Click to edit Master title style,,Click to edit Master text styles,,Second level,,Third level,,Fourth level,,Fifth level,,*,,*,,,,,,,,单击此处编辑母版标题样式,,单击此处编辑母版文本样式,,第二级,,第三级,,第四级,,第五级,,*,单击此处编辑母版标题样式,,单击此处编辑母版文本样式,,第二级,,第三级,,第四级,,第五级,,*,第八章,化妆品的微生物学检查,1,,化妆品的卫生标准,,化妆品微生物学检查基础知识,,化妆品中微生物总数检查,,化妆品中控制菌检查,2,一、,2007,版“化妆品卫生规范”,,粘膜用、婴儿及儿童用化妆品,,,眼部及口唇等,,细菌菌落总数,不得大于,500CFU/mL,或,500CFU/g,其他化妆品,,细菌菌落总数,不得大于,1000CFU/mL,或,1000CFU/g,3,所有化妆品,,霉菌和酵母菌总数,不得大于,100CFU,／,mL,或,100CFU,／,g,,,每克或每毫升产品中不得检出,粪大肠菌群,、,铜绿假单胞菌,和,金黄色葡萄球菌,。
4,二、检查的必备知识,1.,采样,,采样应具有代表性从两个包装单位以上的样品中共取,10g,或,10mL,作为检验量样品应严格保持原有的包装状态容器不应有破裂，在检验前不得打开，防止样品被污染接到样品后，应立即登记，编写检验序号，并按检验要求尽快检验及时检验的样品应放在室温阴凉干燥处，不要冷藏或冷冻5,二、检查的必备知识,1.,采样,,若样品需同时做多种分析，如细菌、毒理、化学等，则宜先取出部分样品做细菌检验，再将剩余样品做其它分析在检验过程中，从打开包装到全部检验操作结束，均须防止微生物的再污染和扩散，所用器皿及材料均应事先灭菌，全部操作应在无菌室内进行，或在相应条件下，按无菌操作规定进行6,二、检查的必备知识,1.,采样,,如检出粪大肠菌群或其它致病菌，自报告发出之日起该菌种及被检样品应保存一个月7,二、检查的必备知识,2.,供检样品（供试品）的制备,,水溶性液体样品,样品,,10mL,90mL,生理盐水,,1:10,供试液,8,二、检查的必备知识,2.,供检样品（供试品）的制备,,油性液体样品,②,5mL,灭菌液体石蜡,1:10,供试液,均质器,,,③,10mL,灭菌吐温,80,40~44℃,①,10mL,样品,混匀,,,10min,,,④,75mL 40~44℃,灭菌生理盐水,,,40~44℃,乳化,9,二、检查的必备知识,2.,供检样品（供试品）的制备,,亲水性半固体（膏、霜、乳剂）样品,振荡,②,90mL,生理盐水,上清液作为,1:10,供试液,,,,,,,①,10g,样品,15min,,,,,,,膏、霜剂若用均质器，混合均质,1~2min,即可。
10,二、检查的必备知识,2.,供检样品（供试品）的制备,,疏水性半固体样品,②,10mL,灭菌液体石蜡,1:10,供试液,均质器,,,③,10mL,灭菌吐温,80,40~44℃,①,10g,样品,混匀,,,10min,,,④,70mL 40~44℃,灭菌生理盐水,,,40~44℃,乳化,膏、霜剂若用均质器，混合均质,3~5min,即可11,二、检查的必备知识,2.,供检样品（供试品）的制备,,固体样品,振荡,②,90mL,生理盐水,上清液作为,1:10,供试液,,,,,,,①,10g,样品,15min,,,,,,,12,三、细菌、真菌总数检查,1.,意义,,测定总数主要是作为判定化妆品被细菌、霉菌及酵母菌污染程度的标记，也可以观察化妆品中细菌、霉菌及酵母菌的性质和在化妆品中的繁殖动态，以便对样品进行卫生学评价时