单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,*,第七章 细菌学卫生检验种类及标准,邵丽军,1,主要内容,第一节,体液、分泌物及排,泄物细菌学检验,第二节,各种环境标本细菌学检,验及卫生标准（自学）,2,临床感染性疾病的诊断和治疗,应用良好的检测技术和方法，提供准确的结果或报告,确定检查目的和方法,正确规范的采集和运送标本,临床检验流程,第一节,体液、分泌物及排,泄物细菌学检验,3,细菌学鉴定方法,1、形态结构检查,2、细菌生长特性检查如菌落,3、生化试验,4、血清学试验,5、药敏试验,6、细菌毒素检测,7、分子生物学检测,8、噬菌体分型试验,9、动物试验,4,临床标本常规细菌学检验程序,标本选择,标本采集与运送,观察标本、前处理,直接涂片,快速检验,分离培养,增菌培养,可疑菌落,血清学鉴定,药物敏感试验,生化反应,形态观察,结果报告,5,细菌学检验报告原则,分级报告,一级报告：直接涂片染色结果及培养结果,二级报告：分离培养及药敏结果,三级报告：细菌种属、药敏结果、结果评价和建议,6,7,无菌原则,正确采,样时间,正确采,样部位,足够样本量,多样性采集,做好记录,标本采集的一般原则,8,一、血液标本细菌学检验,二、脑脊液标本细菌学检验,三、穿刺液和引流液标本细菌学检验,四、尿液标本细菌学检验,五、脓液和分泌物标本细菌学检验,六、痰液标本细菌学检验,七、生殖道标本细菌学检验,八、粪便标本细菌学检验,9,一、血液标本细菌学检验,种类,常见病原菌,G,+,球菌,金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、肺炎链球菌、化脓链球菌、草绿色链球菌、肠球菌,G,+,杆菌,结核分枝杆菌、产单核李斯特菌、阴道加特纳菌,G,-,球菌,脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌，卡他布兰汉菌,G,-,杆菌,大肠埃希菌、铜绿假单胞苗、克雷伯杆菌、肠杆菌、变形杆菌、沙雷菌、沙门菌、不动杆菌、嗜肺军团菌、嗜血杆菌,真菌,念珠菌、曲霉菌、隐球菌、球孢子菌,厌氧菌,拟杆菌、产气荚膜梭菌,10,（一）血液标本的采集与送检,1.采样时间：,发热期、用药之前、病情发展,2.采样部位及频率：,多部位、高频率,例1：亚急性心内膜炎：24h内在三个不同部位采集3次血标本，两次间隔不少于15分钟，如培养阴性，就再采3次血标本。
例2：急性脓毒血症：在10分钟内在不同部位采23次血标本11,3.,样本采集的量：,成人血量,5,10ml,，婴儿,1ml,2ml,，儿童,3ml,5ml,；当怀疑为真菌感染时，应采集双份量，分别作双相培养,(37/28),4.,样本的送检：,尽快，室温,5.,操作：直接采血注入含増菌肉汤的培养瓶或,用不含防腐剂的肝素抗凝管至实验室接种，需,同时做需氧和厌氧培养,12,血培养,一级报告,二级报告,三级报告,“检出*菌”，药敏试验结果；,7天仍无生长现象，报告为“7,天培养无细菌生长”（结核可,培养8周报告阴性,）,13,（二）细菌学检验,14,（一）标本的采集与送检,1.采样：,腰椎穿刺术无菌采集脑脊液,3-5ml,，,床边接种,或放入无菌试管中，立即送检（,采样到送检不超过1h,）；,2.注意,保温,，不可置冰箱保存，因为会使病原菌死亡，尤其是脑膜炎奈瑟氏菌、肺炎链球菌及流感嗜血杆菌；,3、脑脓肿吸出物尚须检测,厌氧菌和寄生虫,培养基选择,：,普通血培养瓶、厌氧血培养瓶、血平皿、中国蓝平皿、流感嗜血杆菌平皿等二、脑脊液标本细菌学检验,15,（二）细菌学检查,1涂片检查：,革兰染色,：查找一般细菌，尤其脑膜炎奈瑟菌、肺炎链球菌和链球菌多见。
