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1、苹兰阴性杆菌分科显色培养基的效果评价卢先雷潘臨摘要1目的为缩短Gb的鉴定时间，提高报告速度，作者设计了一种集分离鉴定于一 体的分科显色培养基 NBIIA （negative bacilli isolation and identification agar）,评价该培养基 对于革-兰阴性杆菌分离率和分科鉴定的准确性。方法 检测NBIIA对肠杆菌科、非发酵菌、 弧菌科的菌共39株不同种属的已知细菌的分科鉴定结果与金标准（OF+氧化酶）鉴定结果的 一致率;采用（NBUA+氧化酶）与（OF+氧化酶）对照,NBIIA与MC （麦康凯琼脂）对照, 对83（）份临床标木（大便标木除外）进行检测，统计分离率
2、差异及阳性标木分科鉴定一致率。 结果 三科39株细菌分科鉴定一致率：肠杆菌科90%,非发酵菌100%,弧菌科80%； NBIIA 与MC对830份标本G b的分离率各为19.9%、19.3%；二者一致率98.0%, （NBIIA+氧化酶） 与（OF+氧化酶）对阳性标木中G b的分科鉴定一致率97.8%。结论 NBIIA的分离效果 与传统MC差异不具显著性，但由于集分离鉴定于一体，可不必经过（OF+氧化酶）这一鉴 定步骤，有助于革兰阴性杆菌的快速鉴定。关键词革兰阴性杆菌培养基鉴定Evaluation of isolation and identification for Gramnegative
3、 bacilli with Gram-negative bacilli isolation and identification agarLu Xianlei, Clin iced MicrobiolLaboratory, The NO. 5 Hospital of Chengdu Chengdu U7cnJiang 611130 Sichuan, ChinaAbstract Objective To design a medium （NBIIA）that could be used for isolation and familial identification of Gram-negat
4、ive bacilli , and evaluated it isolation rate and familial identification effect for Gram-negative bacilli. Method Detecte the NBIIA medium and OF+oxidase testing with the 39 strains bacterid from Enterobacteriaeceae , Vibrioacae, Nonfermenters. And the accordance rate of familial identification was
5、 calculated Then 830 speciments （stool samples was excluded） was detecting ,with NBIIA and MC ,NBIIA+oxidase testing and OF+oxidase testing .And isolation rate ,accordance rate of familial identification was calculated and comared Result The accordance rates of the three family , 39 st rains bacteri
6、a were : Enterobacteriaecae was 90%, Vibrioacae was 80%, Nonfermenters was 100%. The accordance rate of familial identification of 165 strains bacteria from 830 specimens was 97. 8%;the isolation rates of Gram-negative from 830 specimens were :NBIIA was 19.9%, MC was 19.3% ; the accordance rate of i
7、solation was 19 3%. Conclusion isolation effect was not different with NBIIA or MC;But its isolation with identification for Gram-negative bacteria . nor steppi ng OF+oxidase , be con clucive to identification of Gram-negative bacteria.Key words Gram-negative mediumidentification在引起人类感染的Gb中，以肠杆菌科、非发
8、酵菌、弧菌科细菌最为多见1宀，但由于这 三类细菌形态特征相似，而实际所包含的属、种数量又报为庞大，故鉴定过程繁琐，耗时长 易出错，影响了检验报告的速度，很不适应临床的实际需要；而购置白动化仪器无论设备或 试剂都较昂贵，使成木大大增加，因而抬高了收费价格，增加了病人负担。为了解决这一作者单位：611130成都市第五人民医院检验科（卢先雷；潘露） 矛盾，作者研制了一种集分离鉴定于一体的Gb分科显色培养基，可在18h内将细菌分离并 鉴定至科，现介绍如下：1. 材料与方法：1.1材料：1蛋白月东、牛肉膏、麦康凯琼脂、氧化酶、微量生化管等购自杭州天和微生物试剂厂，示 月东、水解酪蛋白购H英国OXOID公