提供科学依据13,三、细菌、真菌总数检查,2.,培养基、培养温度和时间,检查菌,培养基名称,培养温度,培养时间,细菌,卵磷脂、吐温,80-,,营养肉汤琼脂,36,℃,±,1,℃,48h,±,2h,真菌,虎红琼脂,28,℃,±,2,℃,72h,±,2h,14,三、细菌、真菌总数检查,,3.,方法－平皿法,数据,处理,混合平板的制备,细菌、真菌的培养,检查结果、观察与计数,供试液,的制备,书写检验,记录单,15,,,,细菌、霉菌和酵母菌计数的操作过程,10,-1,10,-2,10,-2,,,10,-1,10,-1,10,-2,10,-2,,,10,-1,对照,对照,对照,对照,1.0ml,倒置培养,48h±1h,36℃,±,1℃,卵磷脂、吐温,80-,营养肉汤琼脂,,,28℃,±,2℃,,虎红琼脂,倒置培养,72h±2h,9.0ml,,,,,,,,,,,稀释液,10g/ml,供试品,,,,9.0ml,10,-2,,,,,,,,10,-1,,,1.0ml,16,三、细菌、真菌总数检查,,4.,操作注意事项,,1.,尽量使菌细胞分散开，使每个菌细胞生成一个菌落，否则将会导致重大的技术误差。
2.,为防止细菌增殖及产生菌苔，制成供试液后，应尽快稀释，注皿一般稀释后应在,1,小时内操作完毕17,三、细菌、真菌总数检查,,4.,操作注意事项,,3.,使用吸量管时，应小心沿管壁加入，不用触及管内溶液，以防吸管尖端外侧黏附的溶液混入其中4.,注意抑菌现象由于防腐剂未被中和，往往使平板计数结果受影响，如低稀释时菌落少而高释释度时菌落数反而增大遇此情况应重复检验，以确定是防腐剂影响还是操作技术误差18,三、细菌、真菌总数检查,,4.,操作注意事项,,5.,为检查和控制灭菌效果，应做空白对照，以检验所使用的物品是否彻底灭菌及检验过程是否无菌操作6.,为便于区别化妆品中的颗粒与菌落，可在每,100mL,卵磷脂吐温,80,营养琼脂中加入,1mL0.5,％的,TTC,溶液，如有细菌存在，培养后菌落呈红色，而化妆品的颗粒颜色无变化19,三、细菌、真菌总数检查,,5.,菌落计数及报告方法,,宜选取细菌、酵母菌平均菌落数,30~300,之间、霉菌平均菌落数,5~50,之间的稀释级，作为菌数报告（取两位有效数字）的依据1,）,当只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，即以该平皿菌落数乘其稀释倍数,;,,（,2,）若有两个稀释度，其平均菌落数均在,30,个～,300,个之间，则应求出两菌落总数之比值来决定，若其比值小于或等于,2,，应报告其平均数，若大于,2,则报告其中稀释度较低的平皿的菌落数,20,三、细菌、真菌总数检查,,5.,菌落计数及报告方法,（,3,）,若所有稀释度的平均菌落数均大于300 个，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之,;,,（,4,）若所有稀释度的平均菌落数均小于,30,个，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之,;,,,（,5,）若所有稀释度的平均菌落数均不在,30,～,300,个之间，其中一个稀释度大于,300,个，而相邻的另一稀释度小于,30,个时，则以接近,30,或,300,的平均菌落数乘以稀释倍数报告之；,,（,6,）若所有的稀释度均无菌生长，报告数为每,g,或每,mL,小于,10CFU;,21,例次,不同稀释度平均菌落数,,,两稀释度,,菌数之比,菌落总数,,(CFU/mL,或,CFU/g),报告方式,,(CFU/mL,或,CFU/g,),,10,-1,10,-2,10,-