硕士学位论文多不饱和脂肪酸对海马神经细胞的营养作用侧际 写t吮 -* TZ开 写 赶 k 卜 月 r. A匕 任 仑 当仁 中月 七 盆 窗 名冬 -W w j 月 j 氏毕业论文题目:多 不饱和脂肪酸对海马神经细胞的 营养作用植 物 学专业2 0 0 2 指导教师( 姓名、职称) ; 刘志礼 教授 李朋富级副教授硕士生姓名:饶相君摘要本试验采用细胞培养和生化测定的方法研究 了多不饱和脂肪酸( p o ly u n sa tu r a t e d fa tt y a c id s , P U F A s ) ， 尤 其 是二 十二 碳 六烯酸( d o c o s a h e x a e n o ica c i d , D H A 2 2 :6 n - 3 ) 和花生四烯酸 ( a ra c h id o n ic a c id , A A 2 0 :4 n - 6 ) ，对原代培养的大鼠 海马神经细胞的营养作用测定了 在P U F A s 存在条 件下大鼠 海马神经细胞超氧化物歧化酶 ( S O D ) 、 过氧化氢酶 ( C A T ) 、 丙二醛 ( M a l e i c D i a ld e h y d eM D A ) 、 谷胧甘肤 ( G S H ) 、谷肤甘肤过氧化物酶 ( G S H - P x ) 、谷耽甘肤还原(h ( G R ) 、 一氧化氮 ( N O ) 、 一氧化氮合酶(N O S ) 的 水平 变化。
主要结果如下:1 . P U F A s 可以 有效降低细胞的氧化应激性，增强细胞抗氧化酶活性1 ) 5 - 5 0 p g / m l D H A 和A A 能显著提高细胞中谷胧甘肤过氧化物酶( G S H - P x ) 、谷脆甘肤还原酶 ( GR ) 的活性以及提高细胞中谷肤甘肤( G S H )的含量 ( p 0 .0 5 ) ，对细胞内一氧化氮合酶 ( N O S ) 活性的影响， 仅5 0 Irg / m l A A 与对照组相比 差异硕上学位论文多不饱和脂肪酸对海马神经细胞的营养作用较显著 ( P 0 .0 5 ) . O n ly5 0 p g /m l A A h a v e s ig n ifi c a n t d iff e r e n c e o n t h e a c t iv it y o f N O S ( p 0 .0 5 ) , 3 个剂量组与对照相比， 差异无显著性( P > 0 .0 5 ) . 随D H A , A A浓度增高细胞内 外N O S活性增加不明显( p > 0 -0 5 ) ， 仅有5 0 p g /m l A A与 对照组相比， 差 异有显著性 ( 表3 ) .表 3 D H A , A A引起海马神经细胞内外 N O含量和NO S 活性改变浓度 细胞外N O ( p m o l / L )细胞内例 O ( p m o l/m l )细 胞 外 N O S( U / mo l )细胞内N O S( U /m g -p r o te in )Co n t r ol1 1 8 . 5 2 士 3.373. 1 7 士0 . 8 91 6 . 2 2 -+1 . 813 .9 3 士 0 . 8 65 p g / m l D H A1 1 6 . 9 8 士 4.6 03.2 5 士0 . 2 21 } 8 .7 1 2 .8 34 . 1 1 士1 . 0 315 V g / m l A AI1 1 8 . 0 4 士 8.0 63. 1 2 」 二 0 . 3 71 7. 7 2 12 . 3 24 . 0 5 士1 . 513 0 Vg/ml D H A1 1 5 . 8 4 13 . 9 43 . 4 5 士0 . 1 93 . 51 士0 . 4 61 9. 3 6 13 . 3 21 8. 6 5 土4 . 514 . 1 9 士0 . 9 43 0 f i g / m l A A1 2 0 . 3 5 士 6 234 . 1 3 土1 . 0 45 0 Ir g / m l D H A， 5 0 V g / m l A A1 1 9 . 7 8 14 234 . 1 3 f 0 . 8 9 *1 9.9 6 土3 . 2 21 2 2. 3 2 士4 . 6 94 3 5 1 0 石 1 ..N o t e : v a l u e s a r e e x p r e s s e d a s m e a n士S . E . M. n = 3 , * P < 0 . 0 5 , * * P < 0 . 0 1 i sc o n t r o lZ 。
讨论硕士学位论文多不饱和脂肪酸对海马神经细胞的营养作用曾有 文献报道添加 P U F A s 可引起细胞的氧化损伤，但这些文献中使用的P U F A s 剂量较高[7 s 1 我们的研究数据显示: D H A和 A A在比 较低但是有效的浓度范围内，不仅能降低海马神经细胞的氧化应激，而几能提高系统的抗氧化能力P U F A s 与神经细胞抗氧化能力的关系由两方面因素决定:I . P U F A s 的浓度;2 . 神经细胞对不同 P U F A s 的敏感性这两者协同作用，决定 了P U F A s 与神经细胞的抗氧化能力这一复杂的关系结果显示;5 - 5 0 侧 m l D H A 或A A可不同程度的有效提高 细胞内 G S H -P x ,S O D 和C A T 等抗氧化酶的活性，其中D HA 的影响呈现明显的剂量一 效应关系，在3 0 , 5 0 p g /m l 时 对酶活性影响较大， 而A A 在5 p g /m l 即表现出 显著的影响， 表明细胞对A A 的 敏感性较D H A 强烈 G S H - P x 和S O D , C A T 共同 清除超氧阴离子’0 2 - ,轻自 由基 O H 一 和过氧化氢H 2 0 2 . 缓解过氧化物的损害， 延缓细胞的衰老。
