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1、.生物分别的新技术分子印迹 创新论坛工业生物技术专家报告会2021级生命学院3班微生物与生化药学专业 2021001243 宋汉臣 精品.目 录1分子印迹技术的原理与方法31.1 MIP的制备过程31.2制备MIP的方法31.2.1预组装法共价键作用41.2.2自组装法非共价作用41.2.3 共价作用与非共价作用联合法52 分子印迹技术在分别上的应用52.1 MIP作为固定相的分别技术62.1.1MIP作为固定相分别自然产物62.1.2MIP作为固定相检测食品中药物的残留72.2分子印迹膜MIM分别技术73问题与展望84 参考文献9精品.摘要：分子印迹技术1Molecular Imprinti
2、ng technique，MIT是一种新的、很有进展潜力的分别技术；由于其具有挑选性高、抗恶劣环境才能强、稳固性好、使用寿命长、应用范畴广等优点，分子印迹聚合物已广泛应用于生物工程、临床医学、环境监测及食品工业等众多领域，在分别提纯、免疫分析、酶模型以及生物模拟传感器等很多方面显示出良好的应用前景，引起了人们的广泛关注，其有望在三聚氰胺的快速痕量检测上发挥作用；关键字：分子印迹 生物分别 分子印迹聚合物精品.前言：分子印迹技术最初显现源于 20世纪 40岁月的免疫学，当时Pauling3首次提出抗体形成学说为分子印迹理论的产生奠定了基础， 1993年Mosbach等人有关茶碱分子印迹聚合物的讨
3、论报道，使这一技术在生物传感器、人工抗体模拟及色谱固相分别等方面有了新的进展，得到世界注目并快速进展；基于该技术制备的分子印迹聚合物具有亲和性和挑选性高、抗恶劣环境才能强、稳固性好、使用寿命长、应用范畴广等特点,因此分子印迹技术在很多领域，如色谱分别、固相萃取、仿生传感、模拟酶催化、临床药物分析、膜分别等领域得到日益广泛的讨论和开发，有望在生物工程、临床医学、自然药物、食品工业、环境监测等行业形成产业规模化的应用；目前，全世界3至少有包括瑞典、日本、德国、美国、中国、澳大利亚、法国在内的 10多个国家、100个以上的学术机构和企事业团体在从事分子印迹聚合物的讨论和开发；精品.分子印迹技术是近年
4、进展起来的一种新方法2，它可为人们供应具有期望结构的性质的分子组合体；当体系中存在着模板分子时，功能单体可以通过聚合使这些模板分子以互补的形式固定下来；聚合后，模板分子可被除去，于是在这一过程中，体系变动的“快照”就可被“拍照”或记录下来，此对模板分子具有“记忆”功能，再遇到模板分子时就表现出特殊的识别性能；从而使获得的分子组装体能专一性地键合模板分子以及它的类似物；1分子印迹技术的原理与方法分子印迹技术是指制备对某一特定分子具有挑选性识别才能的聚合物的技术；模板分子与功能单体相互作用形成超分子复合物，再在交联剂作用下形成聚合物；当在肯定条件下除去模板分子后，即可得到分子印迹聚合物MIP4；1
5、.1 MIP的制备过程5MIP的制备过程主要由如下 4步构成：（1）印迹分子与功能单体通过共价或非共价键作用相互结合，形成印迹分子-单体协作物（图1步骤3）（2）在协作物中加入交联剂，受引发剂、热或光引发，印迹分子-单体协作物周 围产生聚合反应；在此过程中，聚合物链通过自由基聚合将模板分子和单 体协作物“捕捉”到聚合物的立体结构中；常用交联剂有：双甲基丙烯酸乙二醇酯、季戊四醇三丙烯酸酯、三甲氧基丙烷、三甲基丙烯酸酯、二乙烯基苯等；（图1步骤4）（3）洗脱6印迹分子，得到印迹聚合物，形成含有与印迹分子外形和功能基团排列相匹配的空穴；分子印迹的3个过程可用图1来描述；（图1步骤5）因此MIP对印迹
6、分子有“记忆”功能，对其具有高度的挑选性；精品.图1分子印迹示意图34 后处理；在相宜的操作条件下对印迹分子聚合物进行成型加工和真空干燥等后处理；所制备的分子印迹聚合物应具备良好的物理化学和生物稳固性、高吸附容量和使用寿命、特定的外形尺寸，以获得较高的应用效率；1. 2制备MIP的方法2依据印迹分子和功能单体之间的作用可将制备MIP的方法分为以下三种：1. 2.1预组装法 Pre-organized approach共价键作用共价键法是由Wullf等人创立进展起来的；该方法中印迹分子 目标分子 和功能单体以共价键的形式结合生成单体模板协作物，单体模板协作物于交联剂反应生成聚合物后，进一步在化学
7、条件下打开共价键使印迹分子脱离；此时形成的共价键既稳固又可逆，这好像是相互冲突的双重特性，所以注定了其生成的分子稳固性高、抗性好、挑选性强，但产物的洗脱困难的特性；共价键法主要应用于制备各种具有特异识别功能的聚合物，如糖类及其衍生物、甘油酸及其衍生物、氨基酸及其衍生物、香酮、醛类及甾醇类物质；1.2.2自组装法（Self-assembly approach）非共价作用非共价键法是由Mosbach等人进展起来的，即把适当比例的印迹分子与功能单体和交联剂混合，通过非共价键结合在一起生成非共价键印迹分子聚合物；非共价作用不必合成共价的单体-模板协作物，可在温顺的条件下很快的将模板从聚合物中除去，拥有
