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1、DNA提取方法逬展综述2014-05-10 14:18:51来源:浏览次数：21网友评论0条DNA提取方法进展综述张宁，王风山（山东大学药学院生化与左物技术药物研究所，山东 济南250012海洋药物杂志2004年第2期（总第98期）摘要：dna的提取是分子生 物学研究的基础技术，提取的DNA的纯度及结构完整性是进行基因T程（Genetic Engi 海 洋生物微生物DNA提取方法进展细胞组织蛋白质张宁，王风山（山东大学药学院生化与生物技术药物研究所，山东济南250012海洋药物杂忐2004年第2期（总第98期）摘要：dna的提取是分了生物学研究的基础技术，提取的DNA的纯度及结构完敕性是进行
2、基因工程（Genetic Engineering）项研究所必需的条件近年来一些新的或改进的DNA提 取纯化方法不断出现，木文对从陆生动物、植物、微生物以及海洋生物提取DNA的方法进 行综述。关键词：DNA；提取；动物；植物；微生物；海洋生物Advances of DNA extraction methodsZHANG Ning, WANG Feng-shan（In stitute o f Biochemic and Biotech no logical Drugs, School of Pharmacy, Shandon g University,Jinan 250012, China）Abs
3、tract： DNA extraction is a basic technology of molecular biology. The purity and the integrality of DNA structure are necessary for different experiments of gene eng ineering. In recent years there have been some new or improved DNA extraction methods appeared The methods of DNA extraction from anim
4、als, plants, microorga nisms and marine organisms were summarized in this article.Keywords： DNA； ex traction； an imals； plants； microorganisms； marine。rganismstl 20 tth纪50年代Watson和Crick提出DNA双螺旋模型以来，分了生物学在广度和深 度上都获得空前的发展。DNA作为分了生物学研究的基础，在生物领域尤其是遗传学方而 的研究口渐深人，在此基础上产生的基因T程（Genetic Engineering）技术已在医药、农业
5、、 畜牧业等领域获得广泛应用。研究和应用DNA的基础是提取纯化结构完幣的DNA,为此针 对不同来源的DNA建立了不同的提取纯化方法。木文对从陆生动物、植物、微生物以及海 洋生物来源的DNA的传统提取方法及近年来诸多的改良方法进行综述。1 动物来源的DNA的提取1. 1经典提取方法酚抽提法、异丙醇沉淀法以及甲駄胺裂解法是提取DNA最为经典的方法，目前很多方法 的改进都是在这些方法的基础上进行的，这二种方法均利川蛋白酶K和十二烷基硫酸钠（3 鸟）消化破碎细胞。在前两种方法中裂解液先川酚/氯仿去除蛋白质，再分别川乙酹或异丙酹 沉淀DNAo甲袱胺法是利用高浓度的甲忱按解聚蛋白质与DNA的结合，然后利用
6、透析来处 理DNA样品。这些经典方法获得的DNA纯度很高，能够满足各种试验的要求，但操作繁 琐，用时长，且所用试剂具有一定的毒性。1.2玻璃棒缠绕法该法川盐酸肌裂解细胞，然肩将细胞裂解物小心铺在离心管中的乙醇上，川一个带钩的 或前端为U形的玻璃棒在这两以液体的交界面慢慢搅动，沉淀出的胶状DNA缠绕在玻璃棒 上。玻璃棒上的DNA经多次乙醉浸泡并于室温下蒸干乙醉，由胶状逐渐冋缩，然示浸人T E中过夜，使其重新吸水膨胀进而和玻璃棒分离。这种方法对操作技术要求较高，但简单快 速。1.3血细胞DNA的快速提取法采用非离了变性剂NP40（乙基苯基聚乙二醉）代替SDS裂解细胞,提取细胞核，然后用 酚/氯仿抽
