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1、实验九DNA的粗提取与鉴定教材分析本实验既是对组成细胞化合物的验证,也是加强学生对细胞中化合物的提取原理、方.法、 技巧的理解掌握，同时还是历年来各种考核的热点。因此，木实验的成功与否关系重大。教材首先介绍了该实验的“实验原理（1） DNA在氯化钠溶液中的溶解度，是随着氯 化钠的浓度变化而改变的进行提取。（2）利用DNA不溶于酒精而细胞中的某些物质能溶于酒 精进行提纯。（3）利用DNA遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色进行鉴定。教材接着说明了 DNA的粗提取与鉴定的li的要求。要求学生初少掌握DNA的粗提取和鉴 定的方法，观察提取出来的DNA物质。教材第三部分清楚地列出了该实验的材料用具。特别是所列
2、酒精、蒸偏水、柠檬酸钠溶 液、觥化钠溶液、二苯胺试剂，在实验中一定要搞清楚它们的作用。教材第四部分更为详细地介绍了该实验的方法和步骤。从取鸡血细胞、DNA的提取过程, 一直到用二苯胺进行鉴定点滴不漏地作了说明。为此，我们从如下几方面对该实验做了本质性的准备。1. 知识结构的联系：明确鸡血细胞的结构和物质组成，它是由细胞膜、细胞质、细胞核 构成；细胞核乂包括核膜、核液、核仁、染色质（染色体）；染色质主要是由D：A和蛋白质 组成的，所以要想对DNA进行提取，必须把细胞弄破，然后采用相应的原理和方法才能提取 出来。2. 相关知识的迁移：掌握该实验的知识点，对巩固生命的物质基础（核酸）、生物 的生殖和
3、发育（减数分裂、受精作用过程中DNA含量的变化）、遗传和变异以及“基因 工程”打下较好的理论基础。3. 实验操作的关键：该实验成败的关键是提取。一则选材，鸡血细胞核DNA含量丰富且 易得；再者，鸡血细胞很易吸水胀破。二则DNA的粗提取中必须通过几次准确的氯化钠浓度 变化方可，否则提取的量不足。所以教师必须精心设计，认真组织，否则，实验难以成功。教学目标知识目标识记：获得鸡血细胞的方法。理解：（1）提取鸡血细胞核物质的方法；（2）提取含杂质较少的DNA的方法；（3）DNA鉴定的方法。能力目标1. 理解相关溶液的作用机理，培养学生的分析能力。2. 通过DNA的粗提取，培养学生的动手能力。情感H标1
4、. 通过小组成员相互配合实验，培养学生的合作精神。2. 通过实验结果，使学生树立生命的物质性。重点落实方案重点1. 掌握DNA的粗提取与鉴定的技术。2. 理解各步骤中的实验原理。落实方案1. 对每小组进行关键步骤的指导。2. 对每关键步骤的原理进行分析讲解。难点-突破策略难点DNA的粗提取。突破策略1. 板书DNA的粗提取程序和重要环节。2. 诱导学生理解各种溶液的用途或作用。实验原理1. DNA在氯化钠溶液中的溶解度，是随着氯化钠的浓度的变化而改变的。*氯化钠的物 质的量浓度为0. M mol/L , DNA的溶解度最低。利用这一原理，可以使溶解在氯化钠溶 液中的DNA析出。2. DNA不溶
5、于酒精溶液，但细胞中的某些物质则可以溶于酒精。利用这一原理，可以进 一步提取出含杂质较少的DNAo3. DNA遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。材料用具材料鸡血细胞液；预冷的95%的酒精溶液；蒸馅水；质量浓度为0. Ig/mL的柠檬酸钠溶液; 物质的量浓度分别为2 mol/L和0.015 mol/L的氯化钠溶液；二苯胺试剂。用具铁架台、铁环、银子、三角架、酒精灯、石棉网、载玻片、玻璃棒、滤纸、滴管、量筒、 烧杯（不同大小）、试管、漏斗、试管夹、纱布。做法指导指导学生预习：结合教材的知识结构和实验目标预习该实验内容，从理论上掌握鸡血细 胞的获取；鸡血细胞核物质的
6、提取及纯化和鉴定方法。指导学生提取：（1）让鸡血细胞在低渗溶液中吸水胀破，释放最多的DNAo （2）让DNA 处在0. 14 mol/L的氯化钠溶液中尽可能地析出。（3）用预冷的95%的酒精尽可能除去其他 细胞物质，得到更纯化的DNA。课时安排1课时教学过程导课1. 为什么说DNA是主要的遗传物质？有何证据？2. 科学家为什么把噬茜体作为研究DNA是遗传物质的材料？ DNA存在于细胞的什么结构 中？上节课，我们学习了 DNA是主要的遗传物质，并通过实验证明了 DNA是主要的遗传物质。 在上节教材中，我们从理论上明确了 DNA主要存在于细胞核的染色体上。木节课我们将通过 实验对此给予证明。（出题
