《生物化学实验：实验 DNA的定量测定》由会员分享，可在线阅读，更多相关《生物化学实验：实验 DNA的定量测定（6页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、实验十五 DNA的定量测定一、实验目的 学习和掌握二苯胺法测定DNA含量的方法。二、原理 核酸含量的测定方法包括紫外吸收法、定磷法和分别针对DNA和RNA的颜色反应方法。本实验采用针对DNA的二苯胺法测DNA的含量。在酸性溶液中，DNA与二苯胺共热生成蓝色化合物，该物质在595nm有最大吸收，在40400mg/mL范围内其峰值与DNA含量成正比。 DNA + 100冰醋酸，少量硫酸蓝色物三、试剂和器材 1. 试剂 200mg/mL DNA标准溶液、二苯胺试剂 2. 器材 可见分光光度计、恒温水浴锅、分析天平四、操作步骤 1. 标准曲线的制作 取12只试管分成6组，按下表操作。取2管的平均值，以
2、DNA浓度为横坐标，光密度为纵坐标，绘制标准曲线。试试管012345标标准DNA/mL00.40.81.21.62.0蒸馏馏水/mL21.61.20.80.40二苯胺试剂试剂/mL44444460恒温水浴中保温1h，冷却，在595nm波长处长处 比色光密度值值 2. 样品的测定 取待测样品2mL，加入二苯胺溶液4mL，摇匀，60保温1h，然后在595nm波长出测定光密度值。根据测得的光密度值，从标准曲线上查得相应的DNA的ug数，按下式计算待测样品的DNA的含量。 DNA%五、注意事项 其他糖及糖的衍生物、芳香醛、蛋白质等都对实验有干扰，测定前应尽可能除去。待测样品中测得的DNA的mg数待测样品液中样品的mg数X 100六、思考题 1、 DNA含量测定的方法有哪些？各有何优缺点？ 2、简述二苯胺法测DNA的基本原理。
