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1、44文件编号：LABOPMY020第 页，共 页 版本：A/0生效日期：2008-02-01XXXXXX 医院检验科免疫室分析项目作业指导书 Cobas E 601/E 411乙胰岛素(Insulin)1. 分析原理采用双抗体夹心法原理，整个过程18分钟完成。 第1步：20l标本、生物素化的抗胰岛素单克隆抗体和钌（Ru）标记的抗胰岛素单克隆抗体混匀，形成夹心复合物。 第2步：加入链霉亲和素包被的微粒，让上述形成的复合物通过生物素与链霉亲和素间的反应结合到微粒上。 第3步：反应混和液吸到测量池中，微粒通过磁铁吸附到电极上，未结合的物质被清洗液洗去，电极加电压后产生化学发光，通过光电倍增管进行测定
2、。检测结果由机器自动从标准曲线上查出。此曲线由仪器通过2点定标校正，由从试剂条形码扫入仪器的原版标准曲线而得。2. 标本要求血清：按标准常规方法采集。血浆：肝素锂、EDTA-K3或柠檬酸钠抗凝。溶血有干扰，因为红细胞释放可降解胰岛素的肽酶。标本在1525度可稳定4小时，28度可稳定24小时，-20可稳定6个月。只可冻融1次。含沉淀的标本使用前需离心。不要使用加热灭活的标本。标本和质控品禁用叠氮钠防腐。标本、定标液和质控品在测定前应预温到室温；放入仪器后应在2小时内测定以避免蒸发的影响。3. 试剂、校准品、质控品和其他所需材料采用罗氏原装配套试剂。试剂：M： 链霉亲和素包被的微粒（透明瓶盖），1
3、瓶，6.5ml。粒子浓度0.72mg/ml，生物素结合能力： 470ng生物素/mg粒子。含防腐剂。R1：生物素化的抗胰岛素单克隆抗体（灰盖），1瓶，10ml，浓度高于1.0mg/l，MES缓冲液0.05mol/l，pH6.0，含防腐剂。R2：Ru(bpy)32+标记的抗胰岛素单克隆抗体（黑盖），1瓶，10ml。浓度1.75mg/l，MES缓冲液0.05mol/l，pH 6.0含防腐剂。校准品（货号12017504）：Cal 1 低值定标液（白盖），2瓶，1.0ml/瓶，胰岛素浓度约为5U/ml,人血清，含防腐剂Cal 2 高值定标液（黑盖），2瓶，1.0ml/瓶，胰岛素浓度约为300U/ml
4、,人血清，含防腐剂质控品：Elecsys 通用质控品（PreciContorl Universal）1和2 ,货号11731416其他所需材料： Cobas E 6011或 E411分析仪E411分析仪需要： Elecsys 系统缓冲液（ProCell）货号11662988 Elecsys测量池清洗液（CleanCell）货号11662970 Elecsys 添加剂液（SysWash）货号11930346 Elecsys 系统清洗液（SysClean）货号11298500E601分析仪需要： Elecsys 系统缓冲液（ProCell）货号12135019 Elecsys测量池清洗液（Clea
5、nCell）货号12135027 Elecsys 系统清洗液（SysClean）货号112985004. 仪器和校准使用仪器：瑞士罗氏诊断公司生产E 601/E 411全自动电化学发光免疫自动分析仪仪器校准：每批Insulin试剂盒必须用新鲜试剂和Insulin Cal 1,Cal 2定标一次。另外，以下情况需要再次定标：E601/E 411： 一个月（同一批号试剂） 7天（放置仪器上的同一试剂盒）各种分析仪均适用的情况：根据要求进行定标；如质控结果超出范围时；根据规定进行定标。5. 操作步骤（以Cobas E 601为例）5.1 校准操作步骤：在编缉各项目的参数时，已经在Applicatio
6、nCalib菜单中定义好了定标类型和几点定标。因此在对各项目进行定标时，只需在定标菜单Calibration中进行即可。3.2进入CalibrationStatus菜单，用鼠标选择需定标的项目，再根据需要点单点定标（BLANK键）或两点定标（TWO POINT键）、跨距定标（SPAN键）、多点定标（FULL键），再选择其它项目进行相应选择，最后点SAVE，将定标物放入在CalibrationCalibrator中定义好的位置，点Start，再点Start，仪器开始定标。 在CalibrationStatus菜单中看定标结果，点Calibration Result键看定标结果，点Reaction
