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1、临床微生物学与微生物检验clinical microbiology and Microorganism laboratory课程编号：Z6500b018课程类别：专业课程实验课性质：独立设课适用专业：检验医学实验学时：57实验学分：4.5先修课程：临床检验病原生物学实验指导实验指导书：临床微生物学与检验实验指导开课实验室名称及地点：临床医学实验中心6号实验教学大楼一、实验教学目的和基本要求（1）通过实验加深和巩固对理论知识的理解。（2）通过实验课中学牛的亲自动手操作，使学生熟悉、掌握临床微生物基木操 作技能，为以后从事临床微生物学检验和科学研究等工作打下坚实的基础。（3）通过实验课的实验操作，
2、帮助学生树立无菌观念，常握无菌操作技术。（4）通过实验帮助学牛熟悉和常握临床常见病原微牛物的生物学性状、分离培 养和鉴定方法，培养学生发现问题、分析问题和解决问题的基本能力。（5）同吋通过在实验课中对临床各种标木的微生物检测，培养学生将理论知识应用于临床实践及评价检验方法诊断价值的综合能力。二、实验课程内容和学时分配（见附表）三、考试方法及成绩评定方法：1、考试方法：（1）实验带教老师对实验报告进行评分；（2）操作技能考试；2、成绩评定方法：（1）实验操作技能占70%；（2）平时表现占10%；（3）实验报告占20%；适用专业及年级：检验医学五、主要仪器设备恒温培养箱、冰箱、光学显微镜、高床蒸汽
3、灭菌锅、净化工作台、酒精灯、接种针、接种环、试管及其它玻璃器皿等。六、实验指导书：吴爱武临床微生物学与检验实验指导北京：人民卫生出版社，2007年实验课程内容和学时分配序 号实验项目名称实验内容学时 分 配实 验 属 性实 验 类 型组 人 数实验 要 求指 导 教 师已开/ 未开1细菌形态学检杳普通光学显微镜 的使用与保养;不 染色标本检查；革 兰染色和细菌基 本形态观察;培养 基的制备3业呈础验证性1必做胡雪飞己开2消毒灭菌与培养 基制备技术高乐蒸气灭菌法； 压力蒸气灭菌器、 灭菌效果的监测 方法3业呈础验证性1必做胡雪飞开3细菌分离培养鉴 定技术标本的平板划线 分离法，斜面接种 法，液体
4、接种法， 穿刺接种法，倾注 平板法，涂布接种 法；生化鉴定；血 清学鉴定;数字编 码鉴定。3专 业 基 础验证性1必做胡雪飞已开4球菌培养与鉴速（一）葡萄球菌的鉴定 实验;链球菌的鉴 定实验3专业类综合性1必 做陈开森已开5球菌培养与鉴定（二）脑膜炎球菌的鉴 定实验3专业类综 合 性1必做陈开森已开6非发酵革兰阴性 杆菌的培养和鉴 定；苛养菌的培养和鉴定铜绿假单胞菌，不 动杆菌属的菌落 观察;铜绿假单胞 菌，不动杆菌属的 形态染色;铜绿假 单胞菌，不动杆菌3专业类验证性1必 做贾坤如己开属的鉴定；肺炎链 球菌和嗜血杆菌 的鉴定。7苛养菌的培养与 鉴定流感嗜血杆菌、副 流感嗜血杆菌及 肺炎链球菌
5、的培 养与鉴定。3专业类验证性1必 做胡龙华已开8革工阳性需氧杆 菌，棒状杆菌属 培养和鉴定炭疽芽胞杆菌、蜡 样芽胞杆菌、产单 核细胞李斯特菌、 白喉棒状杆菌的 菌落形态观察，生 化鉴定3专业类验证性1必做胡意已开9真菌F检验基本技术真菌培养的菌落 观察;真菌的形态 染色（革兰染色）； 墨汁负染色。3专业础验证性1必 做彭卫华已开10分枝杆菌属，放 线菌属与诺卡氏 菌属培养鉴定抗酸染色;结核分 枝杆菌的菌落观 察，形态特征。3专 业 类验证性1必 做廖晚珍己开11支原体，衣原体的鉴定支原体的培养鉴 定；支原体“油煎 蛋”样集落观察； 衣原体的色标试 验。3专业类验证性1必 做胡晓彦已开12弧菌
