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1、项目编号:甘肃中医学院药学系毕业论文课题名称红芪多糖抗肝纤维化的药效学研究 专业年级_ 药物制剂2007级课题组人员郭倩指导教师韪遶甘肃中医学院药学系二0一年编制红芪多糖抗肝纤维化的药效学研宄药物制剂2007郭倩指导老师韩涛摘要：口的：研宄红芪多糖抗肝纤维化的作用，证明红芪多糖在抗肝纤维化方面 的使用价值。方法：雌雄各半Wistar大鼠84只，随机分成七组，每组十二只，分别 为空白对照组，模型组，黄芪多糖对照组，红芪水煎液对照组和红芪多糖低剂量组、 中剂量组、高剂量组。实验采用二甲基亚硝胺对大鼠进行急性小剂量间歇性腹腔注 射3周，制作大鼠实验性肝纤维化模型。造模成功后，各实验组以不同实验药物灌
2、胃 给药，4周后对各组肝纤维化大鼠肝组织中透明质酸（HA）、IV型胶原（IV-C）、层粘 连蛋白（LN）、III型前胶原（PCIII）、羟脯氨酸（Hyp）五项指标进行测定，以反 映肝细胞损伤及肝纤维化的程度。结果：红茂多糖组治疗后大鼠肝组织HA、IV-C、 LN、PCII、IIYP水平明显低于模型组，差异有显著性；红芪多糖高、中剂量组能显 著降低肝纤维化大鼠肝组织HA、IV-C、LN、PCIII、HYP的水平，能明显改善实验大 鼠肝纤维化程度。结论:红芪多糖对实验性肝纤维化具有一定的治疗作用。关键词：红芪多糖（HPS）；二甲基亚硝胺（DMN）;肝纤维化；羟脯氨酸（Hyp）;药用黄芭为豆科植物蒙
3、古黄芭Astragalus mcmbranaceus （Fisch.） Bge. var. mongholicus （Bge.） Hsiao或膜荚黄芭Astragalus membranaceus （Fisch.）Bge.的干燥根。黄芪是常用的补益类中药，始载于神农本草，具右补气固表，利尿消 肿,排毒,敛疮生肌之功。现代研宄表明，黄芪对肝细胞的免疫损伤有保护作用，可促 进肝细胞再生11，同时有抗肝纤维化作用，可使已形成的肝纤维化得到较好的改善和 逆转f2。红芪与黄芪功效相近，红芪多糖为其主要成分，历史上常作为黄芪的代用 品。本实验研宂了红芪多糖对大鼠肝纤维化的药理作用，探究红芪多糖对肝纤维化
4、的治疗作用。1. 实验材料1.1药品：红芪多糖、黄芪多糖、红芪水煎液（每ml相当于生药材0.27g）（甘肃中 医学院药化实验室）；二中基亚硝胺（天津市化学试剂研宂所）；大鼠ELISA试剂盒 （RD）；生理盐水（四川科伦药业股份有限公司，C11022108-1）。1.2仪器:多功能时间分辨荧光免疫分析系统（芬兰wallac VICTOR2 1420）;离心 机（上海手术器械厂，80-1型）。1.3动物：Wistar大鼠，雌雄兼用，体重为20020g，由甘肃中医学院实验动物中 心提供，动物合格证号：SCXK （甘）2004-0006。2. 方法2.1实验分组：取Wistar大鼠84只，雌雄各半，随
5、机分成七组，每组十二只，分别 标记。分别为空白对照组，模型组，黄芪多糖对照组，红芪水煎液对照组，红芪多 糖低剂量组、中剂量组、高剂量组。2.2模型建造：按文献方法131,用生理盐水将二甲基亚硝胺稀释至浓度为1%,除空 白对照组外，对其余大鼠腹腔注射DMN稀释液lml/kg体重，每天1次，连续3天，空白 对照组腹腔注射等剂量生理盐水，共3周。2.3给药：造模成功后，黄芪对照组灌胃给药黄芪多糖300mg/kg体重；用红芪多糖 对低剂量组、中剂量组、高剂量组分别灌胃给药150mg/kg体重、300mg/kg体重、 600mg/kg体重；红芪水煎液对照组灌胃给药2. 7g/kg体重；模型组、空白对照组
6、用生 理盐水10nd/kg体重进行灌胃给药，每天1次，共4周。2.4标本采集：最后一次给药后，将肝纤维化大鼠禁食12h后颈椎脱臼处死，剖腹取 肝脏观察人体外观后，用冷生理盐水洗涤，滤纸吸干水分，准确称取肝脏0. 5g置于组 织匀浆器中，加9倍量生理盐水制备成10%的肝组织匀浆，3000r/min离心10min,-2（TC 保存待测。2.5指标检测：采用酶联免疫法用ELISA试剂盒对透明质酸（HA）、IV型胶原（1V-C）、 层粘连蛋白（LN）、III型前胶原（PCIII）、羟脯氨酸（Hyp）进行测定。3. 数据处理：_各组大鼠肝纤维化指标测定数据均以is表示，采用SPSS14.0统计软件处理，
