动物血液常规检验一、目的要求1．掌握血液的采集、抗凝和处理2．掌握红细胞沉降速度、血红蛋白、红细胞压积容量、红细胞计数及白细胞计数的操作方法二、实验内容〔一〕血液样品的采集供检验用的血液样品，一般采集静脉血，大动物可采集多量的血液，而小动物和实验动物的采血量少，只能根据检验的目的、动物种类和病情酌定采血量一般根据检测工程的方法和对标本的要求不同，临床检验采用的血液标本分为全血、血清和血浆全血主要用于血细胞成分的检查，血清和血浆那么用于大局部临床化学检查和免疫学检查各种动物的采血部位见表7-1表7-1 各种动物的采血部位采血部位畜种采血部位畜种颈静脉马、牛、羊耳静脉猪、羊、犬、猫、实验动物前腔静脉猪翅内静脉家禽隐静脉犬、猫、羊脚掌鸭、鹅前臂头静脉犬、猫、猪冠或肉髯鸡心脏兔、家禽、豚鼠断尾猪、实验动物〔二〕血液的抗凝采集全血或血浆样品时，在采血前应在采血管中参加抗凝剂，制备抗凝管如用注射器采血，应在采血前先用抗凝剂湿润注射器常用的抗凝剂有：1．草酸盐 与血液中钙离子结合形成不溶性草酸钙而起抗凝作用1ml血液用2mg草酸盐即可抗凝常用的草酸盐为草酸钾、草酸钠等，配成10%溶液，根据抗凝血量参加试管或玻瓶中，置45-55℃〔不超过80℃〕烘箱内烤干备用。
此抗凝剂不适宜钾、钠和钙含量的测定，并且能使红细胞缩小6%，故也不适宜红细胞压积容量的测定临床上一般用草酸盐合剂，配方为草酸钾0.8g、草酸铵1.2g，加蒸馏水100ml溶解，取此液0.5ml参加试管或玻瓶中，可抗凝5ml血液此抗凝剂能保持红细胞的体积不变〔草酸铵使红细胞膨胀，草酸钾使红细胞皱缩〕，适用于血液细胞学检查，但不适用于非蛋白氮、血氨等含氮物质和钾、钙的测定2．枸橼酸钠：与血液中钙离子形成非离子化的可溶性钙化合物而起抗凝作用，溶解度和抗凝度较弱，5mg可抗凝1ml血液使用时配成3.8%溶液，0.5ml可抗凝5ml全血主要用于红细胞沉降速率的测定和输血，一般不作为生化检验的抗凝剂3．乙二胺四乙酸二钠〔EDTA-Na2〕：与钙离子形成EDTA-Ca螯合物而起抗凝作用，1ml血液需1-2mg，常配成10%溶液，取此液2滴参加试管或玻瓶中，置50-60℃枯燥箱中烘干备用，可抗凝5ml血液该抗凝剂对血细胞形态影响很小，常用于血液学检验4．肝素：主要是抑制凝血酶原转化为凝血酶，使纤维蛋白原不能转化为纤维蛋白或20IU〔1mg相当于126IU〕可抗凝1ml血液，常配成1%溶液，参加试管或玻瓶后在37℃左右烘干备用，适用于大多数实验诊断的检查。
缺点是白细胞的染色性较差〔三〕血样的处理如别离血清，应将全血采集在试管中〔不加抗凝剂〕，在室温下或25-37℃温水中斜置，血清析出后即可别离血浆应在抗凝血采集后离心别离血液采集后应尽快送检和检测不能立即送检的血样，血片应固定，抗凝血、血浆和血清应冷藏送检血样应编号，并防止剧烈振摇血液学检查工程与血样保存的期限见表7-2表7-2 血液学检查工程与采血后可保存的时间检查工程保存时间〔h〕检查工程保存时间〔h〕白细胞计数2—3血红蛋白含量48红细胞计数24红细胞压积容量24血小板计数1红细胞沉降速率2—3网织红细胞计数2—3白细胞分类计数1—2〔四〕细胞沉降速度的测定红细胞沉降率〔erythrocyte sedimentation rate, ESR，简称血沉率〕是指在室温下观察抗凝血中红细胞在一定时间内在血浆中的沉降速率测定血沉率的方法很多，兽医临床上常用魏氏〔Westergren〕法1．原理 红细胞沉降速度〔erythrocyte sedimentation rate ,ESR〕与红细胞串钱状的形成、红细胞数目的多少、血浆蛋白的组成以及测定时室温的变化、血沉管倾斜的程度等因素有关器材与试剂〔1〕魏氏血沉器、采血针头等〔2〕抗凝剂：3.8％枸橼酸钠液3．操作方法魏〔Westergren〕氏法 魏氏血沉管长30cm，内径为2.5mm，管壁有200个刻度，每个刻度之间距离为1.0mm，附有特制的血沉架〔图7-1〕。
