饲料公司乙二胺四乙酸二钠（EDTA）络合滴定法1 原理将试样中有机物破坏，钙变成溶于水的离子，用三乙醇胺、乙二胺、盐酸羟胺和淀粉溶液消除干扰离子的影响， 在碱性溶液中以钙黄绿素为指示剂，用乙二胺四乙酸二钠 标准溶液络合滴定钙，可快速测定钙的含量2 试剂和溶液2.1 盐酸羟胺，分析纯；2.2 三乙醇胺，1+1；2.3 乙二胺，1+1；2.4 盐酸水溶液：1+3；2.5 硝酸溶液：1+1；2.6高氯酸，70%〜72%；2.7氢氧化钾溶液（200 g/L）：称取20 g氢氧化钾溶于100 mL水中；2.8淀粉溶液（10 g/L）：称取1 g可溶性淀粉入200 mL烧杯中，加 5 mL 水润湿，加 95 mL 沸水搅拌，煮沸，冷却备用现用现配）；2.9 钙黄绿素—甲基百里香草酚蓝指示剂：0.10 g 钙黄绿素、0.10 g甲基麝香草酚蓝、0.03 g百里香酚酞与5 g氯化钾研细 混匀，贮存于磨口瓶中备用；2.10 钙标准溶液（0.001 g/mL）：称取 2.4974 g 于 105 °C 〜110°C干燥为3 h的基准物碳酸钙，溶于40 mL盐酸（2.4） 中，加热赶除二氧化碳，冷却，用水移至1000 mL容量瓶中, 稀释至刻度；2.11乙二胺四乙酸二钠（EDTA ）标准滴定溶液。
3 仪器和设备3.1 实验室用样品粉碎机或研钵；3.2 分样筛：孔径 0.42 mm（40 目）；3.3 分析天平：感量 0.0001g；3.4 高温炉：电加热，可控温度在（ 550±20）C；3.5 坩埚：瓷质；3.6 容量瓶： 100 mL；3.7滴定管：酸式，25 mL或50 mL；3.8 玻璃漏斗：6 cm 直径；3.9定量滤纸：中速，7 cm~9 cm；3.10 移液管： 10， 20 mL；3.11烧杯： 200 mL；3.12 凯氏烧瓶： 250 mL 或 500 mL；4 测定步骤4.1 试样分解4.1.1 干法（推荐法）称取试样2~5 g （精确至0.0002 g）于坩埚中，在电炉上 小心炭化，再放入高温炉于550°C下灼烧3 h（或测定粗灰分 后连续进行），在坩埚中加入盐酸溶液10 mL和浓硝酸3 滴, 小心煮沸，将此溶液转入 100ml 容量瓶，冷却至室温，用蒸 馏水稀释至刻度，摇匀，为试样分解液4. 1 . 2湿法（用于无机物或液体饲料）称取试样2~5 g于凯氏烧瓶中，精确至0.0002 g,加入 硝酸（2.5） 10 mL，加热煮沸，至二氧化氮黄烟逸尽，冷却 后加入70%〜72%高氯酸10 mL，小心煮沸至溶液无色，不 得蒸干，冷却后加蒸馏水50 mL，且煮沸驱逐二氧化氮，冷却后转入容量瓶，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，为试样分解 液。
4.2 测定准确移取试样分解液5 mL~20 mL （蛋鸡饲料10mL，肉 禽饲料20mL）加水50ml，加淀粉溶液10ml、三乙醇胺2ml、 乙二胺1ml、氢氧化钾溶液15ml，加0.1g盐酸羟胺（每加 一种试剂都须摇匀），加钙黄绿素少许，在黑色背景下立即 用 EDTA 标准溶液滴定至绿色荧光消失呈现紫红色为滴定终 点同时做空白实验5 测定结果的表示与计算测定结果按下式计算：X （%） = T 也二 t）x 100 = T 仪一丛 Ax 100m x $ m x Vi0式中：X 以质量分数表示的钙含量，%；T——EDTA 标准滴定溶液对钙的滴定度， g/mL；V0 试样分解液的总体积，mL ；V] 分取试样分解液的体积，mL；V2——分取试样分解液消耗EDTA标准滴定溶 液的体积， ml；V3——空白消耗EDTA标准滴定溶液的体积，ml；m 试样的质量，go6 允许差含钙量在10%以上，允许相对偏差2%；含钙量在5%〜 10%时，允许相对偏差3%；含钙量1%〜5%时，允许相对偏 差 5%；含钙量 1%以下，允许相对偏差 10%o7 注意事项7.1 三乙醇胺、乙二胺、氢氧化钾能腐蚀皮肤刺激眼睛，使 用的时候要避免接触皮肤，如果接触皮肤则应该先用湿抹布 擦干净，然后在用大量的水冲洗接触处。
7.2 消化时不论是用干法消化还是湿法消化，必须要在通风橱处进行采用湿法消化时要带上防毒面具8 结果准确度的保证和评价8.1 结果准确度的保证8.1.1 掩蔽剂（如乙二胺、三乙醇胺等）是在一定条件下才能 起到它的掩蔽作用，要按固定的操作流程顺序进行操作，三 乙醇胺掩蔽Fe3+ ；乙二胺掩蔽Cu2+、Mn3+、Zn2+8.1.2 配制备用的淀粉溶液不可超过一周，室温高时淀粉溶液 呈混浊或有异味时不可使用，需重新配制可以在配置时每 升淀粉溶液加 3g 硼酸8.1.3定期配置一次钙标液对EDTA标定8.1.4 钙黄绿素指示剂加入要适量8.1.5 本实验所有仪器都不能用清洗粉洗刷8.2 结果准确度的评价8.2.1 加标回收8.2.1.1称取2.4974g已经105 °C烘至恒重的基准级碳酸钙， 溶于40mLHCl（1+1）加热赶除二氧化碳，冷却，用水定容 至 1000mL 容量瓶，此溶液为 0.001g/mL 的钙标准溶液，此 溶液可以作为标定EDTA的标准溶液也可以作为加标回收的 标液使用8.2.1.2 移取待测的试样分解液相同体积于两个锥形瓶中(移 取体积参考 4.2 测定中的步骤)其中一个锥形瓶中加入此节821.1中配置的钙标准溶液5.00mL。
按照测定钙过程中的步 骤，分别用 EDTA 标准溶液进行滴定8.2.1.3 回收率计算Ca(%)= —T乂°2 _" x 100%5mL x 0.001g / mL式中:T——EDTA标液对钙的滴定度，g/mLV2——加入标液后消耗EDTA标液的体积，mLV]——未加标液的试样分解液消耗的EDTA的体积,mL测定的钙回收率应该在95%〜105%之间为优秀8.2.2 参加实验室之间的比对把有疑问的样品寄往中心化验室。