《CDC25B和14-3-3δ蛋白在膀胱癌中的表达及意义》由会员分享，可在线阅读，更多相关《CDC25B和14-3-3δ蛋白在膀胱癌中的表达及意义（6页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、CDC25B和14-3-3 8蛋白在膀胱癌中的表达及意义滕立新冯春青刘乐(沈阳医学院奉天医院泌尿外科辽宁沈阳110024)【摘要】目的探讨CDC25B和14-3-3δ蛋白在膀胱癌中的表达与病理分 级、临床分期的关系，为临床上判断膀胱癌的恶性程度和膀胱癌的新的治疗方法 提供理论依据。方法采用免疫印迹(Western Blot)法检测64例膀胱癌、9例癌 旁正常膀胱粘膜中CDC25B和14-3-3δ蛋白的表达。1)观察CDC25B和 14-3-3δ蛋白在膀胱癌和癌旁正常膀胱粘膜中的表达情况；2)分析CDC25B 和14-3-3δ蛋白在膀胱癌中的表达与
2、病理分级和临床分期的关系。结果所 测组织中均有CDC25B的表达，膀胱癌中呈高表达；并且在膀胱癌各病理分级、 临床分期间的表达亦有差异。CDC25B随着肿瘤的分化程度降低而表达逐渐增加, CDC25B在浸润性膀胱癌中表达高于非浸润性膀胱癌。14-3-3δ蛋白在癌旁 正常膀胱粘膜中大量表达，在膀胱癌中均呈低表达，但未见其与肿瘤病理分级有 明显相关性。结论CDC25B在膀胱癌组织中表达明显高于癌旁正常膀胱粘膜，且 CDC25B的高表达与膀胱癌的分化程度和浸润性密切相关；14-3-3δ蛋白在 癌旁膀胱粘膜大量表达，而在膀胱癌组织中均呈低表达，但与肿瘤分化程度无相 关性。CDC
3、25B及14-3-3δ蛋白可能成为膀胱癌潜在的诊断标记和治疗靶点。 【关键词】膀胱癌细胞分裂调控25磷酸酶B 14-3-3δ蛋白免疫印迹膀胱癌是人类常见恶性肿瘤之一，在世界范围内，膀胱癌发病率居恶性 肿瘤的第九位1。膀胱癌的发生是多因素、多步骤的复杂变化过程，目前对于 膀胱癌发病机制的研究主要集中在引发癌症分子迁移和扩增的分子机制方面，这 主要是因为对于精确的分子机制的了解可以发展特异性靶向治疗。CDC25B (cell division control 25phosphatases B)是人体组织中存在的一 种正常而微量的物质，起着促进细胞有丝分裂的作用，是细胞有丝分
4、裂的激活剂, 可加速细胞分裂。目前认为，CDC25B所编码的基因是一种新的癌基因，正常组 织中含量较少，过量CDC25B可促进细胞恶性转化和肿瘤生松。CDC25B是具有 肿瘤源性的蛋白，有研究表明，其在多种肿瘤中均有过度表达。14-3-3蛋白广泛 存在真核细胞中，参与控制细胞周期核DNA损伤的修复、抑制细胞凋亡、促进 细胞分化等。14-3-3蛋白中14-3-3δ与肿瘤有最直接的联系。14-3-3δ 作为一种肿瘤抑制因子己得到公认，但在恶性肿瘤中的表达报道较少。研究表明， CDC25B是14-3-3蛋白的可能的作用底物。因此我们在膀胱癌中检测了 CDC25B 和14-3-
5、3δ的表达的情况，来探讨其与膀胱癌发生发展的关系，为探索膀胱 癌的发生机理和靶向治疗提供理论依据。1. 材料和方法1.1标本来源:收集我院泌尿外科2012年1月至8月膀胱癌（病理证实） 患者的组织标本，所有患者均为初发，复发性膀胱肿瘤和手术前曾接受放、化疗 的病人剔除本研究。共有64例入选。男性43例，女性21例，年龄3879岁， 平均56.5&plUsmn;5.7岁，病理分类均为移行细胞癌。肿瘤组织按癌细胞的分化 程度（WHO病理分级）分为G1 （高分化）、G2 （中分化）、G3 （低分化）三个 实验组，其中G1组20例，G2组30例，G3组14例；TNM分期：Ta 15例，T1