3,,,,1,1365,164,20,-,16400,16000,或,1.6*10,4,2,2760,295,46,1.6,38000,38000,或,3.8*10,4,3,2890,271,60,2.2,27100,27100,或,2.7*10,4,4,不可计,4650,513,-,513000,513000,或,5.1*10,5,5,27,11,5,-,270,270,或,2.7*10,2,6,不可计,305,12,-,30500,31000,或,3.1*10,4,7,0,0,0,-,<1*10,,22,四、控制菌检查,－检查项目,（,1,）,阴性对照,试验：应无菌生长。
2,）,阳性对照,试验：供试品,+,阳性对照菌，应检出相应的阳性对照菌3,）,供试品,控制菌检查：依相应的检查方法进行23,四、控制菌检查,－检查流程,供试品,增菌培养,分离培养,纯培养,染色镜检,生化反应试验,报告结果,24,四、控制菌检查,－检查流程,1.,增菌培养目的,,使被检药物中的被检菌增殖，避免出现漏检25,四、控制菌检查,－检查流程,2.,分离培养目的,,经增殖培养后,,,被检菌大量繁殖，同时其他一些杂菌也出现增殖因此分离培养能使目的菌从混合菌中分离出来26,四、控制菌检查,－检查流程,3.,纯培养目的,,只是大量增殖被检菌，用于后面的进一步检验27,四、控制菌检查,－检查流程,4.,染色镜检目的,,初步鉴定，观察细菌的形态大小28,四、控制菌检查,－检查流程,5.,生化试验目的,,最终的鉴定依据，结合染色镜检得出实验结果，填写检验报告29,四、控制菌检查,－,粪大肠菌群检查,★,粪大肠菌群,,粪大肠菌群系一群需氧及兼性厌氧,革兰氏阴性,无芽胞杆菌，在,44.5℃±0.5℃,培养,24h,～,48h,能发酵乳糖,产酸并产气,30,四、控制菌检查,－,粪大肠菌群检查,★,粪大肠菌群检查意义,,粪大肠菌群主要存在于温血动物粪便中，随粪便排出体外后可直接污染化妆品，若产品中检出该菌群，表明该产品受到粪便污染，可能存在肠道致病菌并引起疾病，是评价化妆品卫生质量的重要指标之一。
31,四、控制菌检查,－粪大肠菌群检查,,产酸：黄色,产气：气泡,产酸产气,书写检验,记录单,不产酸不产气,增菌培养,供试液的制备,配培养基和稀释液,检查结果判断,44 ±0.5℃,24~28h,分离培养,蛋白胨水培养,最终结果判断,44 ±0.5℃,24,±,2h,靛基质,,特征菌落,36±1 ℃,18~24h,,双倍胆盐乳糖,M,,EMB,琼脂,,液面玫瑰红色,,紫黑色,★,粪大肠菌群检查流程图,32,双倍乳糖胆盐培养基,EMB,琼脂培养基,靛基质试验,气泡，培养基呈黄色,紫黑色金属光泽,玫瑰红色液面,33,四、控制菌检查,－,粪大肠菌群检查,★,粪大肠菌群检查结果报告,,,根据发酵乳糖产酸产气，平板上有典型菌落，并经证实为革兰氏阴性短杆菌，靛基质试验阳性，则可报告被检样品中检出粪大肠菌群34,四、控制菌检查,－铜绿假单胞菌检查,★,铜绿假单胞菌,,铜绿假单胞菌属于假单胞菌属，为,革兰氏阴性,杆菌，,氧化酶阳性,，能产生,绿脓菌素,此外还能,液化明胶,，,还原硝酸盐,为亚硝酸盐，在,42℃±1℃,条件下能生长35,四、控制菌检查,－铜绿假单胞菌检查,★,铜绿假单胞菌检查意义,,铜绿假单胞菌在特殊情况下可引起皮肤化脓感染、泌尿道感染、中耳炎等。
