ft & £1奋文朋朮实创新Longdong University2011届本科生毕业论文题 目芦丁的提取分离及鉴定作者单位陇东学院化学化工•学院指导老师胡浩斌作者姓名张娜娜专业班级2007级化学本科(2)班提交时间二O——年四月2011届本科生毕业论文芦丁的提取分离及鉴定张娜娜，胡浩斌(陇东学院 化学化工学院，甘肃 庆阳745000 )摘要：目的以芦丁为例学习黄酮类化合物的提取方法，掌握黄酮类成分的主要性质及 黄酮貳，貳元和糖的部分鉴定方法方法采用水提法、碱水(石灰水)提取法、有机溶剂(乙 醇)回流法对芦丁进行提取分离，并对其进行定性分析及色谱鉴定结果水提法、碱水(石灰 水)提取法、有机溶剂(乙醇)回流法，三种方法均可制的芦丁，且质量合格结论从提高芦 丁产率和纯度的角度出发，乙醇回流是较理想的提取方法制得芦丁产率高，且测定方法简单、 迅速、灵敏度高关键词：槐花米；芦丁；槲皮素；提取；分离；鉴定Extraction, Seperation and Identification of RutinZhang Nana, Hu Haobin(College of Chemistry and Chemical Engineering, Longdong University, Qingyang 745000, Gansu)Abstraction: Objection Rutin as an example to learn the extraction of flavonoids square. Grasp the main properties and flavonoids ingredients flavonoids glucoside. Method With the water extraction method, buck (limewater) extraction,organic solvent (alcohol) extraction to extraction and separation of rutin and chromatographic identification. Result With water formulation,Buck (limewater) extraction,organic solvent (alcohol) method of extraction rutin backflow separation,three methods are made rutin and obtaining rutin quality qualified. Conclusion From improve yield and purity of rutin angle, ethanol refluxing was ideal extraction method. Preparation of rutin of high yield,high sensitivity. determination method is simple to rutin rapid.Key word: Sophora japonica; rutin; quercetin; extraction; separation; identification引言随着人们生活水平及质量的不断提高，心脑血管病的发病率也呈上升趋势，而且死亡率居 各种疾病之首，因此，对治疗和预防心脑血管病的药品与保健品的开发研究就显得尤为重要,黄酮类化合物在心脑血管病的治疗上起到举足轻重的作用。
