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1、一般高中课程标准试验教科书生物选修1 人教版 课题 1 微生物的试验室培育课题目标（一）学问与技能明白有关培育基的基础学问；把握培育基的制备，高压蒸汽灭菌和平板划线法等基本操作技术（二）过程与方法分析试验思路的确定和形成的缘由，分析试验流程，对比前面的试验设计，归纳共性，分析差异，增加印象（三）情感，态度与价值观形成勇于实践，严谨求实的科学态度和科学精神 课题重点 无菌技术的操作|精.|品.|可.|编.|辑.|学.|习.|资.|料. 课题难点无菌技术的操作 教学方法 启示式教学 教学工具 多媒体课件 教学过程（一）引入新课在传统发酵技术的应用中，都利用了微生物的发酵作用，其中的微生物来自于制作
2、过程中的自然感染；而在工业化生产中，为了提高发酵的质量，需要获得优良菌种，并保持发酵菌种的纯度；这就要涉及到微生物的培育，分别，鉴别等基本技术；现在我们开头学习微生物的培育和应用专题；（二）进行新课1基础学问1. 1 培育基的种类包括固体 培育基和 液体 培育基等；摸索 1琼脂为从红藻中提取的多糖 ，在配制培育基中用作为凝固剂 ；【补充】培育基的类型及其应用：标准培育基类型配制特点主要应用固体培育基加入琼脂较多菌种分别 ,鉴定,计数物理性质化学组成目的用途半固体培育基加入琼脂较少菌种储存合成培育基由已知成安排制而成，培育基成分明确菌种分类，鉴定自然培育基由自然成安排制而成，培育基成分不明确工业
3、生，产降低成本鉴别培育基添加某种指示剂或化学药剂菌种的鉴别挑选培育基添加（或缺少）某种化学成分菌种的分别液体培育基不加入琼脂工业生产，连续培育1. 2 培育基的化学成分包括水 ， 无机盐 ， 碳源 ， 氮源 四类养分成分；摸索 2从细胞的化学元素组成来看，培育基中为什么都含有这些养分成分？C，H，O，N，P，S 为构成细胞原生质的基本元素，约占原生质总量的97以上；【补充】碳源：如CO2，糖类，脂肪酸等有机物，构成微生物的结构物质和分泌物，并供应能量；氮源：如 N2 ，氨盐，硝酸盐，牛肉膏，蛋白胨等，主要用来合成蛋白质，核酸及含氮代谢物等；含有C，H，O，N 的化合物既可以作为碳源，又可以作为
4、氮源，如氨基酸等；1 3 培育基除满意微生物生长的pH ， 特别养分物质和 氧气 等要求；【补充】生长因子：某些微生物正常生长代谢过程中必需从培育基中吸取的微量有机小分子，如某些氨基酸，碱基，维生素等；|精.|品.|可.|编.|辑.|学.|习.|资.|料.摸索 3牛肉膏和蛋白胨主要为微生物供应糖 ， 维生素 和 有机氮 等养分物质；摸索 4培育乳酸杆菌时需要添加维生素 ，培育霉菌时需要将培育基pH 调剂为 酸性 ，培育细菌时需要将pH调剂为 中性或微碱性；活动 2：阅读“无菌技术”，争论回答以下问题：1 4 获得纯洁培育物的关键为防止外来杂菌的入侵；1 5 无菌技术包括：（ 1）对试验操作空间