外伤及烧伤患者感染后最易引起化脓，并引起败血症为保证消费者安全，化妆品中不得检出铜绿假单胞菌36,四、控制菌检查,－铜绿假单胞菌检查,最终结果判断,增菌培养,供试液的制备,书写检验,记录单,分离纯化,无菌落或无特征菌落,配培养基和稀释液,革兰染色、镜检→,氧化酶试验,绿脓菌素试验,生化试验 硝酸盐还原试验,,42℃,生长试验,明胶液化试验,,★,铜绿假单胞菌检查流程图,,SCDLP,培养基,,十六烷三甲基溴化铵琼脂,36±1℃,18~24h,36±1℃,18~24h,,特征菌落,,灰白色、扁平、周围有水溶性蓝绿色素,37,十六烷三甲基溴化铵平板,SCDLP,培养基,黄绿色菌膜,灰白色湿润,氧化酶试验,粉红,/,紫红色,38,绿脓菌素试验,盐酸层呈粉紫色氯仿层呈蓝绿色,硝酸盐还原产气试验,N,2,明胶液化试验,明胶培养基（高层）,明胶液化,39,四、控制菌检查,－铜绿假单胞菌检查,★,铜绿假单胞菌检查结果报告,,,被检样品经增菌分离培养后，经证实为革兰氏阴性杆菌，氧化酶及绿脓菌素试验皆为阳性者，即可报告被检样品中检出铜绿假单胞菌；如绿脓菌素试验阴性而液化明胶、硝酸盐还原产气和,42℃,生长试验三者皆为阳性时，仍可报告被检样品中检出铜绿假单胞菌。
40,四、控制菌检查,－,金黄色葡萄球菌检查,★,金黄色葡萄球菌,,金黄色葡萄球菌为,革兰氏阳性球菌,，呈葡萄状排列，无芽胞，无荚膜，能,分解甘露醇,，,血浆凝固酶阳性,41,四、控制菌检查,－金黄色葡萄球菌检查,★,金黄色葡萄球菌检查意义,,,金黄色葡萄球菌在外界分布较广，抵抗力也较强，能引起人体局部化脏性病灶，严重时可导致败血症，因此化妆品中检验金黄色葡萄球菌有重要意义42,四、控制菌检查,－金黄色葡萄球菌检查,革兰染色、镜检→,生化试验,:,血浆凝固酶试验,甘露醇发酵试验,最终结果判断,增菌培养,供试品的处理,书写检验,记录单,分离纯化,无菌落或无特征菌落,配培养基和稀释液,36±1℃,36±1℃,,SCDLP,培养基或,7.5%NaCl,肉汤,24,±2,h,,Baird Parker’s,或血琼脂,24~48h,,特征菌落,,灰黑色、边缘有浑浊带、周围有透明带,★,金黄色葡萄球菌检查流程图,43,Baird Parker’s,平板,灰,/,黑色,甘露醇发酵试验,血浆凝固酶试验,血浆凝块,液态血浆,44,四、控制菌检查,－金黄色葡萄球菌检查,★,金黄色葡萄球菌检查结果报告,,凡在上述选择平板上有可疑菌落生长，经染色镜检，证明为革兰氏阳性葡萄球菌，并能发酵甘露醇产酸，血浆凝固酶试验阳性者，可报告被检样品检出金黄色葡萄球菌。
45,,谢谢观看,/,欢迎下载,BY FAITH I MEAN A VISION OF GOOD ONE CHERISHES AND THE ENTHUSIASM THAT PUSHES ONE TO SEEK ITS FULFILLMENT REGARDLESS OF OBSTACLES. BY FAITH I BY FAITH,内容总结,第八章 化妆品的微生物学检查细菌菌落总数不得大于1000CFU/mL 或1000CFU/g亲水性半固体（膏、霜、乳剂）样品三、细菌、真菌总数检查36℃±1℃28℃±2℃1.尽量使菌细胞分散开，使每个菌细胞生成一个菌落，否则将会导致重大的技术误差由于防腐剂未被中和，往往使平板计数结果受影响，如低稀释时菌落少1）当只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，即以该平皿菌落数乘其稀释倍数6）若所有的稀释度均无菌生长，报告数为每g 或每mL 小于10CFUCFU/mL或CFU/g)CFU/mL 或CFU/g)2）阳性对照试验：供试品+阳性对照菌，应检出相应的阳性对照菌3）供试品控制菌检查：依相应的检查方法进行四、控制菌检查－检查流程使被检药物中的被检菌增殖，避免出现漏检。
经增殖培养后,被检菌大量繁殖，同时其他一些杂菌也出现增殖因此分离培养能使目的菌从混合菌中分离出来生化试验:血浆凝固酶试验,。