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1、临床医学论文HPLC法测定生首乌和制首乌中大黄素的含量【摘要】建立生首乌和制首乌中大黄素含量的测定方法。方法采用HPLC法，SPHERISORBODS2（150x4.6mm色谱柱，流动相为甲醇-0.1W 酸（85 : 15），检测波长为254nm，柱温28C，流速1.0ml-min-1 结果回归方程为 Y二3352.3X+37.297，线性范围为0.03020钦。生首乌的平均回收率分别为 96.6% （RSI上1.3%）。结论本方法准确灵敏，重复性好，可用于何首乌药材 的质量控制。【关键词】何首乌大黄索HPLCHPLC Measure the Content of Emodin in Raw
2、and Prepared Fleece flower RootAbstract : Objective Make measurement of emodin content in raw and prepared fleece flower root.Mclhod jTake HPLC and the color spectrum co 1 umn SPHERI SORB ODS2 （150x4.6mm j5/zm） 5 the flow spectrum being methanol -0.1% phosphate （85 ： 15） 5 the measurement wave lengt
3、h : 254nm 5 column temperature ：28C flow speed ：1.0ml inl .Rcsull The regression equation Y二3352.3X+37.297 ， the linear range : 0030.20/zg ， the average reception rate of the raw fleece flower root ： 96.6% （RSD=1.3%）Conclusion The said method is correct and quick 5 with good repeat 5 can be used for
4、何首乌（Polygonum mul I i floTum Thunb.）为蓼科植物何首乌的块根，中药 理论认为，其生用具有解毒、消痈、润肠通便的功效，多用于療病、疮痈、风疹 瘙痒、肠燥便秘、高血脂等症；制首乌具有补肝肾、益精血、乌须发、强筋骨等 功效，多用于血虚萎黄、眩晕耳鸣、须发早白、腰膝酸软、肢体麻木、崩漏带下、 高血脂等症1。生、希U何首乌的临床功效之所以不同，是由于药材经过炮制 后所含成分发生变化而造成的。据报道，何首乌药材在炮制的过程中以大黄索为 代表的蔥醍类含量会随着炮制时间的延长而减少2。本文采用HPLC法测定生 首乌和制首乌约材中大黄素的含量，为其生制两用的原因及约材的质量控制
5、提供 一定的科学依据。1仪器与试药1.1 仪器 Waters 510 高效液相色谱仪；Walers 484 Tunoble Absorbance Detector检测器；EastChrom G02色谱工作站软件；KQ-5200型超声波清洗器（200W，40kHz，昆山市超声仪器有限公司）；METTER TOLEDO AG135电子天平； BS110S电子天平（北京赛多利斯天平有限公司）。1.2试剂与药材 甲醇为色谱纯，水为纯化水，其它试剂均为分析纯。大 黄素对照品由中国药品生物制品检定所捉供（批号：110756200110），生首乌 和制首乌均购自亳州市永刚饮片厂并经鉴定为（Polygonum
6、 mul t i f lorumThunb）。2方法与结果2.1 色谱条件 色谱柱：SPHERIS0RB0DS2 （150x4.6mm，流动相：中醇0.1%磷酸（85 ： 15） 5检测波长为254nm，柱温28C ,流速1.0ml -min-1。 在此色谱条件下，供试品色谱与对照品色谱在相同的保留时间处有相应色谱峰， 与其它组分能基本达到基线分离，理论塔板数以大黄索峰计不、于3000。2.2溶液的制备（1）对照品溶液的制备 精密称量大黄素对照品30陋， 置25ml量瓶中，加甲醇定容后，摇匀，即得浓度为0.12mgml1的对照品溶液。 （2）供试品溶液的制备31）生首乌，药材经粉碎后过60日筛
