常用细胞分离技术（离心技术、流式细胞术、细胞电泳）一、离心技术（差速离心、密度梯度离心）离心是研究如细胞核、线粒体、高尔基体、溶酶体和微体，以及各种大分子基木手段一般认为，转速为 10〜25Kr/min的离心机称为高速离心机；转速超过25Kr/mim离心丿J大于89K g者称为超速离心机目前超速离 心机的最高转速可达100Kr/min,离心力超过500Kg一）、茅速离心（differential centr计、ugation）在密度均一的介质中由低速到高速逐级离心，用于分离不同大小的细胞和细胞器在差速离心中细胞器沉降的顺序依次为：核、线粒体、溶酶体与过氧化物酶体、内质网与高基体、最后为核 蛋白体由于各种细胞器在大小和密度上相互重叠，而且某些慢沉降颗粒常常被快沉降颗粒裹到沉淀块中，一般重复 2~3次效果会好一些差速离心只用于分离大小悬殊的细胞，更多用于分离细胞器通过差速离心可将细胞器初步分离，常需进一 步通过密度梯离心再行分离纯化二）、密度梯度离心（density gradient centrifugation）（速度沉降、等密度沉降）用一定的介质在离心管内形成一连续或不连续的密度梯度，将细胞混悬液或匀浆置于介质的顶部，通过重力 或离心力场的作用使细胞分层、分离。
这类分离又可分为速度沉降和等密度沉降平衡两种（图2-23）o密度梯度 离心常用的介质为氯化艳，蔗糖和多聚蔗糖分离活细胞的介质要求：1）能产生密度梯度，且密度高时，粘度 不高；2） PH中性或易调为中性；3）浓度大时渗透压不大；4）对细胞无毒1、速度沉降速度沉降（velocity sedimentation）主要用于分离密度相近而大小不等的细胞或细胞器这种降方法所采用的 介质密度较低，介质的最大密度应小于被分离生物颗粒的最小密度生物颗粒（细胞或细器）在1-分平缓的密度梯度介质中按各自的沉降系数以不同的速度沉降而达到分离2、等密度沉降等密度沉降（isopycnic sedimentation）适用于分离密度不等的颗粒细胞或细胞器在连续梯度的介质中经足够大离心力和是够长时间则沉降或漂浮到与白身密度相等的介质处, 并停留在那里达到平衡，从而将不同密度的细胞或细胞器分离等密度沉降通常在较高密度的介质中进行介质的最高密度应大于被分离纟R分的最大密度，而且介质的梯度 要求较高的陡度，不能太平缓再者，这种方法所需要的力场通常比速率沉降法大10-100倍，故往往需要高速 或超速离心，离心时间也较长大的离心力、长的离心时间都对细胞不利。
大细胞比小细胞更易受高离心力的损 伤，而且停留在等密度介质中的细胞比处在移动中的细胞受到更大的损伤因此，这种方法适于分离细胞器，而 不太适于分离和纯化细胞二、流式细胞术流式细胞术是对单个细胞进行快速定量分析与分选的一门技术在分析或分选过程中，包在鞘液中的细胞通 过高频振荡控制的喷嘴，形成包含单个细胞的液滴，在激光束的照射下，这些细胞发出散射光和荧光，经探测器 检测，转换为电信号，送入计算机处理，输出统计结果，并可根据这些性质分选出高纯度的细胞亚群，分离纯度 可达99% （图2-24）o包被细胞的液流称为鞘液，所用仪器称为流式细胞计（flow cytometer）o三、细胞电泳在一定PH值下细胞表血带有净的正或负电荷，能在外加电场的作用下发生泳动，这种现象称为细胞电泳（cell electrophoresis）o引起细胞电泳的电位值称为g电位乞种细胞或处于不同生理状态的同种细胞荷电量有所不同, 故在一定的电场中的泳动速度不同在恒定的电场条件下，同种细胞的电泳速度相当稳定，因而可通过测定电泳 速度来推算出细胞的g电位电位常因细胞生理状态和病理状态而界，因此在诊断疾病上有一定价值此外由 于不同类型的细胞在电场中的泳动速度不同，细胞电泳询可用来分离不同种类的细胞，例如可把淋巴样细胞与造 血细胞分开。