目前研究最为广泛的是以槐米为主 要原料提取黄酮类化合物槐米，豆科植物槐（Sophora japonica L.）的未开放花蕾中医临床上作为止血药，常用 来治疗痔疮、子宫出血、吐血、鼻出血等，并有清肝泻火、治疗肝热目赤、头痛眩晕的功效 药理研究表明，它能保持毛细血管正常的抵抗力，降低血管通透性，可使因脆性增加而出血的 毛细血管恢复正常的弹性，还有抗炎，解痉等作用槐米的主要成分中芦丁含量高达12〜16%, 其次含有槲皮素、三萜皂苷、槐花米甲素、槐花米乙素、槐花米丙素等近年来有文章报道槐 米具有治疗糖尿病的功效芦丁的药用价值开发利用较早，但芦丁与其苷元槲皮素均难溶于水， 为了改善其在水中的溶解性状，增强其药理活性，科研人员对其进行了长期而又有效的研究， 主要包括化学结构的改造，衍生物、复合物的制备，无机酸酯盐以及B-环糊精包合物和共沉 淀物的研制等为了提高芦丁的提取效率，避免资源浪费，摸索一种芦丁的提取方法也显得尤 为重要，目前可采用的提取方法有（热）碱提取法、热水提冷析出法、热水提大孔吸附树脂纯 化法、超声辐射法、热水提、醇除杂、酸沉淀法、冷碱渗漉提取-酸沉淀、连续回流提取、乙 醇浸提法、超临界二氧化碳提取法、杀酶碱提、连续萃取法从槐米中提取芦丁和微波法等。
其 中最常用，工艺较成熟的是石灰水法芦丁，又名芸香貳、维生、紫槲成貳，广泛存在于植物界，如芸香、苦养麦、槐树蕾、楸 树叶、蒲公英、番茄茎、赤豆等均含有丰富的芦丁，尤以槐花米（Sophora japoina L.的花蕾） 和养麦叶中含量最高芦丁能凉血止血，清肝泻火，具有抗炎作用还具有抑制醛糖还原酶的 作用，用于预防脑溢血，高血压，视网膜出血，急性出血肾炎，治疗慢性气管炎，对糖尿病型 白内障也有较好的治疗，而且芦丁对紫外线具有较强的吸收作用，在化妆品中添加10%的芦 丁，紫外线的吸收率可达98%以上⑼本实验主要以槐花米为原料提取芦丁，并以芦丁为例学习黄酮类化合物的性质及部分鉴定 方法1实验部分1.1实验原理芦丁（Rutin）： C27H30O16・3H2O,浅黄色针状结晶，mp 174〜178 °C （含三分子水）；188 °C27 30 16 2（无水物）难溶于冷水（1:8000〜10000），可溶于热水（1:180〜200），热甲醇（1:10），冷甲 醇（1:100）,热乙醇（1:60）,冷乙醇（1:650）,难溶于乙醚、三氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、 丙酮，易溶于碱液2011届本科生毕业论文OH槲皮素(Quercetin)： 眷①丐。
黄色结晶,mp313〜314 °C (2分子结晶水)，316 °C(无水物)能溶于冷乙醇(1:290),易溶于沸乙醇(1:23),可溶于甲醇、乙酸乙酯、冰醋酸、 吡啶、丙酮等，难溶于水、苯、石油醚等溶剂OH-S. ”OHOH O槲皮素还含有皂貳，其粗制品为白色粉末，经酸水解后得二种皂貳元及糖部分，这两种皂貳元是 白桦酯醇和槐花米双醇，另外还含槐花米甲素、槐花米乙素、槐花米丙素等本实验是利用芦丁为黄酮苷，分子中具有酚羟基，显酸性，可溶于稀碱液，在酸液中沉 淀析出的性质进行提取分离利用芦丁易溶于热水、热乙醇，较难溶于冷水、冷乙醇的性质选 择重结晶方法进行精制芦丁可被稀酸水解生成槲皮素及葡萄糖、鼠李糖，依此可进行槲皮素 的制备通过纸色谱及紫外光谱进行黄酮及糖的鉴定1.2实验仪器及药品SHZ-D循环水式真空泵（河南省巩义市英峪仪器一厂），HH-Z电热恒温水浴锅（上海医疗 器械五厂），烧杯（1000ml）,圆底烧瓶，球形冷凝管，漏斗，托盘天平，抽滤瓶，布氏漏斗 滤纸，试管，滴管，新华1号滤纸，铅笔，铁架台，电炉，石棉网，橡皮管槐花米（2011年购于同仁堂大药房），95%乙醇，浓硫酸，浓盐酸，镁粉，醋酸铅试剂，1-萘酚，正丁醇，醋酸，1%三氯化铝-乙醇溶液，无水乙醇，硼砂水，饱和石灰水。