5、，操作者的衣着和手进行清洁和消毒 ；（ 2）将培育器皿，接种用具和培育基等器具进行灭菌 ；（ 3）为防止四周微生物污染，试验操作应在酒精灯火焰邻近旁进行；（ 4）防止已灭菌处理的材料用具与四周物品相接触；1. 6 比较消毒和灭菌（填表）比较项理化因素的作用强度毁灭微生物的数量芽孢和孢子能否被毁灭消毒较为温顺部分生活状态的微生物不能灭菌摸索 5无菌技术除了防止培育物被污染外，仍具有的目的为防止感染试验操作者；1. 7 消毒方法：（ 1）日常生活常常用到的为煮沸 消毒法；（ 2）对一些不耐高温的液体，就使用巴氏 消毒法（作简要介绍）；（ 3）对接种室，接种箱或超净工作台第一喷洒石炭酸或煤酚皂等溶液
6、以增强消毒成效，然后使用紫外线 进行物理消毒；（ 4）试验操作者的双手使用酒精 进行消毒；（ 5）饮水水源用氯气 进行消毒；1. 8 灭菌方法：（ 1）接种环，接种针，试管口等使用灼烧 灭菌法；（ 2）玻璃器皿，金属用具等使用干热 灭菌法，所用器械为干热灭菌箱 ；（ 3）培育基，无菌水等使用高压蒸汽 灭菌法，所用器械为高压蒸汽灭菌锅；（ 4）表面灭菌和空气灭菌等使用紫外线 灭菌法，所用器械为紫外灯 ；摸索 6对接种环灭菌时要用酒精灯的充分燃烧 层火焰灼烧可能伸入试管或培育皿的部位；|精.|品.|可.|编.|辑.|学.|习.|资.|料.摸索 7利用干热灭菌箱对玻璃器皿灭菌时物品不能摆得太挤，目的
7、为防止阻碍热空气流通；摸索 8物品装入高压蒸汽灭菌锅灭菌后，要第一打开排气阀，煮沸并排除锅内冷空气，其目的为有利于锅内温度上升 ；随后关闭排气阀连续加热，气压升至100k Pa ，温度为 121 ，并维护 15 30 min ；最终切断热源，使温度自然降温，气压务必降至零 时打开锅盖，其目的为防止容器中的液体暴沸；【补充】培育基的配制原就：目的要明确：依据培育的微生物种类，培育的目的等确定培育基的类型和配制量；养分要和谐：培育基中各种养分物质的浓度和比例要相宜；例如：碳氮比4 1 时，谷氨酸棒状杆菌大量繁衍而产生谷氨酸少；碳氮比为3 1 时，菌体繁衍受抑制而谷氨酸合成量大增； pH 要相宜：细
8、菌培育基pH 中性或偏碱性，霉菌培育基呈酸性；2. 试验操作2 1 运算：依据配方比例，运算100mL 培育基各成分用量；2 2 称量：精确称取各成分；称取牛肉膏和蛋白胨时动作要快速，目的为防止牛肉膏吸取空气中水分；2 3 溶化：加水加热熔化牛肉膏；加入蛋白胨和氯化钠连续加热；加入琼脂；用蒸馏水定容到100mL ；整个过程不断用玻棒搅拌，目的为防止琼脂糊底而导致烧杯破裂；2 4 调 pH ：用 1mol/LNaOH溶液调剂 pH 至偏碱性；2 5 灭菌：将配制好的培育基转移到锥形瓶中，加塞包扎后用高压蒸汽灭菌锅灭菌；所用培育皿用报纸包扎后用干热灭菌箱灭菌；2 6 倒平板：待培育基冷却至50左右
9、时在酒精灯火焰邻近操作进行；其过程为：在火焰旁右手拿锥形瓶，左手拔出棉塞；右手拿锥形瓶，使锥形瓶的瓶口快速通过火焰；左手将培育皿打开一条缝隙，右手将培育基倒入培育皿，马上盖上皿盖；待平板冷却凝固后，将平板倒过来放置；摸索 1锥形瓶的瓶口通过火焰的目的为毁灭瓶口的杂菌，防止杂菌感染培育基；摸索 2倒平板的目的为防止培育基冷却过程中形成的水滴落到培育基表面；摸索 3如皿盖和皿底之间粘有培育基，就该平板能否培育微生物？为什么？ 不能；空气中杂菌会在这些粘附培育基上繁衍，并污染皿内培育基；|精.|品.|可.|编.|辑.|学.|习.|资.|料.摸索 4配制斜面培育基中，试管要加塞棉塞的目的为保持通气并防