7、 Monitor键看每个定标物的反应曲线。5.2 样本检测程序： 单个样本输入，在主菜单下选择Workplace- Testslection，在Sequence No栏输入标本号，然后选择该标本所需做的单个项目或组合项目，点SAVE键，样本号自动累加。批量常规标本的输入，在主菜单下选择Workplace- Testslection，在Sequence No栏输入起始标本号，然后选择该标本所需做的单个项目或组合项目，点REPEAT，输入该批标本的最后一个标本号，点OK即可。进样分析，将标本按在Workplace菜单中输入的标本号顺序在样本架上排好，放入进样盘内,按START键，输入该批上机标本的
8、起始标本号，再点START键，仪器自动开始推架检测标本。6. 质量控制用Elecsys 通用质控品（PreciContorl Universal）1和2。质控品1和质控品2至少每24小时或每一次定标后测定一次。质控间隔期应适用于各实验室的具体要求。检测值应落在确定的范围内，如出现质控值落在范围以外，应采取校正措施。请注意：商用质控品可能含有动物来源的胰岛素。分析结果时，应考虑相应的交叉反应。用本试验测定结果如下： 测定量 交叉反应牛胰岛素 17360 pmol/l 25.0猪胰岛素 8334 pmol/l 19.2 人前胰岛素 1000 ng/ml 0.05C肽 100 ng/ml n.d.胰
9、高血糖素 1000 pg/ml n.d.生长抑素 100 pg/ml n.d.胰岛素样生长因子1 6579 pmol/l 0.047. 计算方法对每一个标本，仪器会自动计算结果，单位是uU/ml或pmol/l。换算方法是pmol/l0.144=uU/ml或uU/ml6.945=pmol/l8. 参考范围2.6-24.9uU/ml或17.8-173pmol/l（范围：第5百分位数第95百分位数）。9. 分析性能检测范围：0.200-1000U/mL 或 1.39-6945pmol/L10. 干扰因素该方法不受黄疸（胆红素90mg/dl）、脂血（脂质1800mg/dl）和生物素5mg/天）治疗的病
10、人，至少要等最后一次摄入生物素8小时后才能采血。不受类风湿因子干扰（18900U/ml）。20种常用药物经试验对本测定无干扰。胰岛素浓度高到20000uU/ml也不会出现钩状效应。接受过牛、猪或人胰岛素治疗的病人有时会有抗胰岛素抗体，对检测结果会有影响。接受过小鼠单抗治疗或诊断的病人可能会出现假阳性反应。偶尔会遇到抗钌抗体的干扰。胰岛素测定结果应结合病人病史、临床其他检查结果综合起来进行诊断。11. 临床意义胰岛素是一分子量约为6000D的激素肽，由胰岛的B细胞分泌，经门静脉和肝脏进入血循环。胰岛素的释放呈波段性，并紧随血糖分泌周期之后，约迟2分钟。胰岛素由两条肽链组成，-链含21个氨基酸，-
11、链含30个氨基酸。胰岛的B细胞先合成单链的胰岛素原，随后迅速裂解成前胰岛素。特异的蛋白酶再将前胰岛素裂解成胰岛素和C-肽。全部的C-肽和一半的胰岛素即刻被释放进血流，另一半的胰岛素被储留在肝脏。血液循环中的胰岛素半衰期为3-5分钟，主要在肝脏降解。前胰岛素和C-肽主要在肾脏灭活和排泄。胰岛素的氨基酸序列在进化过程中高度保守。因此，在基因工程人胰岛素前，已成功将猪或牛胰岛素用于糖尿病的治疗。胰岛素的生理作用通过特异的受体传导，主要通过肝脏、脂肪组织和肌肉系统的细胞摄取血糖，这是胰岛素降血糖作用的基础。血清胰岛素检测主要用于针对低血糖患者。可帮助了解葡萄糖/胰岛素比值和有关胰岛素分泌情况，如甲糖宁
12、试验、胰高血糖素试验、口腹葡萄糖耐量试验及饥饿激发试验等。尽管胰腺合成胰岛素的量经常是通过测定C-肽来判断，但仍有必要测定胰岛素。例如，治疗剂量的非人源性胰岛素可导致产生胰岛素抗体。在这些病例中，检测血清胰岛素的浓度反映了游离的、具有生理活性的胰岛素含量，而C-肽测定反映的是内源性胰岛素分泌的总量。胰岛素代谢紊乱可对许多代谢过程产生重大影响。游离的、具有生理活性的胰岛素含量过低，可导致糖尿病。部分原因可能是-细胞的破坏（I型糖尿病）、胰岛素活性降低或胰腺合成减少（II型）、循环抗胰岛素抗体、胰岛素释放延迟或胰岛素受体缺乏（不足）。另一方面，自发的、不规则的胰岛素分泌是低血糖的常见原因。这种状况下糖原异生被抑制，可见于严重的肝肾功能衰竭，胰岛细胞瘤或癌。也有假性低血糖症。糖耐量降低人群中有3的人其代谢状况经一段时间后会恶化成糖尿病。怀孕期间糖耐量降低需要治疗。胎儿死亡危险性的明显升高要求加强监测。Elecsys 胰岛素试验采用了两种人胰岛素特异性的单克隆抗体。12参考文献编写： 审核： 批准：批准日期： 年 月 日
