实验四实验四人类人类ABOABO血型检测及血型检测及 人血涂片的制备和观察人血涂片的制备和观察实验目的实验目的1. 了解人类血型的遗传特性及其遗传方式；掌握人体血型（ABO型）的检验方法同时了解自己的血型 2. 观察红细胞凝集现象，掌握ABO血型鉴定的原理•掌握血涂片的制备方法；认识红细胞及各种白细胞的典型形态；实验原理实验原理血型是指红细胞的血型，是根据红细胞膜外 表面存在的特异性抗原（镶嵌于红细胞膜上的糖 蛋白和糖脂）来确定的，这种抗原或凝集原是由 遗传决定的抗体或凝集素存在于血清中，它与 红细胞的不同抗原起反应，产生凝集，最后溶解 ，由于这种现象，临床上在输血前必须注意鉴定 血型，以确保安全输血通常输血反应中大多数 注意ABO血型系统最早的输血试验是英国人罗维尔在1665年进行的他把一条失 血过多濒于死亡的狗的静脉与另一条健康狗的静脉用鹅毛管连接起 来失血的狗逐渐从濒死状态恢复过来1667年，法国国王的御医丹尼斯首先进行了动物血液输人人体 的试验他将400毫升羊血注入一个失血多病的青年人的静脉，这 个青年人竟奇迹般地活了下来此后他又进行了多次输血试验，也 安然无恙但他在1668年的一次试验中，却以失败而告终。
他给一 名患者输动物血，第一次输血后病人病情有所好转；第二次输血后 ，病人出现发热、腹痛、大汗、血尿等症状，第三次输血后病人死 亡死者妻子告丹尼斯犯有杀人罪，为此，法国议会特别制定法律 ：不许再进行输血1825年，英国的布伦德尔医生从一个人直接输血给另一个人首 次成功，但是这一成功具有很大的偶然性据医书记载：19世纪末 叶有346人接受过输血治疗，另有129人被试图输人动物的血液当 时人们还没有认识到血型的不同，因输血发生的事故时有发生，因 此，输血是要冒极大风险的兰德斯坦纳兰德斯坦纳（（K.Landsteiner)K.Landsteiner)1868年生于奥地利首 都维也纳维也纳大学 医学院毕业后，继续留 校，学习化学1900年 发现A、B、O3种血型 1919年在荷兰巴库的一 所医院工作1922年赴 美，受聘于洛克菲勒研 究所1930年获诺贝尔 生理学医学奖1943年 逝世兰德斯坦纳的贡献兰德斯坦纳的贡献卡尔·兰德斯坦纳是奥地利著名医学家，他因发现了Ａ、Ｂ、Ｏ血型而于１９３０年获得诺贝尔医学及生理学奖１９００年，兰德斯坦纳在维也纳病理研究所工作时，发现一个人的血清有时会与另一个人的红细胞发生凝集。
随后，兰德斯坦纳进一步发现人的血液按红细胞与血清中的不同抗原和抗体，可分为不同类型，他以Ａ、Ｂ、Ｏ三个字母来代表他发现的三种不同类型的血液不同血型的血液混合在一起，就会发生凝血、溶血现象１９０２年，兰德斯坦纳的两名学生把实验范围扩大到１５５人，又发现了较为稀少的ＡＢ型血１９２７年，国际上正式采纳了兰德斯坦纳原定的字母命名，确定血型有Ａ、Ｂ、Ｏ、ＡＢ四种类型至此，现代血型系统正式确立兰德斯坦纳在认识人类血型方面的杰出研究成果，不仅为安全输血和治疗新生儿溶血症提供了科学的理论基础，而且对免疫学、遗传学、法医学的发展都带来了深远影响 红细胞血型 血型（blood group）：人类血液由遗传控 制的个体性状之一，是血液的遗传标记 (genetic marker) 红细胞血型：指红细胞表面抗原由遗传所 决定的个体差异 广义的血型概念：指包括血液、体液、分 泌液、排泄物及组织细胞上，由遗传所控 制的个体性状 红细胞上不含有Ａ、Ｂ抗原， 而血清中含有抗Ａ和 抗Ｂ抗体称为Ｏ型红细胞上含有Ａ抗原， 而血清中含有抗Ｂ抗体的称为Ａ型红细胞上含有Ｂ抗原，而血清中 含有抗Ａ抗体的称为Ｂ型红细胞上含有Ａ和Ｂ抗原， 而血清中无抗Ａ、抗Ｂ抗体 的称为ＡＢ型父母的血型与子女的血型关系父母的血型与子女的血型关系父母血型子女可能有的血型子女不可能有的血型 O+OOA、B、AB A+OA、OB、AB A+AA、OB、AB B+OB、OA、AB B+BB、OA、AB A+BA、B、AB、O--- AB+OA、BO、AB AB+BA、B、ABO AB+AA、B、ABO AB+ABA、B、ABO• 人类血型有数十亿种之多。
