《HAVHCV抗体检测---袁汀》由会员分享，可在线阅读，更多相关《HAVHCV抗体检测---袁汀（26页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、肝炎检测技术（HAV、HCV-ELISA法）,主要内容,Part ELISA技术简介 Part HAV/HCV抗体检测 Part HAV/HCV相关知识,Part ELISA技术简介,底物显色 定性或定量的分析,原理,包被,反应 加入待测抗体或 抗原和酶标抗原 或抗体,洗涤 使结合在固相上 的抗原抗体复合物 与未结合的分离,1,2,3,4,固相的抗原或抗体,酶标记物（酶结合物）,酶反应的底物,三个必要试剂,双抗体夹心法 方法：用已知抗体包被，加入待检血清，再加酶标抗体，加底物显色 应用： 二价或二价以上的较大分子抗原测定 乙型肝炎表面抗原、甲胎蛋白、HCG等,竞争法 方法：用已知抗体包被，加入
2、待测血清，再加酶标抗原，酶标抗原与待检物竞争与包被物结合。加底物显色。 应用：用于只有一个抗原决定簇的小分子半抗原（药物、激素等）,间接法 方法 用已知抗原包被，加入待测血清，再加酶标的抗人IgG（抗抗体或二抗）加底物显色。 优点 一种酶标抗抗体检测各种与抗原相应的抗体 应用 常用于HCV抗体、HIV抗体和梅毒螺旋体抗体等的测定,捕获法 应用： 病原体急性感染诊断中的IgM型抗体 甲型肝炎HAV-IgM抗体 乙型肝炎病毒核心HBc-IgM抗体,捕获法,原理： 抗人IgM链抗体包被 捕获待测标本中IgM类抗体 加入特异性抗原和酶标记特异性抗原的抗体 底物显色,Part HAV/HCV抗体检测,丙
3、肝病毒的检测方法, 血清生化学检测 HCV抗体检测 HCV核心抗原检测 HCV RNA 检测,试剂盒组成,包被反应板：固相的抗原或抗体 酶结合物：酶标记的抗原或抗体 显色剂：分A、B二瓶 终止液 对照：阳性对照，阴性对照 浓缩洗涤液 HCV样品稀释液,实验准备,配制洗涤液：用蒸馏水按1：20稀释浓缩洗涤液。,HCV-IgG实验操作,1、稀释：第一、二孔为阴、阳对照孔，其余各孔为样品孔，每孔中加入样品稀释液100ul 2、加样：分别加入阴、阳对照10ul。其余各孔为样品孔，各加入待测标本10ul，轻轻振荡混匀。 3、温育：封板充分混匀后置37C水浴60分钟 4、洗板：弃去反应条孔内液体，用洗涤液
4、注満每孔，放置或振荡1分钟，弃去拍干反复5次（注意：最后一次一定要拍干） 5. 加酶：每孔加入酶标试剂100ul 6、温育：封板充分混匀后置37C水浴30分钟 7、洗板：操作同步骤4 8、显色：每孔先加显色剂A 50ul，再加显色剂B 50ul，混匀后置37C水浴15-30分钟 9、中止显色：每孔加入中止液50ul 10、判断结果：,HAV-IgM实验操作,1、加样：分别加入阴、阳对照50ul。其余各孔为样品孔，各加入待测标本50ul，轻轻振荡混匀。 2、温育：封板充分混匀后置37C水浴20分钟 3、洗板：弃去反应条孔内液体，用洗涤液注満每孔，放置或振荡1分钟，弃去拍干反复5次（注意：最后一次
5、一定要拍干） 4. 加酶：每孔加入酶标试剂100ul 5、温育：封板充分混匀后置37C水浴40分钟 6、洗板：操作同步骤3 7、显色：每孔先加显色剂A 50ul，再加显色剂B 50ul，混匀后置37C水浴15分钟 8、中止显色：每孔加入中止液50ul 9、判断结果：,Part HAV/HCV相关知识,五型：甲、乙、丙、丁、戊型 另外新发现的己、庚型病毒 两类：经消化道传播：甲型、戊型 经血液传播：乙型、丙型、丁型,甲型病毒性肝炎，简称甲肝，是由甲型肝炎病毒(HAV)引起的一种急性传染病。临床上表现为急性起病，有畏寒、发热、食欲减退、恶心、疲乏、肝肿大及肝功能异常。部分病例出现黄疸，无症状感染病
6、 例较常见，一般不转为慢性和病原 携带状态。,甲型肝炎（hepatitis A，HA，简称甲肝）是一种由甲型肝炎病毒（HAV）引起的急性肠道传染病。该病主要经粪-口途径传播，易发生食物型和水型爆发流行, 常呈季节性和周期性流行，主要感染对象为儿童。随着卫生条件的改善和疫苗的应用，甲肝流行特征发生了一些变化，如季节性和周期性逐渐消失，感染年龄后移。,HCV是非甲非乙型肝炎的主要病因 起病隐匿，临床表现轻微，常导致慢性肝炎。 全球约1.7亿人感染过HCV 1%2%的美国人有HCV感染 我国乙型肝炎仍占大多数 HBV重叠HCV感染的临床表现及病理改变更加严重,丙肝传播途径,医源性传播 主要经输血与血液制品传播。在急性输血后非甲非乙型肝炎中，丙肝占20%左右；慢性输血后非甲非乙型肝炎中，丙肝占60%85%。血液透析、器官移植、使用不洁针具静脉注射毒品也是丙肝的重要传播途径。 性接触传播 对妓女、男性同性恋者以及性乱者调查表明，HCV感染率显著高于一般人群；慢性丙肝患者的配偶HCV感染率显著高于一般人群。对日常生活接触报道结果不一，已在丙肝病人和病毒携带者的唾液、尿液、汗液、泪液等多种液体中检测出HCV RNA。 母婴传播 已证实HCV存在母婴传播，但传播率较低。,
