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1、摘要用超声波-微波协同萃取法提取柠檬中的活性物质，根据对氨基苯磺酸-盐酸萘乙二胺分光光度法测定柠檬对亚硝酸盐的清除率。在温度、乙醇浓度、物料比和萃取时间等单因素实验基础上，探究提取液剂量、清除时间和清除温度对清除率的影响，确定柠檬清除亚硝酸盐的最佳条件，并此条件下对柠檬果肉和皮的清除率进行比较。最后将最佳方案应用于实际样品中。柠檬含水量为85.96%。在确定提取条件时发现，乙醇浓度对清除率影响最大，之后依次依为物料比、提取温度，最后是提取时间。当乙醇浓度为100%，物料比为1:3，提取温度为70，提取时间为60s时，最佳清除率达74.47%。在确定清除条件时发现，反应温度对清除率影响最大，其次
2、为反应时间，提取液用量对其影响最小。当反应温度为50，反应时间为5min，提取液用量为7mL时，最佳清除率达91.35%。柠檬提取液对实际样品中亚硝酸盐的清除率最高可达85.52%，最低为64.56%。关键词：柠檬提取液；亚硝酸盐；清除率；亚硝胺AbstractSynergistic extraction immersed in ethanol using ultrasonic microwave active ingredient of lemon. The removal rate of nitrite was determined by spectrophotometric determ
3、ination of aminobenzene sulfonic acid and naphthalene.On the basis of single factors such as temperature, ethanol concentration, material ratio and extraction time, exploring the effect of extract dosage, clearance time and clearance temperature on clearance rate,determining the best conditions for
4、lemon removal of nitrite and comparing the clearance rate of lemon pulp and skin in this condition.Finally, the best solution is applied to the actual sample.The lemon water content is 85.96%. When determining the extraction conditions, it was found that the concentration of ethanol had the greatest
5、 influence on clearance rate, followed by material ratio, extraction temperature, and finally extraction time. When the concentration of ethanol was 100%, the material ratio of 1:3, extraction temperature was 70 , 60s for extracting time, the best clearance rate was 74.47%. When determining the clea