7、 用两个独立样本的t检验对数据进行统计分析，显著性标准为P0. 05。4. 结果：4. 1 D丽染毒期间观察可见,大鼠生长减慢,精神蒌靡,反应迟钝，活动减少,饮食下降, 粪便稀薄，皮毛皱而不洁，缺乏光泽。与模型组相比较，红芪多糖组、黄芪多糖组、 红芪水煎液组各项生理体征恢复较快。4.2各组实验大鼠肝纤维化指标的比较（见表1）:4.2- 1 HA:各实验组肝纤维化大鼠肝脏的11A水平均低于模型组（P0.05），其中， 红芪多糖高、中剂量组和黄芪多糖组治疗后肝纤维化大鼠HA水平明显低于模型组， 差异有非常显著性（P0. 05）;红芪多糖中剂量组与黄芪多糖组之间无显著差异（P 0. 05）；红茂多糖
8、低剂量组和红茂水煎液组之间存在显著差异（P0.05）,提示红仗 多糖高剂量组具有明显减轻肝脏损伤和肝纤维化程度的作用，红芪多糖中剂量组和 黄芪多糖组减轻肝脏损伤和肝纤维化程度的作用较明显且能力相当。4.2- 2 IV-C：红芪多糖高剂量组和中剂量组之间具有显著性差异（P0. 05）;红芪多 糖中剂量组与黄茂多糖组之间无显著差异（P0. 05）;红芪多糖低剂量组与红芪水 煎液组的IV-C水平无显著性差异（P0. 05），提示红芪多糖高剂量组能较好的减轻 肝纤维化的程度，提高基底膜胶原的更新率和活动性。4. 2-3 LN：表1敁示，各实验组肝纤维化大鼠肝脏的LN水平明敁低于模型组（P0. 05）,
9、 其中，红芪多糖高剂量组的LN水平明显低于模型组，差异有非常显著性（P0.05）; 红芪多糖高剂量组与红芪多糖中剂量组差异具有显著性（P0. 05）;红芪多糖中剂量 组与黄芪多糖组之间无显著差异（P0. 05），与红芪多糖低剂量组与红芪水煎液组 的LN水平具奋益著性差异（P0.05），提示红芪多糖高剂量组能敁著降低肝纤维化程 度，具有&好抗肝纤维化作用。4. 2-4 PCIII：各实验组肝纤维化大鼠肝脏的PCIII水平明显低于模型组（P0.05）, 其中，红芪多糖高剂量组的PCIII水平明显低于模型组，差异有非常显著性 （P0. 05）；红芪多糖中剂量组与黄茂多糖组之间无显著差异（P0.05）
10、，与红芪多 糖低剂量组与红芪水煎液组的PCIII水平具有显著性差异（K0.05）,提示红芪多糖 高剂量组和中剂景组能明显减轻纤维化早期肝功能的损伤程度。4. 2-5 Hyp：表1显示，红芪多糖高剂量组的Hyp水平明显低于模型组，差异有非常显 著性（P0.05）;红茂多糖低剂量组的Hyp水平与模型组无显著差异（P0.05）;红仗多糖高剂量组与红芪多糖中剂量组差异具有显著性（P0. 05）;红芪多糖中剂量组与 黄芪多糖组之间无显著差异（PO.O5），与红芪多糖低剂量组与红芪水煎液组的Hyp 水平具有显著性差异（PO.O5）;红芪多糖低剂量组和红芪水煎液组之间存在显著差 异（P0.05）,提示红芪多
11、糖高剂量组具有明显减轻肝纤维化病变程度的作用，红芪 多糖中剂量组和黄芪多糖组减轻肝脏损伤和肝纤维化程度的作用比较明显且能力札I 当。表1各人鼠肝纤维化指标的测定结果（xs）nI1A (ng/ml)IV-C (ng/ml)LN(ng/ml)空白对照组1213. 282. 24*01.090. 26曲3.290. 81*模型组832. 30 9. 54綱2. 92 0. 38物8. 601.350红芪多糖高剂量组1016. 581.39恤1.440.3. 541. 15她红芪多糖中剂量组1018. 20 2. 38*1.96 土 0. 53*05. 361.64*Q红芪多糖低剂量组926. 02
12、0. 33曲2.630.66&6. 931.82a*0黄芪多糖组1018. 32 1.632. 14 土 0.57*5. 41 1.27*红芪水煎液组924. 64 4. 65必2. 360.41*a6. 681.45必注：与模型组比较*P0.05,与红芪多糖中剂量组比较APcO.05,与黄芪多糖组比较P0.05, 与红芪水煎液组比较OP 0. 05。nPCIII(ng/ml)Hyp(ng/ml)空白对照组121.880. 43伽15. 331.36*w模型组86. 821.48G43. 97 6. 84脚红茂多糖高剂量组102. 030. 59*a*18. 09 3. 86物红芪多糖中剂量组102.860. 43*Q25. 374.71*红芪多糖低剂量组95.471. 16物39. 85 8. 84脚黄芪多糖组103. 25 0. 82*26. 76 5. 27*红芪水煎液组94. 23 0. 66必32. 514.49*注：与模型组比较*P0.05,与红K多糖中剂量组比较APcOH与黄K多糖组比较P0.05, 与红芪水煎液组比较OP 165ng/ml，肝硬化250ng/ml）IV型胶原