人类除同卵双生子女外，再也找不到两个血型完全相同的人 Rh是恒河猴（Rhesus Macacus）外文名称的头两个 字母兰德斯坦纳等科学家在1940年做动物实验时，发 现恒河猴和多数人体内的红细胞上存在Rh血型的抗原物 质，故而命名的凡是人体血液红细胞上有Rh抗原（又 称D抗原）的，称为Rh阴性这样就使已发现的红细胞A 、B、O及AB四种主要血型的人，又都分别一分为二地被 划分为Rh阳性和阴性两种随着对Rh血型的不断研究，认为Rh血型系统可能是 红细胞血型中最为复杂的一个血型系Rh血型的发现， 对更加科学地指导输血工作和进一步提高新生儿溶血病 的实验诊断和维护母婴健康，都有非常重要的作用根 据有关资料介绍，Rh阳性血型在我国汉族及大多数民族人中约 占99.7%，个别少数民族约为90%在国外的一些民族中，Rh阳性 血型的人约为85%，其中在欧美白种人钟，Rh阴性血型人约占15% 实验材料及试剂实验材料及试剂• 显微镜、载玻片、刺血针、消毒牙签、A 型和B型标准血清、生理盐水、酒精棉球 • 受检者血液 • 75%乙醇、瑞氏染液、磷酸盐缓冲液1．取一块清洁玻片，用蜡笔划上记号，左上角写A 字，右上角写B字。
2．用小滴管吸A型标准血清（抗B）一滴加入左侧 ，用另一小滴管吸B型标准血清（抗A）一滴加入右 侧 3．穿刺手指取血，玻片的每侧各放入一小滴血， 用牙签搅拌，使每侧抗血清和血液混和每边用一 支牙签，切勿混用方法与步骤方法与步骤】】组长领取实验用品： 1. 每两组一盒血型检测试剂 2. 每两人一只采血笔 3. 每人三片载玻片、一个采血针①①②②抗抗AA抗抗BB采血前用采血前用7575％酒精棉球消％酒精棉球消 毒受试者的无名指指腹毒受试者的无名指指腹采血采血第一、第二滴血滴加于第一、第二滴血滴加于ABOABO血型检测试血型检测试 剂液滴中，用牙签将血液和试剂混合剂液滴中，用牙签将血液和试剂混合第三滴血滴加于一干净的载玻片一端第三滴血滴加于一干净的载玻片一端抗抗AA抗抗BB• 血液与试剂混合后，静置5~15分钟后观察结果推片推片：挤出第三滴血置于载玻片的右侧：挤出第三滴血置于载玻片的右侧再取另一张边缘光滑的载玻片，斜置于血滴的前缘再取另一张边缘光滑的载玻片，斜置于血滴的前缘 ，先向后稍移动轻轻触及血滴，使血液沿玻片端展，先向后稍移动轻轻触及血滴，使血液沿玻片端展 开成线状开成线状30~45°两玻片的角度以两玻片的角度以30~45°30~45°为宜，轻轻将推片向前为宜，轻轻将推片向前 快速而均匀地推进，形成头尾明显的舌形血膜。
静快速而均匀地推进，形成头尾明显的舌形血膜静 置使其干燥置使其干燥染色染色• 待涂片在空气中完全干燥 后，滴加3~4滴瑞氏染液 盖满血膜为止，染色30秒 然后滴加等量磷酸盐缓 冲液，使其与染液均匀混 合• 静置10～15 min• 用蒸馏水冲去染液，吸水 纸吸干，室温下干燥后显 微镜观察 观察有无凝集，并按下表判定结果观察有无凝集，并按下表判定结果 血型抗A试剂抗B试剂A B O AB+ - - +- + - +呈现均匀的淡红色时，表明不凝集，用“一”号表示 在试剂里凝结成絮团状，形成鲜明的对比，表明凝集，用 “十”号表示血涂片镜检结果血涂片镜检结果- -红细胞红细胞中性粒细胞中性粒细胞细胞核形态多样，呈腊肠、分叶、杆状等 胞质呈粉红色，含淡紫色或淡红色颗粒淋巴细胞淋巴细胞小、中、大淋巴细胞 细胞核圆形，着色深，占细胞大部分 胞质少，嗜碱性，被染成蔚蓝色，含少量嗜天青颗粒单核细胞单核细胞白细胞中体积最大的细胞 细胞呈圆形或椭圆形 细胞核形态多样，呈卵圆形、肾形、马蹄形或不规则形，核常偏位 胞质较多，弱嗜碱性，含有细小嗜天青颗粒嗜酸性粒细胞嗜酸性粒细胞细胞核常为两叶 胞质内充满粗大、均匀、略带折光性的嗜酸性颗粒（橘红色）嗜碱性粒细胞嗜碱性粒细胞细胞核分叶或呈S形、不规则形，着色较浅 胞质含有染成蓝紫色的嗜碱性颗粒，大小不等，分布不均。
实验要求实验要求• 记录结果– 血型检测结果– 描述用你制备的血涂片在显微镜下观察到的各种血细胞• 。