6、 20 例，T2 18例，T3 8例，T4 3例，肿瘤组织标本获得方式：膀胱部分切除术9例， 膀胱全切术20例，经尿道肿瘤切除术35例。对照组为癌旁正常膀胱粘膜，随机 取自行膀胱全切术病例，距肿瘤大于等于5cm膀胱粘膜组织标本9例（经HE染 色证实为正常膀胱粘膜），取材后用-7CTC冰箱保存备用。1.2主要试剂：兔抗人CDC25B多克隆抗体（Santa Cruz公司，美国）， 羊抗人14-3-3δ多克隆抗体（Santa Cruz公司，美国）1.3采用免疫印迹（Western Blot）法取冻存的标本剪碎，加入冰预冷的细胞裂解液200μl,冰水浴中超 声粉碎，经匀浆机匀浆。4C
7、, 12000rp/m离心1小吋，取上清。采用考马斯亮 蓝法蛋白浓度的测定，根据检测结果，用裂解缓冲液调整各标本至相同蛋白浓度。 取等量蛋白，行SDS丙烯酰胺凝胶电泳，12%SDS-PAGE分离胶中恒电压（150V, 30mA） 2小吋。取胶硝酸纤维素膜在转印液中平衡10分钟，经2小吋50V的转 印后TTBS洗膜1次。用含5%去脂奶粉的TTBS封闭4C过夜。第一抗体（兔和羊均多克隆抗体为1:400稀释），室温下2小吋。碱性磷酸酶标记的第二抗体（1: 2000稀释）孵育温下2小吋。DAB显色：碱性磷酸酶显色剂显色。扫描仪扫描 成像。采用FIOurChemV2.0凝胶成像分析软件分析，记录每条蛋白
8、电泳带的灰 度值，进行定量分析。1.4统计学处理：采用SPSS10.0软件对Western Blot结果进行方差分析和Pearson相关分析，数据以均值±标准差表示，P 0.05冇统计学意义。2. 结果2.1 CDC25B在各组中的表达及其与膀胱癌的关系2.1.1结果显示：所冇组织中均冇CDC25B的表达，膀胱癌组织中呈高水 平表达，并且膀胱癌各病理分级间的表达亦有差异，从G1级到G3级随着肿瘤 的分化程度降低而表达呈逐渐增加的趋势，见图1:图1，1是正常膀胱粘膜，2、3、4是高分化膀胱癌组织，5、6、7、8 是中分化膀胱癌组织，9、10是低分化膀胱癌组织2.1.2 CDC25B
9、在膀胱癌各病理分级之间（G1G3）的表达以及CDC25B 在膀胱癌组织与正常膀胱粘膜相比，均显著差异，有统计学意义（P0.05），见 表2:表2 CDC25B在膀胱癌组织及膀胱粘膜的表达（-x±s）*P0.012.1.3 CDC25B在膀胱癌各临床分期（浸润性和非浸润性）中的表达也 右显著差异，脊统计学意义（P0.05）,见表3:表3 CDC25B在浸润性和非浸润性膀胱癌组织中的表达（-x±s）* P 0.012.2 14-3-3δ在各组中的表达及其与膀胱癌的关系2.2.1结果显示14-3-3δ在正常膀胱粘膜中大量表达，在膀胱癌组织中均呈低表
10、达，但各实验组间14-3-3δ的表达未见明显差异，见图2:图2, 1是正常膀胱粘膜，2、3、4是高分化的膀胱癌组织，5、6、7、 8是中分化的膀胱癌组织，9、10是低分化的膀胱癌组织2.2.2 14-3-3δ在膀胱癌组织与正常膀胱粘膜表达有显著统计学差异(PC0.01),但在各期膀胱癌之间未见明显差异(P0.05),相关数据见表4:表4 14-3-3δ在膀胱癌组织及正常膀胱粘膜的表达情况 (-x±s)*P0.013. 讨论CDC25 是 CDK1 (cyclin-dependent kinases-1)的上游磷酸酶，是苏氨酸/酪氨酸双特异性蛋白
11、，编码酪氨酸磷酸酶，对细胞旮丝分裂奋重要作用。它能激 活CDKl-cyclinB复合物，是有丝分裂的启动因子。0前认为，CDC25B所编码的 基因是一种新癌基因，正常组织中含量较少，过量CDC25B可促进肿瘤生长和细 胞恶性转化。其基因过度表达可能发生在恶性肿瘤的早期阶段，进而引起CDC25B 表达异常，发生肿瘤改变。现己证明CDC25B在人类多种肿瘤中如食管鳞癌、乳 腺癌、结肠癌、胃癌、非小细胞肺癌和子宫内膜癌23过度表达。14-3-3δ蛋白被认为是-种新的抑癌基因，主要生理功能是参与细 胞周期调控、凋亡、有丝分裂信号转导等。DNA损伤后P53去磷酸化，能够结 合在14-3-3&
