南医生化实验报告4生物化学实验报告一、 实验日的1. 学习并掌握肝糖原提取和鉴定原理和方法；2. 学习并掌握蕙酮比色测定糖原含量的原理、注意事项和操作方法；3. 学习并掌握刻度吸管和微量加样枪的使用方式；4. 正确掌握使用离心机的方法步骤；5. 正确掌握使用分光光度计的方法步骤二、 实验原理1. 肝糖原的提取与鉴定糖原是生物的主要储能物质之一，主要储存与肝细胞中，采用研磨匀 浆等方法可以使肝细胞破碎肝细胞破碎，细胞内容物流出低浓度的三 氯醋酸能使蛋白质变性，破坏肝组织中的酶并且使蛋白质沉淀，糖原则能 够稳定地保存在上清液中，从而达到分离糖原与蛋白质等其他成分的目的 糖原不溶于乙醇但可溶于热水，故可以先用95%乙醇将滤液中糖原沉淀， 再溶于热水中糖原水溶液呈乳样光泽，遇碘呈红棕色此外，糖原还可 以被酸水解成葡萄糖，利用呈色反应和葡萄糖的还原性，可以判定肝组织 中糖原的存在糖原水解溶液与班氏试剂混匀沸水浴加热2min后会出现 砖红色沉淀2. 肝糖原的定量测定糖原在浓碱溶液中非常稳定，故可将肝组织先置于浓碱中加热，以破 坏其他成分，保留肝糖原糖原可以被浓酸水解成葡萄糖，而浓硫酸能使 葡萄糖进一步脱水生成5.羟甲基吠喃甲醛，该化合物与惠:酮脱水缩合可以 生成蓝色的化合物。
该物质在620nm处有最大吸收糖含量在10-100 Pg, 溶液颜色的深浅与可溶性糖的含量成正比利用该反应原理处理标准葡萄 糖溶液，通过标准对照法即可计算出样品中糖原的含量三、材料与方法：1. 实验材料（1） 肝糖原的提取与鉴定样品：1.50g的鸡肝试剂：5%CCI3COOH、95%乙醇、蒸儒水、浓HCI溶液、50%NaOH溶 液、碘试剂和班氏试剂仪器和器材：离心机、试管、玻璃棒、室温至100C恒温水浴箱、剪 刀、镶了、刻度吸管、微量加样枪和白瓷反应板（2） 肝糖原的定量测定样品:0.15g的鸡肝试剂：30%KOH溶液、蒸馅水、标准葡萄糖溶液和0.2%蕙酮溶液仪器和器材：室温至10CTC恒温水浴箱、比色皿、分光光度计、试管、 剪刀、镶了、刻度吸管和微量加样枪2. 实验流程（1） 肝糖原的提取与鉴定（2） 肝糖原的定量测定取3支试管，按下表操作:试剂（ml） 蒸偏水标准葡萄糖溶液糖原提取液0.2%］感酮溶液空白管1.0----2.5标准管-1.0 -2.5样品管--1.0 2.5混匀后，沸水浴lOmin,冷却在分光光度计620 nm波长处，用空白 管溶液调零，测定各管溶液的吸光度（A）o四、结果与讨论：1. 实验结果（1） 肝糖原的提取与鉴定所获糖原溶液如下图：经与蒸馅水比较，所获糖原溶液呈乳样光泽。
经加碘试剂呈色反应，结果如下图：经检验，糖原溶液与碘试剂混合后呈红棕色，故结论是：鸡肝样品中含有糖原经班氏试剂与糖原溶液混匀后沸水浴2min,结果如下图：经检验，糖原水解溶液与班氏试剂混匀沸水浴加热2min后出现砖红 色沉淀故结论是：鸡肝样品中含有糖原，糖原水解后产生葡萄糖2） 肝糖原的定量检测空白管、样品管和标准管比色如下：测定次数123各管平均值A620空白管0000 样品标准液 0.793 0.794 0.794 0.794/A标准样品液 0.190 0.192 0.1910.191根据公式：肝糖原(g/100g肝组织)=A1.110.05 X 100/肝组织重(g) X 100/1000 X得本组实验：肝糖原=0.89g/100g肝组织故本次实验结论为：该鸡肝样品含有肝组织，且肝糖原含量为0.89g/100g 肝组织2. 结果分析经查阅资料得：饱食鸡肝的肝糖原含量为：2~3g/100g肝组织而本组实验测得肝糖原=0.89g/100g肝组织，即本次实验测得的肝糖原 含量偏低3. 讨论总结经查阅资料和与搭档讨论得以下注意事项：(1) 试剂中有强酸、强碱，如慈酮试剂是用浓硫酸配制的，具有强 腐蚀性，故操作中要注意安全；(2) 0.2%：鼠酮溶液和30%KOH 1.5ml应用刻度吸管移取，可减少实验 误差，比起使用微量加样枪操作也更安金，避免损毁微量加样枪；(3) 比色皿盛装溶液体积不得超过比色皿2/3,防止溶液溢出，腐蚀比色杯架;（4） 肝组织必须在沸水浴中全部溶解，否则将影响比色；（5） 使用离心机前一定要配平，否则会损坏离心机；（6） 糖原水解溶液与班氏试剂混匀沸水浴加热2min后若出现黑色浑 浊，则是因为班氏试剂过量所致；（7） 蕙酮试剂必须2倍于被测液；（8） 沸水浴时，注意打开方式，避免烫伤；（9） 糖原提取并转移到100ml容量瓶中进行样品糖原溶液配制时必 须注意仔细定容，以免导致稀释倍数过大，导致实验误差；（10） 肝糖原提取时，向上清液中加入等量的95%乙醇后，务必混合 均匀。
由于上清液为水溶液，比重＞95%乙醇，溶液分为两层加之上清 液容积较大，混匀操作比较困难，最好用倾倒混匀，或用玻璃棒搅拌混匀；（11）实验材料应选取饱食鸡肝，否则所测肝糖原含量会偏低。