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1、第十二章 革兰氏阳性产芽孢杆菌内容提要第一节 芽孢杆菌属 炭疽芽孢杆菌第二节 梭菌属 产气荚膜梭菌 肉毒梭菌 破伤风梭菌革兰氏阳性产芽孢杆菌优秀课件第一节 芽孢杆菌属（Bacillus)炭疽芽孢杆菌 炭疽芽孢杆菌炭疽的病原体人兽共患病一、形态及染色特性 革兰氏阳性大杆菌，无鞭毛，不运动。形成芽孢、荚膜。l 动物组织和血液:单在或呈短链，竹节状、有丰厚的荚膜l人工培养物:形成长链，形成芽胞，一般不形成荚膜革兰氏阳性产芽孢杆菌优秀课件二、培养特性 需氧菌，适温37，营养要求不高普通肉汤：37，24h培养，上层液透明，形成白色絮状沉淀普通琼脂：大而扁平、灰白色，不透明、表面干燥、 边缘不整齐 火焰状
2、菌落。低倍镜观察菌落边缘呈卷发状，不溶血。明胶高层：呈倒置松树状串珠反应：0.5单位/ml青霉素的培养基中，细胞壁合成受抑制， 菌体膨胀相互粘连形成“串珠状”普通琼脂上的菌落低倍镜观察菌落串珠反应试验革兰氏阳性产芽孢杆菌优秀课件三、抵抗力l繁殖体的抵抗力不强6030-60min即可杀死常用消毒剂均能将其杀死青霉素等多种抗生素高度敏感l芽胞的抵抗力特别强在干燥状态下可长期存活121 灭菌5-10min芽胞对碘特别敏感 0.04-10 min革兰氏阳性产芽孢杆菌优秀课件四、抗原结构是芽胞外膜层含有的抗原决定簇，特异性抗原具有免疫原性和血清学诊断价值。荚膜半抗原，与毒力有关，无保护作用不稳定，反应性
3、特异可用于血清学鉴定细胞壁及菌体内的半抗原（多糖），与毒力无关性质稳定（耐腐败、热）Ascoli反应胞外蛋白质抗原（炭疽毒素），具有免疫原性免疫保护荚膜抗原：菌体抗原：保护性抗原：芽孢抗原：革兰氏阳性产芽孢杆菌优秀课件五、致病性本菌可引致各种家畜、野兽和人类的炭疽易感性最强牛、绵羊、鹿等其次马、驼、猪、山羊等次之犬、猫、食肉兽等则有相当大的抵抗力禽类一般不感染感染途径：消化道、呼吸道、皮肤创伤或通过吸血昆虫传播食草动物炭疽常表现为急性败血症猪炭疽多表现为慢性的咽部局限感染犬、猫和食肉兽则多表现为肠炭疽感染表现 人类肠炭疽、肺炭疽或皮肤炭疽实验动物：小鼠、豚鼠、家兔易感革兰氏阳性产芽孢杆菌优秀课
4、件荚膜多肽：荚膜抗吞噬，抑制抗体的作用，使易于扩散，引起 感染乃至败血症。动物无保护作用，可用于细菌鉴定 毒力因素：炭疽毒素：水肿毒素(edema factor,EF) 致死毒素(lethal factor,LF) 保护性抗原（PA）三种成分单独无生物学活性（毒性），三种相结合时，表现毒性作用增强微血管的通透性，改变血液循环，损害肾功能，干扰糖代谢导致动物死亡具有免疫原性，有保护作用革兰氏阳性产芽孢杆菌优秀课件六、免疫性患过炭疽的动物，能获得坚强的免疫力。菌苗有第二号炭疽芽胞苗无毒炭疽芽胞苗抗炭疽血清保护性抗原炭疽毒素刺激机体产生的抗体抗感染作用革兰氏阳性产芽孢杆菌优秀课件七、微生物学诊断1.