9、司，糖类、胆盘、各种指示剂、NaCl等稍生物化学试剂 为国产试剂。1.1.2培养基：（1）麦康凯琼脂（MC）：按规定用量配制,调整PH, 12TC灭菌后，倾制平皿;（2） Gb分科显色培养基（NBIIA）：配方:营养琼脂38g、葡萄糖10g、猪胆盐4g、Na2HPO4 6g、KH2PO4 2g H2O IL,加热溶解，调整PH 7.0后加入专用指示剂lml（可用1%溟甲酚紫 1.6ml代替），煮沸灭菌后倾制平1111 （不需高压灭菌）。1.1.3菌株:分别来源于卫生部临检中心;四川省临检中心（质控菌株）及临床分离所得（经 API复检定种）：1.131肠杆菌科（2（）株）：大肠埃希氏菌、弗氏枸椽
10、酸杆菌、迟缓爱徳华菌、产气肠杆菌、 阴沟肠杆菌、聚团多源菌、蜂房哈夫尼亚菌、肺炎克雷们氏菌、产酸克雷们氏菌、臭鼻克雷 们氏菌、摩根摩根菌、奇异变形杆菌、雷极普罗威登菌、伤寒沙门菌、粘质沙雷菌、普城沙 雷菌、深红沙雷菌、发光致病杆菌、小肠结肠炎耶尔森菌、列氏耶尔森菌。1.1.3.2非发酵菌（14株）：铜绿假单胞菌、施氏假单胞菌、产碱假单胞菌、洋葱伯克霍尔徳 菌、恶臭假单胞菌、嗜麦芽窄食单胞菌、腐败许诺吐菌、鲍曼不动杆菌、洛菲不动杆菌、粪 产碱杆菌、脑膜炎败血黄杆菌、产气巴斯徳菌、非液化莫拉菌、紫色色杆菌。1.1.3.3弧菌科（5株）：副溶血弧菌、河弧菌、嗜水气单胞菌、温和气单胞菌、类志贺邻单胞
11、菌。14临床标本：共830份：（1）来白我院住院和门诊病人。标木类型有：痰、尿、脓、宫颈 分泌物、精液、前列腺液、咽拭了、血（先增菌）、眼拭子、组织、胆汁、烧伤创面分泌物、 胸水（先增菌）、腹水（先增菌）、脑脊液（先增菌）等。（2）由于肠道菌群主要以肠杆菌科 为主，弧菌、非发酵菌罕见，故而NBIIA对于大便标木的检测意义不大，应加以排除。1.2方法：1.2.1判断方法与标准:1.2.1.1NBIIA 判断方法：肠杆菌科：黄色凸起菌落（某些菌属在菌落聚集处呈蓝色），中心浑浊，肓径 2.0mm-3.0rnrn （大）非发酵菌：兰色扁平菌落（鲍曼不动杆菌在菌落聚集处由于色素堆积而呈橙黄色，单 个菌落
12、无色但不透明），透明或半透明，直径1.0mm-2.0mm （小）弧菌科：淡黄色扁平菌落，干燥不透明，直径1.5mm-2.5mm （大）1.2.1.2OF+氧化酶判断方法：肠杆菌科：发酵（F）,氧化酶（-）非发酵菌：氧化/不利用（0/），氧化酶（+/）弧菌科：发酵（F）,氧化酶（+ ）1.2.1.3氧化酶+NBIIA判断方法：肠杆菌科：黄色凸起大菌落，氧化酶（）非发酵菌：兰色扁平小菌落（鲍曼不动杆菌中等菌落），氧化酶（+/）弧菌科：淡黄色干燥大菌落，氧化酶（+ ）1.2.2实验室评价：采用以上39株已知细菌对NBIIA进行测试，以OF+氧化酶试验作为金标准，比较二者 一致率，分别按科进行统计；1
13、.2.3临床应用试验评价：1.2.3.1NBIIA与MC平行测试，比较二者对于G b的分离率差异；1.2.3.2NBIIA+氧化酶与OF+氧化酶平行测试，比较二者对于Gb的分科鉴定一致率。2. 结果：2.1对39株己知细菌分科鉴定一致率：见表1；肠杆菌科一-致率：90%,其中沙雷菌属由于红色素干扰，以及生长较快而不易判断； 非发酵菌一致率：100%,其中鲍曼不动杆菌为中等菌落，不透明，其余备菌均为小菌落, 透明；弧菌科一致率：80%,其中气单胞菌由于菌落较大，黄色校深，易判断为肠杆菌。NBIIA 与氧化酶联用时可避免误判；三大科总体一致率：92.3%；2.2临床应用评价结果：2.2.1NBII
14、A与MC对于83()份标木分离率比较：见表2NBIIA 分离率：19.9%;MC 分离率：19.3%;二者一致率：98.0%; kappa=0.94, P0.01; 2.2.2NBIIA+氧化酶与OF+氧化酶对G B的分科鉴定的比较：二者一致率：161/165=97.8%;表139株已知Gb采用NBIIA与OF+氧化酶鉴定结果肠杆菌科非发酵菌弧菌科NBIIAOF+氧化酶OF+氧化酶OF+氧化酶合计准确错误准确错误准确错误准确1801404036错误200 0103合计2001405039表2NBIIA与MC对830份标本分离率比较NBIIAMC合计+-+15411165-6659665合计16
15、06708303. 讨论：对临床常见的三大类G b的鉴定在以前很长一段时间都是采用传统的双歧表流稈操作， 虽然鉴定较准确，但繁琐费时，报告时间长，很不适应临床需要。国外从80年代开始推广编 码法生化鉴定系统，于90年代引入我国，近1年来又有酶法生化鉴定系统及在编码法生化 鉴定基础上发展起来的|j动化仪器使鉴定速度大大加快。但即使如此也仍然跟不上临床感染 疾病的迫切需要。现在所采用的编码系统在应用前均应先经分科鉴定，确泄科级水平品才能 应用相应的编码体系，如此以来从分离培养到编码鉴定之间3648h的时问儿乎很难逾趣 所以解决分科鉴定是缩短整个报告时间的关键所在。而作者根据肠杆菌、非发酵菌、弧菌对 葡萄糖分解产酸能力强弱的不同、分解蛋白月东产碱相对产酸量的多少、及此二类细菌对胆盐 的耐受能力的大小所研制的这种分科显色培养基集分离鉴定于一体，很好地解决了这一问题 7-，2J，且与传统0F+氧化酶试验有高度一致性。在该培养基上，有很多细菌菌落形态具有十分独特的特征，如肺炎克雷伯氏菌黄色偏白、 黏液型特大菌落（3-5mm）,臭鼻克雷伯氏菌为中等大小黄色胶水样菌落，黏液型铜绿假 单胞菌的菌落呈透明胶水样，