6、rance conditions, the reaction temperature has the greatest influence on clearance rate, followed by the reaction time, and the extract amount has the least influence on it. When the reaction temperature was 50 , the reaction time was 5min, the amount of the extract was 7mL, the optimal clearance ra
7、te was 91.35% .The removal rate of nitrite in the actual sample was up to 85.52%, and the lowest was 64.56%.Keywords Lemon extract Nitrite The clearance Nitrosamine1 绪论1.1柠檬1.1.1柠檬的种类 柠檬的起源至今未知，但普遍认为是缅甸北部、印度南部和中国，其果实为浅黄色或黄色、椭圆形，味酸。柠檬的种类丰富，有尤力克、菲诺、维尔拉、印度大果、维拉法兰卡、里斯本、热那亚、北京柠檬、费米奈劳等，其中高酸的是菲诺和费米奈劳，低酸的为北
8、京柠檬。其中我国的柠檬主要分布在长江以南地带，而因盛产柠檬被誉为“中国柠檬之乡”的是四川安岳。1.1.2 柠檬的营养成分及价值柠檬富含维生素C、维生素B1、维生素B2、柠檬酸、苹果酸、柠檬希及钙、磷、铁等多种元素1。柠檬因其富含各种营养物质，并具有独特的风味，故兼具药用价值和食用价值。柠檬对于人体的血液循环以及钙质的吸收有相当大的帮助，其丰富的维他命C不但能够预防癌症、降低胆固醇、食物中毒，消除疲劳，增加免疫力，延缓老化，保持肌肤弹性，并且克服糖尿病、高血压、贫血、感冒、骨质疏松症，等2。如果缺少维他命C，细胞间胶状物也会减少，会使细胞组织变脆，并使其抵抗外力的能力变弱，从而患上坏血症。新鲜柠
9、檬皮片还能有效的缓解胃外科术后患者头晕、恶心感,减轻患者痛苦3。在食物烹饪的过程中，柠檬常用作调味剂，增加食物的风味，促进食用者的食欲。柠檬还具有抗氧化活性，对冷鲜肉具有一定的保鲜效果4。1.1.3 柠檬加工产品目前柠檬鲜果加工主要以生产柠檬干片和果汁饮料制造为主5。因柠檬能够防止皮肤色素沉着、延缓老化、降低胆固醇、保持肌肤弹性等功效，故较受大家欢迎，特别是年轻女性，为了方便大家食用，就产生了柠檬干片。柠檬干片中的营养成分虽不如鲜柠檬多，但将干柠檬片泡水，其功效也差不多，都能美白、防治心血管疾病和肾结石、提高免疫力、祛痰（其祛痰功效较橙和柑橘强）等。 柠檬干片的制作工艺一般为烘干、自然风干、微
10、波真空干燥等，前两种是目前市面上较常用的柠檬干燥法。柠檬果汁饮料具有其独特的清香，在市场上较受欢迎。柠檬果汁类似薄荷给人以醒脑的感觉，但其口感又是清爽的，非常独特。以梨-柠檬为例，其制作工艺为清洗、破碎、打浆取汁、澄清处理、加入柠檬、成分调剂、主发酵、陈酿、去浆澄清、杀菌、灌装、封盖、成品7。因其具有特殊的香味，甚至在香水和化妆品等行业也有所应用6。例如柠檬防晒乳液、柠檬洗面奶、柠檬香精油等。1.1.4柠檬的生理功能柠檬中含有较多的活性物质，且大多都有益于身体健康，所以柠檬又被称为益母果。柠檬精油能抗菌消炎杀菌，消除体内结石；黄酮类物质可消除体内多余自由基，预防癌症，改善心脑血管疾病；果酸具有
11、减肥、抗凝血、解毒、解酒的功效；柠檬苦素可以抑制肿瘤、抗焦虑、降胆固醇、利尿、改善心脑血管循环、调节细胞色素沉淀、改善睡眠；膳食纤维能改善便秘，消除重金属中毒；VC有助于胶原蛋白的合成，抗氧化，抗坏血病。另外柠檬也是味中药，常用于和胃安胎、生津解暑、妊娠呕吐。柠檬具有减肥、降低胆固醇、调节细胞色素沉淀、抗氧化、改善心脑血管疾病等各种功能。“月盈则满，水满则溢”，柠檬虽好，过犹则不及，要做到合理利用，例如不能空腹吃柠檬，胃酸分泌过多和胃溃疡患者不宜吃柠檬，因柠檬含糖量不少，糖尿病患者不宜多吃。1.1.5 柠檬的产业现状柠檬在中国是稀缺资源，仅在我国四川安岳盛产，其余大多靠进口，并且日常生活中，因
