采用硝酸将F0氧化为FeY 标准液应与样品液同法操作样品 液加硝酸煮沸时，应注意防止爆沸，必要时补充适量水。
5. 砂盐检查时采丿IJ湿法破坏葡萄糖，在酸性溶液中用浜进行有机破坏使碑游离有机 破坏町在测砂瓶中进行，20min内要保持过量的渙存在，随时补充消耗的澳化钾澳试液和水分，使溶液呈黄色，20min jTi要必须将多余的漠除尽，使溶液无色，否则澳 将氧化碘化钾生成12,干扰检查加砂粒前安装好醋酸铅棉花和漠化汞试纸，醋酸铅棉花的填塞松紧度，溟化汞试纸应 盖住测砂管孔，并盖紧盖了，勿使漏气加硼粒后必须立即塞紧测砌管，在规定温度下反应 45钟砂盐检查中所用锌粒应无砂，并能通过20冃筛如所川锌粒较大时，应适当延长反应 时间6. 酸碱度检杏丿IJ水必须是新煮沸放冷的水，应丿IJ刻度吸管量取酸碱滴定液7. 重金属检查中，应根据杂质限量计算公式，计算出标准铅溶液的取用量六思考题1. 比色、比浊操作中应注意什么原则？2. 是否所冇药物都要对各种一般杂质进行检查3. 砂盐的检查中加入各种试剂起什么作川？4•上述实验中哪些检查属于一般杂质检查，哪些属于特殊杂质检查？七参考文献1. 中华人民共和国药典.（2005版，二部附录训J）摘录砂盐检查采川第一法（古蔡氏法） 仪器装置 如图1-loA为lOOmL标准磨口锥形瓶; B为中空的标准辭口塞，上连导气管C（外径8. 0mm,内径6. 0mm）,全长约180mm： D 为具孔的有机玻璃旋塞，其上部为圆形平面，中央有一圆孔，孔径与导气管C的内径一致, 具卜•部孔径与导气管C的外径相适应，将导气管C的顶端套人旋塞下部孔内，并使管壁与 旋塞的I员I孔适相吻合，粘合固定；E为具有I员I孔（孔径6.0mm）的有机玻璃旋塞盖，与D 紧密吻合。
测试时，于导气管C中装入醋酸铅棉花60mg（装管高度为60〜80mm）,再于旋 塞D的顶端平面上放一丿打臭化汞试纸（试纸大小以能覆盖孔径而不需出平面外为宜），盖上旋 塞盖E并旋紧，即得标准砂斑的制备 精密量取标准砂溶液2mL,置A瓶中，加盐酸5mL与水21mL,再 加碘化钾试液5ml与酸性氯化亚锡试液5滴，在室温放置10分钟后，加锌粒2g,立即将照 上法装妥的导气管C密塞于A瓶匕 并将A瓶置25C〜40C水浴中，反应45分钟，取出 澳化汞试纸，即得砂盐检查中所用锌粒应无砂，并能通过20冃筛如所川锌粒较大时，应适当延长反应 时间加锌粒后应立即盖好验碑瓶塞，防止砂化氢气体溢出，以免影响检查的准确性2. 《药典注释》（中华人民共和国药典.1990）（二部），化学工业出版社，1993.23. 马剑文等主编.《现代药品检验技术》，人民军医出版社，1994.10。