研究证实 19 'F 01 , G S H -P x 活性的增加与细胞对n - 3 P U F A s 敏感性降低相关. 并能减少脂质过氧化对细胞的损伤作用C A T 能减少H 2 0 2 .减少自由基和过氧化脂质的生成，与 S O D 协同作用，使 ，0 2 ·彻底无毒化口 S O D 中的C u 2 + 可被歧化反 应产物 H 2 仇还原失 去活力，C A T 可清除 H 2 0 2 对S O D 起保护作用，同 样， '0 2 也可使C A T 失活因此C A T 和S O D 可以 相互 保护，协同作用G S H 含量可衡量机体的抗氧化能力 1v .lo l，因为G S H 能清除自 由基，防止氧化损伤1v lD A 是脂质过氧化的产物，它的含量的多少可反映机体内 脂质过氧化的程度结果显示5 - 5 0 lxg / m l D H A 和A A 使细胞内 外的G S H 的含量较对照组只略有增加或变化不大，对MD A 基木无影响因此添加适量的多不饱和脂肪酸不会增加系统的脂质过氧化反应 19 ,1 0 1N O具有 自由基的性质，具有松弛血管平滑肌、抑制血小板聚集等生理功能但是N O高浓度长时间的作用可以导致甘油醛- 3 - 磷酸脱氢酶发生A D P -核糖基化、使谷肤甘肤过氧化物酶失活;可抑制非血红素铁一 硫酶，如线粒体和细胞浆中的顺乌头酸酶、线粒体呼吸链中的 N A D H - 氢酿氧化还原酶、液拍酸一 氯酮氧化还原酶， 从而抑制线粒体呼吸和能量代谢;可使 S O D分子内的酪氨酸硝基化，使 S O D失活。
N O S是催化 NO生物合成的酶，有 3 种亚型:神硕上学位论文多不饱和脂肪酸对海马神经细胞的营养作用经元型( n N O S ) 、诱导型( iN O S ) 和内皮型( e N O S ) 由于n N O S 和e N O S 在细胞处于生理状态下即有表达，故合称为结构型N O S ( c N O S ) a c N O S 活性受C a “浓度调节当C a 2 1 进入细胞与钙调蛋白 (( C a M ) 结合形成C a t 十 一 C a M复合物，与C N O S 结合导致其激活， 活性增加， N O 合成增加‘1 1 ,12 ,13 ,1 4 1 本研究显示， 在D H A , A A作用下，细胞内N O含量与对照相比 无明显增加， 细胞内N O S 活性的改变也不显著，暗示添加适量的D H A , A A可能未引 起细胞内 游离C a 2 +的明显变化细胞的抗氧化物质影响着细胞D H A 的水平，而 D H A 的水平反过来会促 进细胞内 这些抗氧化成分的水平 P U F A s 可作为电子供体， 消弱有害自 由 基对细胞的损伤 同时， 多 不饱和脂肪酸可以 作为电 子屏障 减少自 由基对膜磷脂的伤害， 减轻脂质过氧化程度，降低细胞的氧化应激。
硕 士学 位 论 文多不饱和脂肪酸对海马神经细胞的营养作用参考文献1 .鄂征等. 组织培养和分子细胞学技术 北京出版社， 1 9 9 42 . G r e e n L , W a g n e r D , G lo g o w s k i J , S k ip p e r P , W is h n o k J , T a n n e n b a u m S . A n a ly s iso f n i t r a t e , n i t r it e , a n d [ I 5 N ] n i t r a t e i n b i o l o g i c a l fl u i d s . A n a l B i o c h e m , 1 9 8 2 , 1 2 61 31 1 3 83 . F e r n a n d e z C J , K a p l o w i t z N . T h e u s e o f m o n o c h l o r o b i m a n e t o d e t e r m i n e h e p a t i cG S H l e v e l s a n d s y n t h e s is . A n a l B i o c h e m , 1 9 9 0 , 1 9 0 : 2 1 2 - 2 1 9J﹃卜. R产。
?月4 . F l o h e L , G u n z l e r W A . A s s a y s o f g l u t a t h i o n e p e r o x i d a s e . Me t h o d s E n z y m o l1 0 5 :1 1 4 1 2 15 . C a r b e r g 1 , Ma n n e r v i k B . G l u t a t h i o n e r e d u c t a s e . Me t h o d s E n z y m o l , 1 9 8 54 8 4 49 06 . A l e x a n d e r - No rt h L S , N o rt h J A , K i m i n y o K P , B u e tt n e r G R , S p e c t o r AP o ly u n s a t u r a t e d f a tt y a c id s in c r e a s el i p i d1 9 9 4r a d i c a l f o r m a t i o n i n d u c e d b y o x i d a n ts t r e s s i n e n d o t h e l i a l c e l l s . J L ip id R e s ,3 5: 1 7 7 3 -- - 1 7 857 . D ' A q u in o M, B e n e d e t t i P C , 。