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1、专题2微生物的培养与应用微生物种类 病毒、细菌、放线菌、真菌、原生动物 菌落 单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞 群体，叫做菌落。菌落是鉴定菌种的课题1 微生物的实验室培养基础知识()培养基1.概念：人们按照微生物对的不同需求，配制出供其的营养基的要求。培养乳酸杆菌时需在培养基中添加、培养霉菌时需将培养基PH调、培养细菌时需将PH调至、培养厌氧微生物则需提供质叫培养基。2. 营养构成：各种培养基一般都含有以及外还要满足微生物生长对条件。【说明】M2(1) 微生物最常利用的碳源是糖类(特别是葡萄糖)，常利用的氮源是氨盐、硝酸盐。(2) 在微生
2、物所需要的化合物中需要量最大的是碳源。(3) 微生物之所以需要补充生长因子，是由于缺乏合成这些物质所需要的酶或合成能力有限。【相关链接1】营养物质定义作用主要来源碳源能提供碳元素的 物质构成生物体的物质，异 养生物的能源物质无机物：C02、NaHC03有机物：糖类、脂肪酸、石油、花 生粉饼等氮源能提供氮元素的 物质合成蛋白质、核酸以及 含氮代谢产物无机物：N2、NH3、氨盐、硝酸盐 有机物：尿素、牛肉膏、蛋白豚等生长因子生长不可缺少的 微量有机物酶和核酸的成分维生素、氨基酸、碱基等【相关链接2】划分标准培养基种类 液依培养基特点禾加凝固一用途工业生产物理性质半固体培养基观察微生物的运动、分类鉴
3、定加凝固剂，如琼脂体培养基微生物分离、鉴定、活菌计数、保 藏菌种化学成分用途培养基含化学成分不明确的天然物质工业生产合成培养基培养基成分明确（用化学成分 分类、鉴定已知的化学物质配成）培养基培养基中加入某种化学物质， 以抑制不需要的微生物的生 长，促进所需要的微生物的生 长培养、分离出特定微生物（如培养酵母菌和霉菌，可在培养基中加入青霉素；培养金黄色葡萄球菌，可在培养基中加入高浓度食盐）根据微生物的代谢特点，在培鉴别不同种类的微生物，如可用伊培养基养基中加入某种指示剂或化学药品红一美蓝培养基鉴别饮用水或乳 制品中是否有大肠杆菌（若有，菌落呈现黑（-）无菌技术 获得纯净培养物的关键是,具体操作如
4、下：1. 对实验操作的、操作者的 和 进行 O2. 将用于微生物培养的.和 等器具进行 j3.为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在附近进行。4.实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与相接触。【相关链接】条件结果常用的方法消毒较为温和的物理或化学 方法仅杀死物体表面或内部一 部分对人体有害的微生物 (不包括芽抱和弛子)灭菌强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生 物，包括芽抱和抱子l=J *【说明】酒精消毒时，70%的酒精杀菌效果最好，原因是：浓度过高，使菌体表面蛋白质凝固成一层保护膜，乙醇分子不能渗入其中；浓度过低，杀菌力减弱。实验操作1.制备牛肉膏蛋白豚固体培养基 M 住(1)制备牛肉膏
5、蛋白腺固体培养基的步骤:ii1称量倒平板。(2)倒平板的过程:%1 在火焰旁右手拿锥形瓶，左手%1 右手拿锥形瓶，使锥形瓶的瓶口迅速通过%1 左手将培养皿打开一条缝隙，右手将培养基倒入培养皿，左手立刻待平板冷却凝固后，将平板放置，使皿盖在下、皿底在上。III2.纯化大肠杆菌(1) 微生物接种的最常用方法是(2)平板划线法：通过在琼脂固体培养基表面的操作，将聚集的菌种到培养基表面。在数次划线后培养，可以分离到由1:1细胞繁殖而来的子细胞群体，这就是菌落。(3)稀释涂布平板法：将菌液进行一系列的,然后将不同稀释度的菌液分别聚集在一起的微生物将被分散成细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落。琼脂固体