7、并干燥至恒重。 精密称取药材粉末0.2g，精密加甲醇20ml 称定重量加热回流60min，放冷， 再称定重量，用卬醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5m 1，挥去 中醇5加8%盐酸溶液10ml，超声处理2min 5再加氯仿10ml，加热冋流60min 5 冷却，置分液漏斗中，用少量氯仿洗涤容器，并入分液漏斗中，分取氯仿层，酸 液用氯仿提取3次，每次10ml，合并氯仿液，减压回收至干，用甲醇定容于10ml 量瓶，微孔滤膜滤过，即得。2）制首乌，药材经粉碎后过60目筛并干燥至恒重。 精密称定约材粉末0.5g，精密加甲醇30ml，称定重量，加热回流60min，放冷， 再称定重量，用中醇补足
8、减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤10ml，其他 操作同上，最后残渣加甲醇溶解，并定容于2m 1量瓶，微孔滤膜滤过，即得。2.3标准曲线的制备 用微量移液器精密吸取对照品溶液适量，用甲醇稀 释制备若干份，注入液相色谱仪10“ 1，以浓度为横坐标，峰面积値为纵坐标， 进行线性回归求得回归方程：Y二3352.3X+37.297，二09995。结果表明大黄素 在0.030.20/zg范围内，呈良好的线性关系。2.4精密度试验 精密吸取对照品溶液，重复进样6次，每次10“ 1，结果 RSD 为 0.84% (n=6)。2.5稳定性试验 取生首乌和制首乌供试品溶液10 “ 1，分别于配制后0、 2、6
9、、12、24h后进样，按上述色谱条件测定，RSD分别为2.3%和2.7% 表明供 试品溶液在24h内基本稳定2.6重复性试验 取同一批号生首乌和制首乌药材各6份，按“2.2.2. T 项制备供试品溶液，按“2.1”色谱条件，注入10“ 1，测定峰面积，并由回归 方程计算生首乌和制首乌样品的含量，结果其RSD分别为0.89%和l.l%表明此 方法重复性良好。2.7加样回收试验 取已知含量的生首乌样品O.lg，精密加入对照品液2ml，按“2.1”色谱条件，依法测定，结果平均回收率分别为96.6%(RSD=1.3%)。表1回收率结果表(略)2.8大黄素的含量测定 精密称取各样品，分别按“2.2.2”
10、项下方法制备 供试品溶液，按上述色谱条件测定生首乌和制首乌供试品溶液中大黄索含量。测 定结果见表2，色谱图见图1。表2大黄素含量测定结果(n = 6)(略)图1高效液相色谱图(略)A.制首乌B.生首乌C.对照品；1峰为大黄素峰3讨论3.1本文建立了 HPLC法测定生首乌和制首乌中大黄素的含量，样品中大黄 素峰与其他峰能达到基线分离，且精密度高，准确可靠，可为该药材的质量控制 捉供一定依据。3.2恿醍类为何首乌药材的主要成分之一，其中大黄素含量最高。大黄素 一般以游离型和结合型两种方式存在4，故测定酸水解后总游离大黄素的含 量作为质量控制指标较为科学。3.3由实验结果可知，制首乌中大黄索的含量显
11、著低于生首乌，这与文献 报道的何首乌药材炮制前后蔥醍类成分会发生变化5相一致。生首乌与制首 乌的功效不同可能与其中的大黄素含量差异密切相关，大黄素可视为生首乌约效 作用的指标性成分。【参考文献】1中华人民共和国药典委员会冲国药典S.2005版北京化学工 艺出版社，2005 ： 122123.2罗健，黎知林，李娟，等.TLC法测定何首乌及其制品中大黄素的含 量J广东药学院学报1997 13(3) : 182.3李义平，张胜春，杨广徳何首乌中大黄素的提取方法硏究J冲4刘三康，钱广生，李章万反相高效液相色谱法测定制首乌及其4种 中成药中大黄素的含量J药物分析杂志，1998，18(6) : 372.5郭青，鲁静高效液相色谱法测定何首乌及其炮制品中的蔥醍类成分 的含量J约物分析杂志2000，20(5) ： 326.