测定方法如下：图7-1 魏氏血沉管〔1〕取3.8％枸橼酸钠液0.4ml置于小试管中〔2〕自颈静脉采血，沿管壁参加上述试管，轻轻混合〔3〕用血沉管吸取抗凝血至刻度0外，用棉花擦去管外血液，直立于血沉架上〔4〕经15、30、45、60 min，分别记录红细胞沉降的刻度数，用分数形式表示〔分母代表时间，分子代表沉降mm数〕4．考前须知〔1〕血沉管必须垂直静立〔牛、羊的血液，血沉速度很慢，可倾斜60°，以加速沉降注意，其正常值也相应增加〕；血液柱面上不应有气泡；抗凝剂的量要接规定参加，少了会产生血凝块，多了会使血液中的盐分过多，血沉变慢〔2〕报告结果时要注明测定方法5．参考值 动物因品种不同，血沉率有较大差异，一般马属动物血沉率最快，其次是水牛，而黄牛、乳牛、双峰驼、绵羊、山羊、猪及鸡的血沉率较慢为加速沉降率和便于观察，可将血沉管架倾斜60°放置健康动物的血沉率参考值见表7-3表7-3 健康动物的血沉率参考值动物测定数血沉值〔mm〕资料来源15min30min45min60min马29.770.795.3115.6解放军农牧大学驴31327596.7110.7甘肃农业大学水牛659.830.86591.6扬州大学乳牛550.30.70.751.2甘肃农业大学双峰驼630.450.91.6宁夏农学院绵羊11300.20.40.7新疆农业大学山羊33500.51.64.2西北农林科技大学猪310.61.31.943.36云南农业大学鸡310.190.290.550.81云南农业大学6．临床意义 〔1〕血沉率加快：常见于各种贫血性疾病、炎症性疾病及组织损伤或坏死〔如结核病、风湿热、全身性感染等〕。
随着疾病的好转，血沉率逐渐变慢并恢复正常 〔2〕血沉率减慢：常见于机体严重的脱水，如胃扩张、肠阻塞、急性胃肠炎、瓣胃阻塞、发热性疾病、酸中毒等〔五〕血红蛋白的测定——沙利氏比色法血红蛋白〔hemoglobin，Hb〕是红细胞的主要内含物，它是血红素和珠蛋白肽链联接而成的一种结合蛋白，属色素蛋白每个正常红细胞内所含的血红蛋白约占红细胞重量的32%～36%，或红细胞干重的96%血红蛋白测定是指测定并计算出每升血液中血红蛋白的克数1．原理 血液与盐酸作用后，释放出血红蛋白,并被酸化后变为褐色的盐酸高铁血红蛋白，与标准柱相比，求出每百毫升血液中血红蛋白的克数或百分数 2器材与试剂图7-4 沙利氏血红蛋白计〔1〕沙利氏血红蛋白计一套在测定管上有两种刻度，一侧表示血红蛋白在每百毫升血液内的克数，另一侧表示百分数国产的血红蛋白计是以每百毫升血液含14.5g血红蛋白做为100％而设制〔2〕0.1N盐酸或1％盐酸一小瓶3．方法〔1〕向沙利氏比色管内参加N/10盐酸5滴〔2〕用沙利氏吸血管吸血至20μl刻度处，擦去管外沾附的血液〔3〕徐徐吹入沙利氏比色管内，不要产生气泡，再反复吸、吹数次，以洗出沙利氏吸血管中的血液。
