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1、.名词说明1、生物技术制药：是指利用生物系统或通过生物反应过程生产药物的技术；2、生物药物：是指以生物资源为原料或以生物技术为手段开发生产的用作疾病的预防、诊断和治疗的医药品；2.5、限制酶：及其特性限制性核酸内切酶，是一类专一性很强的核酸内切酶，专一地识别和作用于DNA分子上特定的核苷酸序列，切断DNA双链；3、连接酶：能将两段DNA拼接起来的酶叫DNA连接酶；这类酶的发觉和分别纯化，使两个DNA片段在体外连接形成重组DNA分子成为可能； 4、限制酶星活性：在标准条件下，每种限制酶都有严格的识别序列；在非标准条件下，会导致限制酶识别序列的特异性发生转变，在DNA内产生附加切割，称限制酶的第2
2、活性或星活性；5、基因载体：在细胞内具有能进行自我复制的独立DNA分子作为外源DNA片段的运载体，简称基因载体，又称分子克隆载体或无性繁衍载体；6、粘粒：是一种有噬菌体粘性末端的杂种质粒，由DNA的cos区段与质粒DNA重组构建而成；7、基因文库：将供体生物的DNA用限制酶切成很多片段，在连接酶的作用下分别与克隆载体进行体外重组，这种含有供体生物全部不同基因的重组克隆载体的总体称供体生物的基因文库； 8、cDNA基因文库：以供体生物的总mRNA为模板，在反转录酶作用下合成核苷酸序列互补的DNA（cDNA），将全部cDNA分别与克隆载体进行体外重组，这些含有供体生物全部不同基因的重组克隆载体的总
3、体称供体生物的cDNA基因文库； 9、PCR技术：聚合酶链式反应（Polymerose chain reaction）技术，简称PCR技术，是一种用于在体外扩增位于两段已知序列之间的DNA区段的分子生物学技术；应用该技术可在很短的时间内得到数百万个特异DNA序列的拷贝；10、转化：将携带目的基因的重组质粒导入受体细胞的过程称为转化；11、转染：将重组噬菌体DNA直接导入受体细胞的过程称为转染；12、感染：将重组噬菌体DNA包装到噬菌体头部成为有感染力的噬菌体颗粒，再导入受体细胞的过程； 13、多克隆位点：基因载体上由多种限制酶单一识别序列组成的序列，是插入外源目的基因DNA片段的位点；14、高
4、丰度mRNA：从某些特定型分化细胞分别的细胞质中，编码某特种蛋白质的目的mRNA占总mRNA的5090%；称为高丰度mRNA；15、抗体：指能与相应抗原特异性结合的具有免疫功能的球蛋白； 16、单克隆抗体：采纳B淋巴细胞杂交瘤技术，由纯一的单克隆细胞系产生的，针对一个抗原打算簇的，结构和特异性完全相同的高纯度抗体称单克隆抗体； 精品.17、其次抗体：能与抗原和抗体发生免疫反应后形成的复合物进行特异结合的抗体，又称抗抗体； 18、克隆化：分别获得单细胞并将单细胞通过无性繁衍而获得细胞集团的整个过程；这些细胞集团中的每个细胞的生物学特性和功能是完全相同的；19、细胞分化：生物细胞随功能不同所产生的
5、形状变化称分化；20、悬浮培育：利用液体培育基培育生物细胞，使细胞悬浮于培育基中生长增殖的过程；21、贴壁培育：使细胞贴附在某种基质上生长繁衍的培育方法；22、愈伤组织培育：从植物各种器官的外植体增殖而形成愈伤组织的培育；23、外植体：指用于植物组织或细胞培育的器官或组织，如根、茎、叶、花、果、胚乳、胚珠、花粉等；24、继代培育：由最初的外植体上切下的新增殖的组织或细胞，培育一代称为“第一代培育”，连续多代的培育即为“继代培育”；25、植物生长调剂剂：指对植物的生长发育有调剂作用的物质，既包括人工合成的，也包括一些自然的化合物以及植物激素；26、植物激素：仅指植物自然产生的对植物的生长发育有调
