第七章、酶的抑制作用及抑制动力学第七章、酶的抑制作用及抑制动力学 失活作用: 通过变性作用引起酶活力下降或丧失抑制作用: 改变必需基团性质,引起酶活力下降,丧失第一节抑制作用的类型:一、分类:(一)不可逆抑制作用:抑制剂以很牢固的共价键与酶结合，不能用物理方法除去，抑制后酶活力不能恢复 专一性的不可逆抑制剂: 非专一性的不可逆抑制剂:(二)可逆抑制作用:抑制剂以非共价键与酶结合阻遏酶的活性，可以用物理方法除去抑制剂后，酶活力能恢复 二、区别方法二、区别方法(一一)物理方法物理方法:(二二)动力学方法动力学方法: 1.酶预先用抑制剂处理后酶预先用抑制剂处理后测定酶活力变化情况测定酶活力变化情况: 2.在测活系统中加入抑制剂在测活系统中加入抑制剂,然后加入不同酶量然后加入不同酶量, 测定酶测定酶活力变化情况活力变化情况: 第二节不可逆抑制作用第二节不可逆抑制作用一一. 非专一性的不可逆抑制作用非专一性的不可逆抑制作用:1.概念概念:2. 非专一性的不可逆抑制剂非专一性的不可逆抑制剂 酰化试剂酰化试剂:(酸酐酸酐,乙酰咪唑乙酰咪唑,硫代三氟乙酸乙酯硫代三氟乙酸乙酯,O-甲甲基异脲基异脲) --NH2 －－NH－－CO-RR-CO-X + E- --OH E- －－O －－CO-R + HX --C6H5-OH －－C6H5-O－－CO-R --SH －－S－－CO-R 烷化试剂:(2.4-二硝基苯氟,碘代乙酸,碘代乙酰胺等) -NH3 -NH-R -SH -S-R R-X + E -COOH E－-COOR + HX - S-CH3 -S (CH3)-R 咪唑基NH -咪唑基N-R 含有活泼双键试剂:(N-乙基顺丁烯二酸抱亚胺(NEMI)、丙烯腈等亲电试剂:(四硝基甲烷(TNM)氧化剂: H2O2, NBS等 作用-SH、Trp、吲哚基等还原剂: ME, DTT等, 作用-S-S-、 二、专一性不可逆抑制剂:（一〕Ks型不可逆抑制剂:1.概念2.抑制机理E + I EI EIn判断Ks型抑制剂作用是否发生在活性部位方法:化学定量法.底物、竞争性抑制剂保护方法酶先可逆失活,再研究KS型抑制情况亲和标记法图解E ＋ IEIEin （二〕Kcat型不可逆抑制动力学概念:自杀性底物例如中E.coli中-羟基葵酰硫酯脱水酶CH3-(CH2)6-CH2-CH(OH)-CO-S-R R = -CH2-CH2-NH-CO-CH3 CH3-(CH2)6-CH=CH-CO-S-R (-反式双键) CH3(CH2)5-CH=CH-CH2-CO-S-R (,顺式双键) Kcat型抑制剂: 3.4-葵炔酰-N-乙酰半胱胺CH3-(CH2)5-CC-CH2-CO-S-R ECH3-(CH2)5 HC=C=CH-CO-SR CH3(CH2)5HC=C-CH2 -CO-SR 不可逆共价结合 第三节 可逆抑制作用的动力学:可逆抑制作用: Reversible Inhibition1.概念2.类型: 竞争性抑制: Comp. C Competitive inhibition 非竞争性抑制 NonC. NC Non-Competitive 反竞争性抑制 UnC. UC Un-Competitive 混合型抑制 MT Mixed Type inhibition 一、竞争性抑制作用动力学模型图: 动力学模型:动力学方程：式中Vm=k2[E]o 不变 Km 为米氏常数 Kmapp 表观米氏常数，增大 KI 为抑制常数 双倒数作图法：抑制常数：KI的求法：以Kmapp 对[I]作图，横轴截距为 - KI 抑制率i % = (1 - vi / vo) 100% i %与[S]有关, [S] i% 二、非竞争性抑制作用动力学二、非竞争性抑制作用动力学:动力学模型动力学模型:动力学方程：动力学方程：Vm=k2[E]o Vmapp为表观最大速度，减小为表观最大速度，减小 Km 为米氏常数为米氏常数 ，， 不变。
不变 KI 为抑制常数为抑制常数 双倒数作图法：抑制常数：KI的求法：以1/Vmapp 对[I]作图，横轴截距为 - KI抑制率: i %与[S]无关, 三、反竞争性抑制作用动力学三、反竞争性抑制作用动力学:动力学模型动力学模型:动力学方程：动力学方程： Vmapp为表观最大速度，减小为表观最大速度，减小 Kmapp 为表观米氏常数为表观米氏常数 ，减小，减小 KI 为抑制常数为抑制常数 双倒数作图法：抑制常数：KI的求法：以1/Vmapp 对[I]作图，横轴截距为 - KI抑制率: i %与[S]有关, [S] i% 二、混合型抑制作用动力学二、混合型抑制作用动力学:动力学模型动力学模型:动力学方程：动力学方程：Vmapp为表观最大速度，减小为表观最大速度，减小 Kmapp 为表观米氏常数为表观米氏常数 ，， 当当KI< KIS Km增大增大,KI> KIS Km减小减小 双倒数作图法：抑制常数：KI、KIS的求法：以斜率对[I]作图，横轴截距为-KI以1/Vmapp 对[I]作图，横轴截距为 - KIS 。