轻轻振动比色管，使血液与盐酸充分混合〔4〕静置10min，待血液变成褐色后，缓缓滴加蒸馏水，每加1滴，用细玻璃棒搅动一次，直到颜色与标准色柱完全相同为止液柱凹面所指的刻度数，即为每百毫升血液中血红蛋白的克数，用g％表示〔图7-4〕4．考前须知〔1〕吸取抗凝血时，应先将血样振荡混合后再吸取，吸血量要准确，吸血管中的血不应混有气泡，管外沾附的血液要擦去〔2〕血液加盐酸后，要求放置的时间不应少于10min,否那么会使测定结果偏低5．正常值 各种家畜血红蛋白的正常值在9～12g％6．临床意义 〔1〕血红蛋白增多：主要是见于脱水，血红蛋白相对增加也见于真性红细胞增多症，是一种原因不明的骨髓增生性疾病，目前认为是多能干细胞受累所致其特点是红细胞持续性显著增多，全身总血量也增加，见于马、牛、犬和猫〔2〕血红蛋白量减少：主要见于各种贫血〔六〕红细胞压积容量测定红细胞压积〔packed cell volume ，PCV〕又称红细胞比容〔hematocrit，Hct〕，是指红细胞在血液中所占容积的比值，测定时将抗凝血在一定的条件下离心沉淀，即可测得每升血液中血细胞所占容积的比值1．原理 在100刻度玻璃管中，充入抗凝血至刻度，经一定时间离心后，红细胞下沉并紧压于玻璃管中，读取红细胞柱所占的百分比，即为红细胞压积容量〔PCV又称压容、比容〕。
2．器材〔1〕温〔Wintrobe〕氏管：管长11cm，内径约2.5mm，管壁有100个刻度一侧自上而下标有0～10，供测定血沉用，另一侧标有10～0，供测定比容用如无这种特制的管子，可用有100刻度的小玻璃管代替〔2〕长针头及胶皮乳头：选用长12～15cm的针头，将针尖磨平，针柄部接以胶皮乳头也可用细长毛细吸管代替〔3〕水平电动离心机：转速能达4000rpm者3．方法〔1〕用长针头吸满抗凝血，插入温氏管底部，轻捏胶皮乳头，自下而上挤入血液至刻度10处图7-5 温氏管及长针头〔2〕置离心机中，以3000rpm的速度离心30～45 min〔马的血液离心30 min,牛、羊的血液离心45 min〕,取出观察，记录红细胞层高度，再离心45 min，如与第一次离心的高度一致，此时红细胞柱层所占的刻度数，即为PCV数值用％表示〔图7-5〕4．考前须知〔1〕温氏管及充液用具必须枯燥，以免溶血〔2〕心时，离心机的转速必须达3000rpm以上，并遵守所规定的时间〔3〕用一般离心机离心后，红细胞层呈斜面，读取时应取斜面1/2处所对应的刻度数血浆与红细胞层之间的灰白层由白细胞与血小板组成，不应计算在内。
5．临床意义〔1〕红细胞压积增高：见于各种原因所引起的血液浓缩，使红细胞相对性增多，如急性胃肠炎、肠便秘、肠变位、瓣胃阻塞、渗出性胸膜炎和腹膜炎，以及某些传染病和发热性疾病由于红细胞压积增高的数值与脱水程度成正比，因此在临床上可根据这一指标的变化而推断机体的脱水情况，并计算补液的数量及判断补液量的实际效果也见于各种原因所致的红细胞绝对性增多，如真性红细胞增多症、肺动脉狭窄、高铁血红蛋白血症等〔2〕红细胞压积降低：见于各种贫血，但降低的程度并不一定与红细胞数一致，因为贫血有小细胞性贫血、大细胞性贫血及正细胞性贫血之分〔七〕红细胞计数红细胞计数〔red blood cell count，RBC〕是指计算每升血液内所含红细胞的数目红细胞计数的方法有显微镜计数法、血沉管计数法、光电比色法、血细胞电子计数器计数法等目前在兽医临床上使用最广泛的是显微镜计数法〔计数板法〕1．原理 血液经稀释后，充入血细胞计数板，用显微镜观察，计数一定容积内的红细胞数并换算成每μl内的数目2．器材〔1〕改进式血细胞计数板：临床上最常用的是改进纽巴〔Neubauer〕氏计数板，它是由一块特制的玻璃板构成，玻璃板中间有横沟将其。