8、较快的反应速度，但这些也恰恰反映了非共价作用的缺点：挑选特异性不强、生成的聚合物不稳固；此法主要应用于以下物质的分别中: 染料、二胺、维生素、氨基酸衍生物、多肽、肾上腺素功能药物阻抑剂、茶碱、二氮杂苯、核苷酸碱基、非甾醇类抗感染药莱普生和苄胺等；共价键法和非共价键法的主要区分在于：单体与模板分子的结合机理不同，非共价键法中通过弱的相互作用力在溶液中自发地势成单体模板分子复合物，而共价键法是通过单体和模板分子之间的可逆性共价键合成单体模板分子复合物的，见图133；精品.图13 共价作用与非共价作用过程31.2.3 共价作用与非共价作用联合法近来 Vulfson等人又进展了一种称之为“牺牲空间法
9、sacrificial spacer method”的分子印迹技术；该法实际上是把分子自组装和分子预组织两种方法结合起来形成的方法，其制备过程如图 14所示；图 14牺牲空间法示意图模板分子与功能单体以共价键的形式形成模板分子的衍生物单体模板分子复合物，这一步相当于分子预组织过程，然后交联聚合，使功能基固定在聚合物链上，除去模板分子后，功能基留在空穴中；当模板分子重新进入空穴中时，模板分子与功能单体上的功能基不是以共价键结合，而是以非共价键结合，犹如分子自组装；那么整个过程也就是制备时模板分子与功能单体共价结合，反应时底物分子和聚合物非共价结合；这样就同时拥有了稳固性高、抗性好、挑选性强等预组
10、装法过程的优点，和反应快，易分别的自组装法优点；2 分子印迹技术在分别上的应用7MIP具有良好的操作稳固性和特异的识别性质，不受酸、碱、热、有机溶剂等各种环境因素影响的特点；MIP的印迹分子范畴宽阔，MIP的最重要的用途之一就是用于分别混合物，MIP用于分别中最主要的用途之一是作为色谱固定相，并已用于高效液相色谱 HPLC、毛细管电色谱CEC、以及薄层色谱 TLC分别中，仍用于膜分别、固相萃取等重要分别技术；2.1 MIP作为固定相的分别技术分子印迹固相萃取具有：对目标物能挑选性吸附；能耐高温高压、耐有机溶剂；重复使用次数高等优点；自从Sellergren8于1994年将MIPs用于戊脒的固相
11、萃取以后，基于MIPs的固相萃取MISPE技术已被广泛应用于药物、生物、食品、环境样品分析，作为监测药物生物大分子、烟碱、除草剂、农药、硝基酚等的前处理2.1.1MIP作为固定相分别自然产物自然产物有效成分含量低，难于富集；体系复杂，大分子和小分子、生命和非生命物质共存，存在结构相近的异构体，分别纯化难度大；很多自然产物精品.具有热敏，易水解等特点；将MIP应用于中药成分的分别纯化就是以待分别的化合物为印迹分子也称模板、底物，制备对该类分子有挑选性识别功能的MIPs，然后以这种MIPs作为吸附材料用于中药成分的分别纯化；其最大的特点是分子识别性强，挑选性高，成本低，而且制得的MIPs有高度的交
12、联性，不易变形，有良好的机械性能和较长的使用寿命，这无疑是一种高效的中药有效成分分别技术；尹艳凤9等以大黄素分子为模板,甲基丙烯酸为单体,乙二醇二甲基丙烯酸酯为交联剂,甲苯和十二醇为混合致孔剂,在优化的合成条件下制得的分子印迹整体柱能有效地分别大黄素及其类似物；程绍玲10将MIP用于葛根提取物的分别，有效地从葛根提取物中分别出葛根素、大豆苷元和大豆苷，并且所得产品中葛根素纯度为78 ，收率为83 ，远要高于一般大孔吸附树脂对葛根提取液的分别结果；雷启福11等制备了以没食子儿茶素没食子酸酯为模板分子，采纳本体聚合法制备了分子印迹聚合物，讨论了其特异的分子识别才能，利用聚合物的高挑选性和结合才能，
13、对茶叶提取物茶多酚中有效成分进行固相萃取剂分别富集，实现了产物的色谱分别检测；长春碱与长春新碱具有很高的理化相像性很难分别，冯建涌等12将制备的长春碱（VLB）分子印迹聚合物填充于固相萃取小柱中，用甲醇:冰醋酸（6：4，v/v）为溶剂抽提聚合物，抽提后的聚合物通过氢键等非共价键作用能特异性地吸附模板分子VLB，而对VLB的结构类似物长春新碱没有挑选性；向海艳13以白藜芦醇为模板分子合成了对自然活性物质白藜芦醇具有较好挑选性的MIPs，对白藜芦醇有较高的吸附性能和挑选性：将虎杖提取物经白藜芦醇MIPs固相萃取，得到主要含白藜芦醇及少量结构与其相像的白藜芦醇苷组分，显示出分子印迹分别法在中药有效成
14、分分别纯化中可喜的应用前景！2.1.2MIP作为固定相检测食品中药物的残留食品安全性问题日益突出，食品中农药、兽药残留等问题已对环境造成污染，给人类带来危害，最近的三聚氰胺大事再一次为食品检测敲响警钟；很多食品样品的基体和组成相当复杂，被分析物处于痕量状态，易受到干扰；MIP具有优越的识别性和挑选性；我国特别重视此项技术的讨论和进展，“十一五”开局的2006年，国家863方案将分子印迹技术在食品中农药、兽药残留检测领域的应用作为重点技术进行支持，并以现代农业技术领域专题的形式进行立项；乐果是一种高效广谱性杀虫杀螨剂,具有剧烈内吸和触杀作用,对害虫击倒快，对人、畜毒性较高；2007年北京化工高校的Lv Yongqin14“讨论了以杀虫剂乐果dimethoate为模板分子制备乐果印迹聚合物，并用该印迹聚合物装