10、止杂菌感染；摸索 5试管培育基形成斜面的作用为增大接种面积；2 7 接种2 7 1 微生物接种的最常用方法为平板划线法和稀释涂布法，另外仍有穿刺接种和斜面接种等；272 平板划线法：通过接种环在琼脂固体培育基表面连续划线的操作，将集合的菌种逐步稀释分散到培育基表面；其操作步骤为：将接种环在酒精灯火焰上灼烧直至烧红；在酒精灯火焰旁冷却接种环，并打开大肠杆菌的菌种试管的棉塞；将菌种试管口通过火焰达到毁灭试管口杂菌的目的；将冷却的接种环伸入到菌液中取出一环菌种；将菌种试管口再次通过火焰后塞上棉塞；将皿盖打开一条缝隙，把接种环伸入平板内划3 5 条平行线，盖上皿盖，不要划破培育基；灼烧接种环，冷却后从
11、第一区划线末端开头向其次区域内划线；重复上述过程，完成三，四，五区域内划线；留意不要将第五区的划线与第一区划线相连；将平板倒置放在培育箱中培育；摸索 6取菌种前灼烧接种环的目的为毁灭接种环上的微生物；除第一次划线外， 其余划线前都要灼烧接种环的目的为毁灭接种环上残留菌种；取菌种和划线前都要求接种环冷却后进行，其目的为防止高温杀死菌种；最终灼烧接种环的目的为防止细菌污染环境和操作者；摸索 7在第 1 次划线后都从上次划线末端开头的目的为获得由单个细菌形成的标准菌落；2 73稀释涂布平板法：将菌液进行一系列梯度稀释，并将不同稀释度菌液分别涂布到琼脂固体培育基上进行培育；当稀释倍数足够高时，即可获得
12、单个细菌形成的标准菌落；2. 7 4系列稀释操作：取盛有 9mL 水的无菌试管 6 支，编号 101，102，103，104， 105，106；用灼烧冷却的移液管吸取1mL 菌液注入编号为101 试管中，并吹打 3 次，使之混匀；从 101 倍液中吸取 1mL 菌液注入到编号为102 试管内吹打匀称，获得102 倍液；依此类推；摸索 8操作中试管口和移液管应在离火焰12cm 处；整个操作过程中使用了1 支移液管；3. 结果分析与评判|精.|品.|可.|编.|辑.|学.|习.|资.|料.3 1培育未接种培育基的作用为对比，如有菌落形成，说明培育基灭菌不完全；3 2在肉汤培育基上，大肠杆菌菌落呈白
13、色，为圆形，光滑有光泽，边缘整齐；3 3培育 12h 和 24h 后的菌落大小不同（相同，不同）；菌落分布位置相同（相同，不同）；缘由为时间越长， 菌落中细菌繁衍越多，菌落体积越大；菌落的位置不动，但菌落数增多；摸索 9在某培育基上显现了3 种特点不同的菌落，缘由有培育基灭菌不完全或杂菌感染等；摸索 10频繁使用的菌种利用暂时保藏法储存，长期储存菌种的方法为甘油管藏法；前者利用固体斜面培育基培育后，储存在 4冰箱中，每 3 6 个月转种培育一次，缺点为储存时间较短，简洁发生污染和变异；后者将菌种与无菌体积等量混合后储存在20冷冻箱中；（三）课堂总结，点评微培育基生物配制培育基的原就的培育基的配制运算称量溶化实验配制培育基的方法调 pH分装加棉塞灭菌倒平板室平板划线法培养纯化大肠杆菌稀释涂布法系列稀释平板涂布无菌技术（四）实例探究例 1关微生物养分物质的表达中，正确选项A. 为碳源的物质不行能同时为氮源B. 凡碳源都供应能量C.除水以外的无机物只供应无机盐D. 无机氮源也能供应能量解析：不同的微生物，所需养分物质有较大差别，要针对微生物的详细情形分析；对于A ，B 选项，它的表达为不完整的；有的碳源只能为碳源，如