12、delta;蛋白转录起始位点上游的启动子处，随后激活和升高 14-3-3δ的表达，高表达的14-3-3δ阻止CDC2-CyclinBl进入细胞核启动 有丝分裂,阻止细胞进入分裂期，留出吋间让DNA进行修复4。另外，14-3-3δ 可以直接提高P53的转录活性，形成一个正反馈环5】。在癌组织中，突变的p53 导致14-3-3δ表达降低，14-3-3δ不能形成细胞有丝分裂前期阻滞，使 得突变发生和染色体结构异常。细胞DNA受到损伤吋，14-3-3δ的表达在各 种转染细胞系以及乳腺癌、肺癌、肝癌68中都冇显著的下降，这种表达水平
13、的下降主要是由于14-3-3δ的启动因子被甲基化9。齐义军等10通过对 14-3-3δ在60例食管鱗癌组织中研究发现，14-3-3δ在正常食管黏膜大 量表达，在食管鱗癌组织中均低表达。研究表明，CDC25B丝氨酸磷酸化后，可成为14-3-3δ的一个蛋白 结合点，一旦14-3-3δ与CDC25B结合就会遮盖其下游的核输入序列（NLS）， 而使核输入序列（NES）发挥作用，介导出核效应。CDC25B在细胞核内的滞留对 有丝分裂顺利进行起重要作用，离开细胞核的CDC25B远离作用底物，而且结合了 14-3-3δ的CDC25B无法
14、有效识别靶蛋白，从而可以诱导G2期阻滞，使细胞 周期停滞而进一步启动损伤修复机制11。14-3-3δ通过与CDC25B结合，调 控CDC25B的核浆穿梭运转，从而影响细胞周期进程。CDC25B是14-3-3蛋白的 可能的作用底物。本研究发现，所冇标本组织中均冇CDC25B的表达，膀胱癌组织中呈高 表达，与正常膀胱粘膜相比，差异显著，有统计学意义（P0.05）。CDC25B在 膀胱癌各病理分级间的表达亦有差异，从G1级到G3级随着肿瘤的分化程度降 低而表达呈逐渐增加的趋势；在浸润性膀胱癌中的表达较其在非浸润性膀胱癌中 的表达明显升高。实验结果表明，CDC25B所导致的细胞增殖在膀胱癌
15、的恶性转 化及发展过程中起重要作用，并且与肿瘤的恶性程度及临床分期均呈正相关，与 性别、年龄无相关性。CDC25B的高表达提示可能预后不良。而14-3-3δ在 正常膀胱粘膜中大量表达，在膀胱癌组织中均呈低表达，但各实验组间 14-3-3δ的表达未见明显差异，说明其与病变严重程度无明显相关性。提示 14-3-3&delta河能参与了膀胱癌的演变过程。由于CDC25B是14-3-3δ的可 能的作用底物，14-3-3δ低表达，使CDC25B在细胞核内聚集，加速细胞分 裂，可能促使细胞恶性转化。因此，我们推测14-3-3δ做为新的抑癌基因，
16、其表达的缺失可能是细胞恶性转化的诱因之一；CDC25B做为细胞周期的正调节 因子，它的过度表达可加快受损细胞分裂，促进了肿瘤的发展。CDC25B和 14-3-3δ在可能的致癌因素的作用下共同参与了膀胱粘膜细胞的恶性转化 和肿瘤的生长。CDC25B基因已成为恶性肿瘤治疗的新靶点，冇望成为防治恶性肿瘤的可行途径之一。参考文献1 Parkin MD ,Bray F ,Ferlry J ,et al. Global Cancer Statistics,2002.CA Cancer J Clin,2005;55:74-108.2 Taylor WR Stark GR. Regulation of the G2/M transition by p53J.Oncogene, 2001,20(15):18033 Okarmoto K ,