12、其特有的酸味和苦味，人们用到柠檬的地方并不多。市面上的柠檬产品大多是柠檬干片和柠檬果汁饮料，而柠檬干片经过热烫烦躁等工艺后，其中不少营养成分都损失掉了，柠檬果汁饮料中的有效成分更是少之又少。所以需要我们抓住机遇，加大研发力度，开发更多柠檬深加工产品，推动我国柠檬产业发展，让更多的人了解到柠檬的功效，扩大柠檬消费市场。1.1.6 柠檬中活性物质的提取方法柠檬主要包括精油、果酸、膳食纤维、黄酮类物质、柠檬苦素、VC等成分8。1.1.6.1压榨法压榨法主要是通过机械加压，压榨出果皮中的有效成分。原料经石灰水浸泡、漂洗后压榨、过滤，将得到的滤液静置，并再次过滤。此方法成本低，易保持原料原有的结构和功能
13、，但分离较为困难，所得滤液中有效成分含量相对较低。1.1.6.2浸提法浸提法是利用原料中各种成分在溶剂中的不同溶解性，选用对所需提取活性成分溶解度大，对其他成分溶解度小的溶剂，而将所需有效成分从中浸提出来的方法。常用的溶剂可分为水、亲本性和亲脂性有机溶剂。用水浸提操作简单且可节约成本，但其提取率低且适用的样品较少。有机溶剂提取法虽提取率较高，但有的溶剂有毒，例如苯、甲醇、二氯乙烷等，且成本较高，操作繁琐。杨强9采用热水浸提法提银杏中非淀粉多糖，实验表明物料比为25mL/g、温度为90、时间为5h时银杏果多糖的提取率为2.76%。1.1.6.3超声波-微波萃取法超声波辅助提取法利用空化效应、机械
14、效应及热效应加强胞内物质的释放、扩散及溶解10。超声波-微波萃取法具有提取时间短、提取率高，氧化损耗率低等优点。此外，还可降低经济成本。胡莉等11采用微波萃取法来优化花生秆中的SDF的提取工艺，发现柠檬酸质量分数为4%、料液比为1 mg25 mL、微波功率为480 W、处理时间为30 s为SDF的最优提取条件。1.1.6.4水蒸气蒸馏法水蒸气蒸馏法适用于有效成分溶于水的原料，其具体方法为将原料与水混合，加热使其产生蒸汽，再经冷凝、油水分离等，提取出有效成分。彭静12等用水蒸气蒸馏法提取乳香挥发油，发现最佳提取工艺为:加水量3倍水、不浸泡、提4h。1.1.6.5超临界CO2法超临界CO2法是通过
15、改变压力和温度，使其影响超临界流体的溶解能力，从而依次萃取极性、沸点、分子量不同的成分。超临界流体不仅具有也液体相似的良好溶剂化能力，又具有与气体一样的良好传质化能力13。苗笑雨14等采用超临界CO2萃取技术提取虎掌菌精油，发现萃取压力33MPa，萃取温度55，萃取时间145min为最佳工艺条件。1.2 亚硝酸盐亚硝酸盐是无机化合物，主要包括呈白色或淡黄色粉末或颗粒状的亚硝酸钠，味微咸，遇水易溶，外观和味道都与食盐类似15。1.2.1亚硝酸盐的来源在我们的日常生活中，亚硝酸盐都普遍存在，例如食品，土壤，饮用水，环境中等都存在亚硝酸盐。一些植物体内也含有硝酸盐，不同的品种含量不同，这是由农作物栽
16、培，使用含氮农药、含氮肥料造成的。食品中亚硝酸盐主要来自于肉类食品、蔬菜和水。肉类食品在加工过程中加入一定量的硝酸盐、亚硝酸盐即可改善风味，稳定色泽，抑制肉毒梭菌的生长繁殖，而至今都没有发现任何一种添加剂能够代替亚硝酸盐的这些功能。因此，亚硝酸盐使用量、残留量超标事件也时有发生。蔬菜中含有亚硝酸盐主要是在种植过程中过量施用硝态氮肥；酸菜等腌渍食品在腌渍过程中由于硝酸还原菌的作用，硝酸盐被还原成亚硝酸盐；隔夜熟菜、霉变蔬菜等。有些地区的饮用水中含有较多亚硝酸盐，用其烹调食物，并在不洁灶具中放置过久，硝酸盐极易被还原为亚硝酸盐。1.2.2亚硝酸盐的危害亚硝酸盐作为一种重要的前体物质，可与蛋白质作用产生高致癌的亚硝胺16,17，而亚硝胺是危害性极高的化合物之一18。亚硝酸盐是工业用盐,常见的亚硝酸盐有亚硝酸钠和亚硝酸钾,为白色或微黄色的结晶或颗粒粉末,无臭,味微咸涩稍苦,易潮解,易溶于水,是一种剧毒品。亚硝酸盐在建筑工地用于水泥防交流剂,锅炉水的软化剂,在食品业用于肉制品的发色剂,但在国家标准中,