7、提DNA。这样从血液中分离获得的DNA纯度高，能够满足各种临床检验和实验 的需要也可采用NP40和Tween -20同时作用破碎细胞膜，以避免SDS对以后步骤的负 面作用。Ba sun i等门 采用了 4种常用的从血液中提取DNA的方法：High Pure Viral Nucleic试剂盒法、QIAamp试剂盒法、Tri- PureTM试剂分离提取法以及经典酚抽提法， 对通常作抛弁处理的血凝块进行人DNA及病毒DNA的抽提，发现前两种方法可以迅速高 效获得目的DNA,从而建立了由血凝块中提取DNA的方法，扩大了临床检验样木的来源。1. 4玻璃颗粒吸附法在该法中肖先利川含界硫亂酸肌的细胞裂解液裂
8、解细胞，然后加人含冇能够与DNA结合 的玻璃颗粒的缓冲液,经沉淀收集结合染色体DNA的玻璃颗粒，利川洗脱液进行洗脱获得 DNA。不仅玻璃颗粒可以与DNA进行结合，一定大小的硅胶颗粒也可以与DNA进行结合, 据此，不少实验工作者实践了很多利用颗粒结合DNA的提取方法。Pichler等2）在从抹 香鲸（Physeter macrocephalus）牙齿及骨骼中抽提DNA时采用了一种以二氧化硅为吸附 介质的方法,从抹香鲸标木骨骼纟H.织中钻取的少星粉末中获得了足够用于分析的DNA产物, 此方法扩大了对稀冇哺乳动物（mammal;mammalian）DNA研究的取材范I韦I。Caldarelli-st
9、e fano等 在从福尔马林固定、石蜡包埋的人体组织标本中提取DNA时利用小磁珠作为结 合核，也获得了理想的纯化DNA。很多试剂公司也依此设计生产了许多颗粒提取试剂盒，Pinto等4就探讨了采用Gibe，.公司的GlassMAX系统，对福尔马林固定的组织进行DN A提取的具体操作方法，日前这些试剂盒在临床上广为应用，省时省力。1.5三乙醉胺刀桂基硫酸盐（TLS）法rh于常 规方法中使川的蛋白酶K的水解条件不好掌握，采丿IJTLS来提取组织、细胞以及 外周血DNA可以克服这一弊端。TLS是一种较强的表瓯活性剂，将其頁接作用于细胞或 组织匀浆，可迅速溶解细胞膜、核膜，而且蛋白质与其结合后即火去对D
10、NA的结合，进一 步的纯化可采用常规方法。1. 6临床病理标木的DNA提取方法由于PC R技术不仅nJJIJ-T-基因分离、核酸序列分析，还可川于突变体和重纽体的构建、 基因表达调控研究、基因病的诊断及肿瘤发生机理的探讨等。近年來，PCR技术已广泛应 用于病理学研究，尤其对福尔马林固定石蜡包埋病理标木进行相关的研究更成为关注的焦 点。对于从这些病理标木中提取DNA的方法研究也很多。一般采用酚/氯仿抽提法，该法 虽然效率较高，但费时费力，而且其操作中要求多次离心，增加了样品污染的可能性。近年 来很多高效灵敏的方法在实践中得以采用，这些方法通常采用加热或微波法（S）去除包埠 的石蜡，使用Sepha
11、dex G- 5。柱色谱或盐析法s7等去除蛋H质。高文涛71等在研究福 尔马林固定石蜡包埋组织DNA提取方法对PCR的影响时，发现在组织切片中加人鳌合树 脂（Chelating Resin,亚氨基二乙酸）提取获得的DNA可取得较好的PCR扩增结果。Coo mbs等（s）则采用热循环方法，将标木上的蜡融人样品溶液，在酶的作用下进行裂解，然 后用Chelex-100进行吸附，离心去蜡，这种方法安全、简便、有效、经济。1.7盐析法该法用饱和氯化钠代替有机溶剂去除蛋白质，所获得的DNA质量可以满足PCR模板的 要求，但产率相对较低，纯度较差。谭建明等9对上述盐析法进行了改进，即将处理过的 样木加人SDS和蛋白酶K示，在569消化1h,然后用饱和氯化钠沉淀蛋白质，并经离心 除去，上清直接川乙醇沉淀DNA。该法简化了 DNA的抽提步骤，可用于人体备种样木DN A的提取，所获DNA的纯度可以满足备种检测的需要。关键词：海洋生物微生物DNA提取方法进展细胞纟R织蛋门质