6、剂作用的物质；简答题1、限制酶有哪些特性？（1）不同限制酶能专一地识别不同的特异核苷酸序列（核苷酸序列不同，序列大小不同）；（2）各种限制酶的识别序列都具有回文结构；（3）各种限制酶的切割类型是各式各样的，切后形成各种粘性或平整末端；（4）在标准条件下，每种限制酶都有严格的识别序列；在非标准条件下，会导致限制酶识别序列的特异性发生转变，在DNA内产生附加切割，称限制酶的第2活性或星活性；2、Taq DNA聚合酶的用途？该酶可用于对DNA进行测序，但主要用于PCR（聚合酶链式反应），对DNA分子的特定序列（目的基因）进行体外扩增；3、基因载体有哪些特性？要有复制子（Replicom）功能，且复制
7、起始区中没有限制酶的酶切位点；要含有强启动子，要有能促进外源DNA高水平表达的调控区；要有多种限制酶的单一切点，以适用于多种限制酶产生的DNA片段的插入；精品.具有两种以上易被检测的挑选性遗传标记，作为对重组与非重组转化体的挑选标记；载体DNA的分子量要尽可能小，以利于容纳较长区段的外源DNA片段；应属于放松型复制，能在氯霉素存在下扩增其拷贝数；从安全防治考虑，载体应为非传递性，有较小的宿主范畴，不为传递性载体所诱导；4、如何将自然的原始载体改造成抱负的基因载体？引入强启动子；引入挑选性标记基因；切除大部分余外序列段，以提高容纳外源DNA片段的才能；引入由多种限制酶单一识别序列组成的多克隆位点
8、；引入多种用途的帮助序列；5、简述cDNA基因文库构建的基本步骤；从供体生物细胞或组织中提取纯化得总RNA；从总RNA中分别纯化出总mRNA；以总mRNA 为模板反转录合成总cDNA；总cDNA分别克隆到载体上构建DNA重组体；cDNA文库的鉴定；含目的基因cDNA重组体的挑选6、 PCR技术的基本程序变性：第一使双链DNA在反应液中经热变性（9495）而分开成单链（或使反转录合成的cDNA:RNA杂交链分开成单链）；退火：然后降温至4060，在低温下与两个引物进行退火，使引物与单链DNA配对结合； 延长：再在中温72下利用Taq DNA聚合酶的聚合活性和热稳固性进行聚合（延长）反应；7、简述
9、RT-PCR技术合成目的基因的基本 步骤； 从供体生物特定分化型组织或细胞中提取纯化总RNA，其中目的mRNA为高丰度mRNA； 以OligodT为引物，以总RNA中的总mRNA为模板，在反转录酶作用下合成互补的总cDNA； 变性：升温至9495加热5min，使总mRNA cDNA的杂交链由于热变性而分开成单链； 退火：降温至4060，加入“上游”寡核苷酸引物和“下游”寡核苷酸引物，进行退火，使引物与单链mRNA和cDNA结合； 引物应是与目的基因3端互补的核苷酸序列精品.延长：升至中温72，在反应体系中（扩增缓冲液）加入Taq 聚合酶和四种dNTP，分别以目的mRNA和目的cDNA单链为模板
10、进行聚合（延长）反应；如此按变性、退火、延长进行约30次重复循环，得到目的cDNA大量拷贝（10 6倍）；从反应液中分别提取出双链目的cDNA扩增产物；目的cDNA与载体DNA进行体外重组，构建重组克隆载体；带有目的cDNA的重组载体转导进入宿主细胞；8、目的基因DNA与载体DNA体外重组的定向克隆法和粘性末端连接法各有何特点？如何克服酶切后同一DNA片段自身环化？（1）定向克隆法：当用两种不同的限制酶（如用BamH和Hind）消化同一DNA基因组时，切下来的同一DNA片段带有非互补的突出末端，这样供体DNA片段只能以一个方向很简单地连接到同样用BamH和Hind进行消化而产生相匹配粘性末端的