5、细菌学检查采病料： 严禁剖检，局部采料（耳根部、肋间采取脾脏、水肿液或渗出物、肠炭疽可采取粪便等（1）涂片镜检：碱性美蓝瑞氏染色姬姆萨染色有荚膜竹节状大杆菌组织病料碱性美蓝革兰氏染色 具有芽胞的链杆菌 培养物革兰氏阳性产芽孢杆菌优秀课件（2）分离培养：普通琼脂血液琼脂碳酸氢钠琼脂观察生长特性生物学特性检测被检材料强度株形成荚膜动物机体内含碳酸氢钠或血清培养基（在CO2条件下培养）炭疽杆菌与 噬菌体具有高度的特异性裂解炭疽杆菌形成噬菌斑被检菌含青霉素培养基形成串珠生长抑制穿刺接种于明胶培养基18-20 培养4-7d呈倒置松树状* 荚膜检查：* 噬菌体裂解试验：* 串珠试验：* 明胶穿刺试验：细菌
6、噬菌斑细菌噬菌体裂解试验串珠试验串珠细菌革兰氏阳性产芽孢杆菌优秀课件2.动物实验：在内脏、血液中有大量带荚膜的竹节状菌体剖检变化：注射部位呈胶样水肿脾脏肿大3.血清学检查： 热沉淀反应（ Ascoli氏沉淀反应）间接血凝试验串珠荧光抗体检查被检抗原炭疽芽孢串珠试验与荧光抗体法结合病料(1:5乳悬液)或培养物皮下接种：小鼠0.1 ml 兔0.2-0.3 ml败血症而死亡革兰氏阳性产芽孢杆菌优秀课件第二节 梭菌属 (Clostridium)一、属的特征* 菌体杆状，两端钝圆或尖锐，常单在，革兰氏染色阳性* 形成卵圆形或圆形的芽孢，常使菌体膨大，呈梭状二、梭菌分布* 梭菌在自然界分布广泛土壤、污水、
7、腐烂植物、动物肠道* 人与动物的伤口及软组织感染灶三、病原梭菌及梭菌病的诊断原则* 本属有80多种，多为非病原菌，常见的致病菌约11种* 多为人兽共患病病原* 病原梭菌通常均能产生外毒素，其毒力强革兰氏阳性产芽孢杆菌优秀课件产气荚膜梭菌 (Cl. Perfringens)* 本菌又称魏氏梭菌或产气荚膜杆菌* 在自然界分布极广土壤、饲料、污水、乳汁、消化道粪便等* 在一定条件下，可引起多种严重疾病一、形态及染色特性菌体直杆状，两端钝圆，革兰氏阳性，形成芽胞（中央或近端）多数菌株在动物体内可形成荚膜革兰氏阳性产芽孢杆菌优秀课件二、培养及生化特性 本菌对厌氧条件要求不太严格加入葡萄糖、血液则生长更好
8、，适温37 肝片肉汤；生长迅速，5-6h 出现混浊，产生大量气体葡萄糖琼脂； 37 ，24h形成 ，勋章样菌落血液琼脂；灰白色，圆形，边缘呈锯齿状的大菌落， 周围有棕绿色溶血区，出现双层溶血环 为溶血（内环透明，外环淡绿色）。牛乳培养基： 汹涌发酵或暴烈发酵分解乳糖产酸产气，酪蛋白凝固，变成海绵状革兰氏阳性产芽孢杆菌优秀课件革兰氏阳性产芽孢杆菌优秀课件三、致病性 菌型：根据产生毒素种类，细菌分为A、B、C、D、E 等5个型* 致病作用主要在于所产生的毒素蛋白质* 毒素有12种，小写希腊字母表示、.； 其中、 、 和是主要坏死、致死性、溶血性毒素 有些菌株还产生肠毒素细细菌菌型所致疾病产产气荚荚
9、膜梭菌A型人气性坏疽和食物中毒, 坏死性肠肠炎(牛,仔猪), 兔腹泻等产产气荚荚膜梭菌B型羔羊痢疾,犊犊牛、羔羊、绵绵羊和山羊的肠肠毒血症或坏死性肠肠炎产产气荚荚膜梭菌C型绵绵羊猝狙, 羔羊、犊犊牛、仔猪、绵绵羊的肠肠毒血症和坏死性肠肠炎以及人的坏死性肠肠炎,仔猪红红痢, 产产气荚荚膜梭菌D型羔羊、绵绵羊、山羊、牛的肠肠毒血症, 人肠肠毒血症产产气荚荚膜梭菌E型犊犊牛、羔羊肠肠毒血症, 兔腹泻.表: 产气荚膜梭菌菌型及所致疾病革兰氏阳性产芽孢杆菌优秀课件四、微生物学诊断* A型所致气性坏疽及人食物中毒依靠细菌分离鉴定* 其余各型所致的各种疾病肠道内产生毒素所致，靠毒素检测1.细菌学检查肠内容物
10、肝片肉汤 热处理80 ，15min37 培养观察观察要点：形态及染色特点：革兰氏阳性粗大杆菌培养特性：厌氧，生长快，不运动，菌落形状，双层溶血环生化特性：暴烈发酵l细菌分离培养革兰氏阳性产芽孢杆菌优秀课件2.肠内容物毒素检查方法及程序：肠内容物（回肠） 离心(3000rmp,30min)取上清夜 一份加热（破坏）（60 ，30min）一份不加热动物静注小鼠；0.1-0.3ml兔；1-3ml 观察结果不加热组常于数分钟至十小时内死亡加热组不死亡3.细菌菌型测定：被检毒素+各型抗毒素血清中和毒素37.40min小鼠静注观察24h定型革兰氏阳性产芽孢杆菌优秀课件肉毒梭菌 (Cl. botulinum