6、属培养和鉴定弧菌属的菌落观 察;弧菌属的形态 染色;弧菌属的生 化反应；霍乱弧菌 的血清学试验。3专业类验证性1必 做徐建民已开13肠道细菌培养和 鉴定（一）人肠埃希菌、沙门 菌属、志贺菌属、 克雷伯菌属，变形 杆菌属分离培养 鉴定。3专业类综合性1必 做胡龙华已开14肠道细菌培养和肠杆菌属、枸椽酸3专综1必胡龙华已开鉴定（二）菌属和沙雷菌属 分离培养鉴定。业类合性做15厌氧菌的培养和 鉴定破伤风梭菌、产气 荚膜梭菌的菌落 观察，形态染色； 厌氧菌标本采集 与运送;类杆菌的 形态染色;厌氧培 养、化反应。3专业类验证性1必 做桂炳东已开16螺旋体鉴定钩端螺旋体形态 观察;钩端螺旋体 血清凝集试
7、验;梅 毒螺旋体血淸凝 集试验。3专业类验证性1必做胡晓彦已开17抗菌药物敬感性试验与耐药性检测纸片琼脂扩散法 药墩试验；B 内 酰胺酶检测。3专业类验证性1必 做胡龙华已开18临床标本细菌学 检验血液、骨髓、尿液、 粪便、痰液、脓液、 脑脊液等标本的 接种，检验方法和 报告方式。3专业类验证性1必 做徐建民已开19物理因索对细菌 的彩响实验验证滤菌器的 除菌效果。比较 用不同热力杀 灭有芽胞细菌 和无芽胞细菌3专业类设计性1选做滋晚珍已开制定人：胡龙华审核人：王小中附件2：综合性设计性实验项H简介格式（各位老师可以按实际课程要求确定格 式）临床微生物学与微生物检验课程编码：Z6500b018
8、 面向专业：检验医学实验指导书：临床微生物学与检验实验指导设计性实验项目名称 设计物理因素对细菌的影响实验实验项目学时:3学时【实验目的】实验要求：必修选修1. 初步掌握实验设计的方法，了解实验小设置实验对照的意义。2. 掌握高用蒸汽灭菌法的操作和应用。3. 了解芽胞在热力和紫外线消毒中的较强抵抗力。4. 了解紫外线对细菌的作用;了解利用物理因索保存菌种的方法。5. 验证不同温度对细菌的影响。【实验器材】1. 试验菌种 提前1周通知实验室准备。(1) 大肠埃希菌(EscMrichia coli)(革兰阴性杆菌)。(2) 表皮葡萄球菌(Sfciphylococciis epide口nilis)(
9、革兰阳性球菌)。(3) 枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)(革兰阳性有芽胞菌)。2. 培养基可选用固体、液体、半固体培养基。实验设计方案经同学间相 互讨论后(必要吋由带教老师指导)，选择可行的方法和相应的培养基。提前1周通知实验室，需要特殊要求培养基由同学自己到实验准备室参与制 作和准备。3. 常用器材高压蒸汽灭菌器、60C水浴箱、沸水浴或100C水浴箱、4C 冰箱、定时钟、灭菌滤菌器和微孔滤膜或一次性无菌滤器、无菌棉签、无菌注 射器、紫外线灯、超净工作台。【操作步骤】1. 设计和完善实验方案(1) 针对实验要求和给定的试剂与器材，查找资料，结合己经掌握的理论 和实验知识，设计