1.3芦丁的提取1.3.1 水提法取20 g槐米于烧杯中用水漂洗干净，捞取上浮的花蕾弃去下沉的杂质，将洗净的花蕾置 于1000 ml的烧杯中，加沸水500 ml煮沸45 min,不断补充蒸发掉的水，趁热过滤（用棉花）， 再用200 ml沸水提取30 min,合并两次滤液，浓缩体积至1/2放置过夜，析出芦丁，抽滤、 沉淀用少量冷水洗三次、抽干，60 °C以下干燥、称重，计算得率1.3.2碱水（石灰水）提取法取20 g槐花米于研钵中研成粉状物，置于250 mL烧杯中，加入150 mL饱和石灰水溶液， 于石棉网上加热至沸腾，并不断搅拌，煮沸15 min后抽滤，滤渣再用100 mL饱和石灰水溶液煮 沸10 min,抽滤合并两次滤液，然后用15%盐酸（约5 mL ）中和，调节pH为3〜4放置1 h〜2 h,使沉淀完全，抽滤，沉淀用水洗涤2〜3次，得芦丁粗品将粗品芦丁置于250 mL的烧杯 中，加水150 mL于石棉网上加热至沸腾，不断搅拌并慢慢加入约50 mL饱和石灰水溶液，调节 溶液pH为8〜9，待沉淀溶解后，趁热过滤滤液置于250 mL的烧中，用15%盐酸调节溶液的 pH值为4〜5,静置30 min，芦丁以浅黄色结晶析出。
抽滤，产品用水洗涤1〜2次，烘干后约 重1.5 g,熔点183 C〜190 C（不含结晶水）碱水提取是利用芦丁在碱水中成盐而增大溶解能力， 加酸酸化后可析出结晶的原理进行的1.3.3有机溶剂（乙醇）回流法将20 g粉状槐花米、碳酸氢钠和酒精置于回流装置中，加热至沸，待芦丁完全溶解后，取 出过滤，进行蒸馏浓缩，至粘稠状时，加入蒸馏水及2 %的活性炭，调节pH为7.5〜8,加热煮 沸20 min,趁热过滤，滤液调节pH=为7,自然冷却，结晶析出，烘干，称重1.4芦丁的精制1.4.1 重结晶将粗制芦丁研细，加95%乙醇回流溶解（每2 g芦丁需加70 ml左右乙醇）趁热过滤，取 1/2滤液浓缩至原体积的1/3-1/4，放置，析出结晶，抽滤，干燥称重，得精制芦丁，计算得率2011届本科生毕业论文1.4.2芦丁的水解取另1/2量芦丁滤液，加入1 mol硫酸（80 ml）水浴回流一小时（用聚酰胺薄层检查水解 是否完全）待全部水解后，蒸去乙醇，冷却、析出槲皮素、抽滤、滤液内含糖槲皮素沉淀经 水洗、抽干、干燥称重，计算得率再用乙醇重结晶一次，得黄色针晶，为槲皮素精品OH O+鼠李糖+葡萄糖含糖的溶液，取20 ml于水浴上加热，同时于搅拌下加硫酸钡细粉中和至中性。
滤除白 色的硫酸钡沉淀，滤液在水浴上浓缩至1-2 ml,供纸色谱用表1芦丁的提取与精制（t=45min）Table 1 Rutin extraction and refined （t = 45min）原料槐米芦丁精制芦丁槲皮素质量（g）19.23.02.01.2得率（％）9615.6366.71.0表2芦丁的提取与精制（t=90min）Table 2 Rutin extraction and refined (t = 90min)原料槐米芦丁精制芦丁槲皮素质量（g）19.21.80.90.6得率（％）969.385066.672鉴定2.1性质实验2.1.1盐酸-镁粉反应：取芦丁少量，加乙醇数滴溶解，再加浓盐酸5滴，最后加少量镁粉， 观察颜色变化2.1.2醋酸铅沉淀反应：取芦丁少许溶于热水，加醋酸铅试剂数滴，观察结果2.1.3 Molish反应：取芦丁和槲皮素少量，分别置于两支试管中各加乙醇数滴，加1-萘酚数 滴摇匀，倾斜试管，沿管壁滴加浓硫酸5滴，静置，观察二层溶液界面处的颜色变化表3槲皮素和芦丁的性质实验of the experiment盐酸-镁粉反应醋酸铅沉淀反应Molish反应样品芦丁芦丁芦丁槲皮素实验现象呈现红色出现粉红色沉淀出现棕色环呈。