11、)* 广泛分布于土壤，动物肠道，饲料以及食品中* 当有适宜营养和厌氧环境时，生长繁殖产生肉毒毒素1.形态及染色特性 菌体多呈直杆状，单在或成双，革兰氏阳性。着生周鞭毛形成芽胞位于菌体近端，大于菌体直径，使细胞膨大革兰氏阳性产芽孢杆菌优秀课件2.培养特性 专性厌氧，适温37（产毒素最适温25-30）， 6.5% NaCl,20% 胆汁，pH8.5抑制生长，营养要求不高血液琼脂平板：成圆形到扇状（1-6mm），不规则菌落， 溶血革兰氏阳性产芽孢杆菌优秀课件3.抵抗力本菌繁殖体抵抗力弱：加热80 30min或100 10min杀死芽孢抵抗力极强：湿热1005-7h高压105100min120 5-2
12、0min干热18015min肉毒毒素抵抗力较强耐酸（耐受 pH 3-6），对碱敏感（pH8.5以上即破坏）0.1高锰酸钾加热80 30min或100 10min，破坏革兰氏阳性产芽孢杆菌优秀课件4.抗原性及分型* 根据毒素抗原性分为A、B、C、D、E、F、G等7个型* 具有良好免疫原性抗毒素，有型特异性，无交叉反应5.肉毒毒素* 蛋白质外毒素，性质稳定，毒性最强的神经麻痹毒素之一如A型毒素毒素 lmg杀死2亿只小鼠，人致死量约0.1ug * A-G型毒素合成时为无毒性的毒素前体，被水解后表现毒性* G型毒素须胰酶激活后才有毒性革兰氏阳性产芽孢杆菌优秀课件神经毒亚单位非毒性亚单位肉毒毒素前体小肠
13、吸收亚单位分解抗胃蛋白酶水解淋巴、血流作用于靶器官细胞阻断乙酰胆碱的释放导致肌肉弛缓型麻痹6. 致病性* 所有温血动物和冷血动物对肉毒毒素均有感受性* A、B、E及F型毒素引起人的食物中毒革兰氏阳性产芽孢杆菌优秀课件7. 微生物学诊断主要方法被检材料中检查肉毒毒素（1）肉毒毒素检测A.材料处理：被检材料离心取上清液胰酶液37， 60min不处理B.检出试验：分别小鼠腹腔注射（0.5mL/只）观察4d24h内发病、死亡最终死于呼吸麻痹主要表现竖毛、四肢瘫软、呼吸困难可能有肉毒毒素存在革兰氏阳性产芽孢杆菌优秀课件C.证实试验：第一组（毒素中和组）+ 肉毒抗毒素第二组（毒素灭活组）+ 煮沸10min
14、第三组（毒素对照组）+ 缓冲液小鼠腹腔注射保护存活发病死亡肉毒毒素阳性被检材料小鼠腹腔注射保护存活小鼠腹腔注射原理：* 肉毒毒素 +抗毒素能中和毒素 * 肉毒毒素煮沸10min 破坏毒素D.定型试验：原理： * 肉毒毒素 +抗毒素能中和毒素 * 抗毒素能中和相应的毒素 有型特异性革兰氏阳性产芽孢杆菌优秀课件（2）细菌分离与鉴定A.被检材料热处理：检验材料庖肉培养基80 加热30min处理（利用芽胞耐热特点）增菌液B.细菌分离及鉴定：检验材料增菌液血液琼脂乳糖牛奶卵黄琼脂平板37 厌氧培养48h挑取可疑菌落形态学观察生化特性检查C.产毒素检查：分离菌株庖肉培养基，置30培养5d毒素检测毒素定型定
15、菌型革兰氏阳性产芽孢杆菌优秀课件破伤风梭菌（Cl.tetani)本菌又名破伤风杆菌，引起人畜破伤风的病原一.生物学特性n形态特征： 菌体两端钝圆、细长、正直杆菌，单在革兰氏阳性菌体内外均能形成圆形芽胞，位于顶端鼓槌状无荚膜，多具周鞭毛而能运动革兰氏阳性产芽孢杆菌优秀课件n 培养特征：严格厌氧，含有血液、肝汤、庖肉培养基中易生长肉肝汤和庖肉培养基：轻微浑浊，有颗粒状或粘稠状沉淀，产生 特殊臭味血液琼脂培养基：形成直径46mm菌落，伴有狭窄溶血环。革兰氏阳性产芽孢杆菌优秀课件二、致病性病原体皮肤黏膜创伤感染产生强烈毒素局部生长骨骼肌痉挛1.易感动物：马属动物的易感性最高其次是牛、羊、猪，犬、猫等禽
16、类和冷血动物不敏感实验动物家兔、小鼠、大鼠、豚鼠对毒素易感人易感2.毒素：破伤风痉挛毒素破伤风溶血素毒力非常强，外毒素，良好抗原性不耐热，对氧敏感，与致病性无关革兰氏阳性产芽孢杆菌优秀课件 破伤风的临床症状特征比较典型，故根据流行病学和临床症状，可以基本确诊。一般不需微生物学诊断。 必要时，可采集创伤部的分泌物或坏死组织进行细菌学检查。另外，还可以检测毒素。三、微生物学诊断四、免疫防治主动免疫预防破伤风类毒素紧急预防和治疗破伤风抗毒素血清革兰氏阳性产芽孢杆菌优秀课件第十二章 复习思考题1.试述炭疽芽孢杆菌的抵抗力及其实际意义。2.试述炭疽的微生物学诊断，采取检验材料应注意哪些事项？3.试述产气荚膜梭菌的类型、微生物学诊断程序。4.试述肉毒梭菌的类型、微生物学诊断程序。革兰氏阳性产芽孢杆菌优秀课件