10、实验方案。方案内容包括设计思路、实验方法和具体的操作 步骤、需要的试剂和器材、培养的条件、结果观察方法以及可能出现的问题， 写出预期实验结果。(2) 小组讨论，修改实验方案。(3) 课堂汇报，接受同学和老师的提问和建议，进一步完善实验方案，制 作 PowerPoint o2. 实施自己的实验方案(1) 提前1周通知实验室实验需要的培养基、试剂、器材等，并参加培养基配制等的实验准备T作。（2）按完善后的设计方案进行实验，详细记录实验过程及各种实验现象、 实验结果以及实验中出现的问题。3. 实验结果报告（1）实验结束后，分析实验结果，写出实验报告和心得体会。（2）按论文答辩形式制作PowerPoi
11、nt,以小组为单位在实验大组内或班级 汇报和答辩（具体视实验分组情况决定）。4. 汇报和总结（1）汇报人选：采用教师推荐和学生自荐两种形式选出一定比例（10% 20%）学生进行公开汇报。教师根据学生实验设计方案的严谨性、可行性、创 新性，实验结果的准确性，结合实验报告.PowerPoint制作和语言表达能力选择。 鼓励学生自荐，尤其是设计不够完善、实验过程小出现失误或差错、实验结果 不理想但分析问题深入和透彻、表达能力强的学生。（2）公开汇报：参加汇报的学生将完善的PowerPoint,包括整个实验的设 计、操作、结果和分析等按论文汇报的方式，在年级中进行公开汇报或答辩。 教帅或教学管理单位组
12、织专业教师和学生评选优秀实验设计等奖项。（3）总结：实验带教教师以实验组、班级为单位作总结和评价，对突出的 同学给以适当的鼓励和奖励。教研室或教学管理单位对参加公开汇报的学生进 行表彰，对获优秀奖项的学生进行鼓励和奖励。对有兴趣的同学，可吸收进入 科研小组。【实验内容】1. 验证滤菌器的除菌效果。2. 比较不同细菌（三种）在相同温度下（4、60、100、121 C）的抵抗力 （统一时间）。3. 比较同一细菌在不同温度下（4、60、100、121C）的抵抗力（统一吋间）。4. 比较用不同热力杀灭有芽胞细菌和无芽胞细菌（60C 20min 100C 5min 121C 15 min）的能力和效果。
13、5. 比较不同细菌（三种）对紫外线的抵抗力（10、30、60min）。【提示】1. 实验设计中应设置实验对照，如阳性对照、阴性对照、空白对照等。2. 注意严格无菌操作。3. 实验内容较多，可按热力、紫外线、过滤三个方面分别设计;需合理安 排实验项H和进程。4. 菌种、试剂、实验条件等较多，注意作好标记，防止出现差错。5. 注射器使用完毕后，放入指定回收箱内。6. 实验过程中出现问题，及时报告带教教师。7. 注意安全，尤其是使用高圧蒸汽灭菌器、水浴箱、紫外线灯时（请见附 件中的内容）o【附】1. 紫外线灯 常用的是水银灯，灯管由石英制成。管内充满压强为2 mmHg 的氮和几滴水银。卅通电时管内的氮气开始辉光放电，使灯管略为发热，水银 蒸发。当水银蒸气压变为0.1 mmHg时，即在其蒸气内产生电弧。这种电弧里含 有大量的紫外线。紫外线具有杀菌作用的波长范围200275 nmo紫外线具有辐 射能量低、穿透力弱的特点，一张普通的盖玻片即能阻碍它的通过，仅能杀灭 直接照射到的微生物，一般用于微生物实验、传染病房与外科手术室的空气消 毒。常用的紫外线灯有普通直管热阴极低圧汞紫外线消毒灯，有40W、30W、 20W、15W几种规格，这些紫外线灯在辐射253.7nm紫外线的同吋，也辐射