11、载体DNA当中；特点：该法的优点是由于载体DNA片段两突出末端不互补，不能自身环化，但与目的基因DNA片段定向重组率却较高；（2）粘性末端连接法：用一种限制酶酶切，会产生带有相同粘性末端的外源目的DNA片段，必需与用同一种限制酶消化而形成具有相同匹配末端的质粒载体相连接；特点：质粒载体DNA和外源DNA片段都可能发生自身环化，也有可能形成串联寡聚物；（3）用碱性磷酸酶去除载体DNA两端的5磷酸基团以尽量削减载体DNA的自身环化或连接；经去磷酸化的载体DNA仍旧可有效地与具有5末端磷酸的外源DNA相连接；9、抱负受体细胞应具有哪些特性？具有接受外源DNA的才能，能进展成感受态细胞；应为限制酶和修
12、饰系统缺陷型，即外源DNA导入后不致被降解或修饰；其遗传型应是抗重组（rec A-）的，以保持外源DNA在受体细胞中的完整性；不适于在人体内或非培育条件下生存；重组体DNA不易转移，只在受体细胞中复制；10、抗生素抗性基因失活法挑选含目的基因工程细胞株的原理和方法；很多质粒载体都带有1个或多个抗生素抗性基因标记，在这些抗药基因内有限制酶的识别位点；当用某种限制酶消化并在此位点插入外源目的DNA时，抗药基因不再表达，称为抗性基因插入失活；当插入外源目的DNA的重组载体导入宿主细胞并在药物挑选性平板培育时，依据对该药物由抗性转变为敏锐，便可挑选出重组转化子；精品. 先用含Amp的挑选性平板培育基涂
13、布培育，剔除大部分非转化的宿主细胞；将全部长出的单菌落编号后分别接种于含Tet的挑选性培育基上，在此培育基上不能生长的菌落，即为外源基因插入Tetr基因的BamH酶切位点的重组菌株，长出的为含有非重组质粒载体的宿主细胞株11、-半乳糖苷酶插入失活法挑选含目的基因工程细胞株的原理和方法；很多质粒载体（如PUC系列）都带有一个来自大肠杆菌的Lac操纵子的部分DNA区段（ Lac Z和调控序列Lac R），这一区段编码-半乳糖苷酶N端的一个片段（但无酶活力）；宿主细胞可编码-半乳糖苷酶C端的部分片段（也无酶活力），但两者之间可通过基因互补（称互补），从而融为一体形成具有酶活力的-半乳糖苷酶；由互补而
14、产生的Lac+细菌在有诱导物异丙基-D-硫代半乳糖苷（IPTG）和生色底物5-溴-4-氯-3-吲哚-D-半乳糖苷（X-gal）的培育基上形成蓝色菌落；当外源DNA片段插入到质粒载体的多克隆位点后，Lac Z片段失活，破坏了互补作用；因此，带有外源目的DNA重组质粒的细菌将产生白色菌落，从而仅通过目测就可识别并挑选出带有重组质粒的转化子菌落；12、用于制备杂交瘤细胞的骨髓瘤细胞应具备哪些特性（简答题）？ 不能产生自身免疫球蛋白为防止杂交瘤细胞分泌的抗体不纯，骨髓瘤细胞不具有产生抗体的才能；应为HGPRT缺陷的细胞系其细胞内嘌呤核苷酸或嘧啶核苷酸合成的补救途径必需丢失；即磷酸核糖转移酶或嘧啶核苷酸
15、激酶的活力丢失，即HGPRT阴性细胞；3.合率高，简单培育，所产生的杂交瘤细胞分泌抗体的才能强且长期稳固；13、杂交瘤细胞挑选性培育的原理？挑选性培育基为HAT培育基，它是用次黄嘌呤（H）、氨基喋呤（A）和胸腺嘧啶（T）配制的；其中氨基喋呤（A）能阻断DNA合成的主要途径；骨髓瘤细胞因是HGPRT缺失型，无DNA合成的补偿途径，因此瘤细胞和瘤-瘤融合细胞因不能合成DNA而死亡；而B细胞和B-B融合细胞在这样的离体培育条件下，无法生存几天内亦快速死亡；骨髓瘤细胞是HGPRT（磷酸核糖转移酶）缺陷型，但B细胞中有这种酶，因此B-瘤融合的杂交瘤细胞含有HGPRT酶，可利用次黄嘌呤和胸腺嘧啶（T）来合成DNA，使杂交瘤细胞得以生长； 14、贴壁依靠型动物细胞离体培育有哪些形状类型，与其来源有何关系？ 贴壁依靠型动物细胞离体培育形状类型有： 纤维样细胞型精品. 贴壁培育时，细胞呈梭形或不规章的三角形，细胞群常连接成网，生长时呈放射状、漩涡状或火焰状； 主要来源于中胚层组织的细胞（成纤维细胞、心肌细胞、平滑肌细胞或成骨细