6、培养基表面，进行培养。当稀释倍数足够高的菌液里,(4) 将接种后的培养基和一个未接种的培养基都放入37C恒温箱中，培养12 h和24 h,分别观察现象并记录结果。结果分析与评价确认培养基制备是否合格的。如果未接种的培养基在恒温箱中保温12 d后无菌落生长，说明培养基的制备是接种操作成功的标准如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合该菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的;如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中无菌操作还未达到要求，实验失败，需要分析原因,再次制备。课题延伸为了保持菌种的纯净，需对菌种进行保藏。对于频繁使用的菌种，我们可以采的方法；对于需要长期保存的菌种，
7、可以采用的方法。答案 专题2 微生物的培养与应用 课题1微生物的实验室培养菌落菌落是鉴定菌种的一重要依据 基础知识生长繁殖的营养（-）培养基1.概念：人们按照微生物对营养物质 的不同需求,配制出供其基质叫培养基。2.营养构成：各种培养基一般都含有水无机盐ir氮源 、生长因子。此外还要满足微生物生长对 PH特殊菅养物质以及 氧气的要求。例如，培养乳酸杆菌时需在培养基中添加维生素培养霉菌时需将培养基PH调至培养细菌时需将PH调至一中性或微碱性条件。培养厌氧微生物则需提供无氧（-）无菌技术获得纯净培养物的关键是一防止外来杂菌的入侵,具体操作如下:L对实验操作的空间、操作者的衣着进行清洁和消2.将用于
8、微生物培养的和培养基器具进行灭菌。3. 为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在 酒精灯火焰附近进行。4.实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与相接触。条件结果常用的方法消毒较为温和的物理或化学 方法仅杀死物体表面或内部一部分 对人体有害的微生物（不包括 芽抱和弛子）煮沸消毒法、巴氏消毒法、 紫外线或化学药物消毒法灭菌强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽弛和泡子灼烧灭菌、干热灭菌、高压 蒸汽灭菌消毒和灭菌 9实验操作1. 制备牛肉膏蛋白豚固体培养基（1）制备牛肉膏蛋白豚固体培养基的步骤:计算称量溶化（调节PH、分装）灭菌5倒平板。(2) 倒平板的过程:%1 在火焰旁右手拿锥形瓶，
9、左手o%1 右手拿锥形瓶，使锥形瓶的瓶口迅速通过 (3)左手将培养皿打开一条缝隙，右手将培养基倒入培养皿，左手立刻盖上培养皿的皿盖IIIIII待平板冷却凝固后，将平板 倒过来放置，使皿盖在下、皿底在上。1112. 纯化大肠杆菌 (1)微生物接种的最常用方法是平板划线法 和稀释涂布平板法O(2)平板划线法：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线 的操作,将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。在数次划线后培养，可以分离到由二仝细胞繁殖而来的子细胞群体，这就是菌落。,然后将不同稀释度的菌液(3) 稀释涂布平板法：将菌液进行一系列的梯度稀释分别 涂布到琼脂固体培养基表面,进行培养。当稀释倍数足够高的菌
10、液里，聚集在一起的微生物将被分散成里仝细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落。结果分析与评价确认培养基制备是否合格为确认培养基制备是否合格，需设置对照实验,即接种后的培养基和一个未接种的培养基都放入37 C恒温箱中，培养12 h和24 h,观察现象并记录如果未接种的培养基在恒温箱中保温12 d后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则实验失败需要重新制备。接种操作成功的标准如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合该菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中无菌操作还未达到要求，实验失败,需要分析原因，再次制备。课题延伸为了保持菌种的纯净，需对菌种进行保藏。对于频繁使用的菌种，我们可以采用 临时保藏的方法;对于需要长期保存的菌种，可以采用的方法。