7、：DNA的粗提取和鉴定）教学目标达成1. 板书：制鸡血细胞液（加抗凝剂）一获鸡血细胞（离心或静置）一获鸡血细胞核物质 （提取一溶解一析出一溶解f析出）一鉴定DNA （用二苯胺）指导学生按教材给出的具体步骤和板书的程序完成实验。指导过程中，要特别关注浓度 这一关键因素。实验开始，教师要提供己经制备好的鸡血细胞液。2. 通过实验操作，获得鸡血细胞核物质。（1）应用低渗原理和机械搅拌使细胞破裂并过滤。木步骤直接决定提取的核物质的多 少及实验结果。教师应给予非常关注。（2）溶解细胞核内DNA。加2 mol/L的NaCl溶液并用玻棒搅拌。（3）析出DNA黏稠物并过滤。关键步骤：注意注蒸偏水要慢，防过量而
8、使DNA重新 溶解（把握浓度达0. M mol/L）0轻轻沿同一方向搅拌，有利于DNA析出、附着、缠绕。（4）再溶解DNA黏稠物并过滤。用浓度为2 mol/L的NaCl溶液。（5）提取含杂质较少的DNA。用预冷的95%的酒精。因其可抑制核酸水解酶活性，防 止降解。降低分了运动，易析出沉淀。低温利于增加DNA柔韧性，减少断裂。3. DNA鉴定。用二苯胺在沸水浴中与DNA作用出现蓝色。注意设对照实验。注意事项：学生在操作中常常产生：不能形成黏稠物、制取的DNA粗制品有红色（血 红蛋白颜色）或由于加入溶液和搅拌过程不科学导致实验现象不明显等现象。实验过滤用两层纱布效果较好。使用玻棒用细玻棒效果更佳。
9、4.操作完成后，投影显示如下表格并明确各步骤目的:方法步骤加入物质目的1.制备鸡血细胞柠檬酸钠溶液2.提取鸡血细胞的细胞核物质20 inL蒸馅水3.溶解细胞核内的DNA2 mol/L 的 NaCl 溶液 40 mL4.析出含DNA的黏稠物蒸馅水5.滤取含DNA的黏稠物6.将DNA的黏稠物再溶解2 mol/L 的 NaCl 溶液 20 mL7.过滤含DNA的NaCl溶液8.提取含有杂质较少的DNA冷却的95%的酒精50 mL9. DNA的鉴定A： （1）向试管中加入0.015 mol/L的NaC溶 液5 mL（2）加入DNA（3）加入4 mL二苯胺试剂B： （1）向试管中加入0.015 mol/
10、L的NaCl溶 液5 mL（2）加入4 mL二苯胺试剂引导学生讨论、EI忆并回答目的、。%1 防止血凝。%1 加速血细胞破裂。%1 溶解DNAo%1 使2 mol/L的NaCl溶液稀释至0. 14 mol/L,促DNA最大限度地析出。%1 使含DNA的黏稠物被留在纱布上。%1 使含DNA的黏稠物尽可能多地溶于溶液中。%1 除去含DNA的滤液中的杂质。%1 提取DNAO%1 A：出现蓝色。B：无变化5.讨论与结论。投影给出如下讨论提纲，供学生讨论。（1）DNA粗提取过程中的关键是哪几步？（2）提取鸡血中的DNA时，为什么要除去血液中的上清液？（3）DNA的直径约为2 nm,实验中出现的丝状物的粗
11、细是否表示一个DNA分子直径的 大小？学生分组进行讨论并发表讨论结果。教师对讨论进行全程指导，并与学生一起归纳总结。（1）a.提取鸡血细胞的核物质。应用低渗原理和机械挽拌，可得到最大量的DA。b. 析出DNA黏稠物。加蒸馅水要慢，搅拌要轻。c. 沉淀DNA时，必须用冷酒精。（2）提取DNA,去除杂质是关键。由于上清液是血液中的血浆部分，不含DNA,所以要 除去（含蛋白质）。（3）实验中出现的丝状物是肉眼可以观察到的，这种丝状物的直径要比DNA分了的直 径2 nm大许多倍，所以实验中出现的丝状物并不表示一个DNA分子的直径。实验结论：细胞中有DNA, DNA遇二苯胺试剂在沸水浴中变蓝色。教学目标
12、巩固1. 实验中步骤1和步骤3都需要加入蒸循水，两次加入的作用相同吗？为什么？2. 实验中NaCl的物质的量浓度为2 mol/L和0. 14 mol/L对DNA有何影响？3. DNA遇二苯胺（沸水浴）会染成A.砖红色 B.橘黄色 C.紫色D.蓝色学生回答：（略）布置作业将实验中观察到的现象和得出的结论填写在实验报告册上。结课这节课咱们验证了细胞是由化合物按照一-定的方式组成的这一结论。从知识结构角度来 说，一要加深对生物的物质性理解；二要掌握一般的物质提取方.法；三要注意不同的化学物 质要用不同的原理鉴定。从实验过程角度来说，要理解各种溶液和试剂的作用和目的。板书设计（实验原理：（略）材料用具！（略）制备仙血细胞催：加柠檬酸钠溶催菽猖煌血相胞！陶心或静止二、DNA的粗提取与签定，方 5家 赦猖仙血痢胞核物质您核物质一溶廉一所出溶廉析出DNA签定，用二萃肢（涕水浴）结论是枸成细胞的成分寸论，