抗酸染色,：查找结核分枝杆菌墨汁染色：查找新型隐球菌2细菌培养：脑脊髓液培养多数需34天，在此期间如有细菌生长，经鉴定报告“菌”，同时报告药敏试验结果16,床边接种,离心涂片，同时增菌,不染色镜检,革兰、抗酸、墨汁染色,单菌落涂片染色,离心沉淀物或増菌培养物,脑脊液,报告单,17,三、穿刺液和引流液标本细菌学检验,（一）标本的采集与送检,1,、标本来源：,胸腔积液、腹水、心包积液、关节液、胆汁、鞘膜液深部组织液等,2,、标本量：,心包积液、关节液,为,1-5ml,，,胸腔积液、腹水,为,5-10ml,3,、收集送检：,无菌收集并置于无菌抗凝试管送检，无法立即送检可冷藏；标本还可床边接种或置厌氧运送培养基内送检，无法立即送检可室温保存18,（二）细菌学检查,1,、标本处理：,浆液离心沉淀物涂片；脓液直接涂片；含血细胞，加等量蒸馏水破坏红细胞后，离心沉淀物涂片,2,、涂片检查：,这类标本因原部位是无菌的，只要检出细菌即可诊断感染的类型，故直接涂片很重要革兰染色：查找一般细菌抗酸染色：查找结核分枝杆菌3,、分离培养及鉴定：,离心沉淀物分别接种增菌肉汤、血琼脂平板、中国蓝或麦康凯琼脂平板、厌氧血琼脂平板。
如有细菌生长，需进一步鉴定和药敏试验后报告19,四、尿液标本细菌学检验,（一）标本的采集与送检,1,、采集方法：,防止尿液被尿道口菌群污染，采用,中段尿采集法、导尿法和膀胱穿刺法,采集标本,无菌,导尿管采集,尿液，在排出,15ml,尿液后收集，有潜在引入尿道菌的危险；,留置导尿管,采尿，先以,75%,酒精消毒导管口，用无菌注射器收集,10ml,；,长期留置导尿管,患者，应在更换新尿管时留取尿标本20,2,、采集时间：,通常应采集早晨起床后第一次尿液，在抗菌药物应用之前采集尿液,10-15ml,3,、送检：,及时送检，室温不超过,2h,；冷藏不超过,8h,；淋病奈瑟菌和厌氧菌培养应保温送检21,（二）细菌学检查,1,、显微镜检查：,离心沉淀物涂片根据临床情况选择染色方法如革兰染色和吕氏美蓝染色（淋球菌）、抗酸染色（结核分枝杆菌）、暗视野显微镜直接观察（钩端螺旋体）2,、分离培养及鉴定,：,必须做,倾注培养法,计数尿液菌,，培养结果才有临床意义离心沉淀物分别接种血琼脂平板、中国蓝或麦康凯琼脂平板或疑似菌相应培养基，可疑菌落进行涂片、染色、生化鉴定、药敏等22,3,、结果报告,涂片镜检,，报告形态特点和染色情况；,尿液,细菌计数,，如为革兰阳性菌,10,4,CFU,m1,；如为革兰阴性菌,10,5,CFU,m1,，可诊断为泌尿系感染。
10,的尿路感染者可能在同份尿标本中分离到,两种细菌,，并都是病原菌但当检出,3,种或以上不同微生物，认为标本被污染分离到的细菌，经鉴定及药敏试验后，可报告“,检出*菌，药敏结果是*”；,48h,无细菌生长，报告阴性报告“,2,天培养无细菌生长,”23,尿液检查,尿液标本,离心沉淀涂片,可疑菌落,血清学鉴定,药物敏感试验,生化反应,形态观察,尿液菌落计数,接种平板分离培养,报告,结果,24,（一）标本的采集与送检,拭子采集法、纱布条采集法、注射器抽吸法,开放式脓肿,封闭式脓肿,大面积烧伤,瘘管采样,样品不能及时送检可冷藏；,厌氧培养要床边接种或厌氧运送五、脓液和分泌物标本细菌学检验,清洗后，棉拭子直接采样,切开排脓时用无菌棉拭子采样或注射器抽吸,可多部位棉拭子采集创面分泌物,纱布条塞入瘘管或棉拭子采样,25,（二）细菌学检查,1,、,涂片检查：,革兰染色：可检查一般细菌，特别注意真菌及放线菌存在抗酸染色：找结核分枝杆菌,(,部分奴卡菌也可阳性,),2,、分离培养及鉴定,：,分泌物或脓液,分别接种血琼脂平板、中国蓝或麦康凯琼脂平板或疑似菌相应培养基，可疑菌落进行涂片、染色、生化鉴定、药敏等。
3,、结果：,一般培养,2,日，以为诺卡菌培养,7,天，厌氧菌,3-5,天，报告结果26,27,（一）标本的采集与送检,1、采样时间及类型：,使用抗生素前采集用清水反复漱口后取第2或3口的晨痰；,就诊时深呼吸后咳出的即时痰；,送痰前一日，晚间咳出的痰液2、采样方法,自然咳痰法,拭子采集法,小儿取痰法,特殊取痰法,呼吸道深部痰，可雾化使痰易排出,压住舌根，棉拭子反复涂抹咽后壁或悬雍垂后侧,压舌，棉拭子深入咽部，刺激咳出分泌物,胃内采痰法、支气管镜等特殊方法,六、痰液标本细菌学检验,28,3,、送检：,样品不能及时送检室温不超过,2h,；结核或真菌痰液冷藏4,、标本质量：,标本量一般在,3-5ml,，标本性状属于干酪痰、褐色血痰或含少量新鲜血液的血痰、粘液痰者为合格的标本,29,（二）痰液细菌学检查,痰液标本,脓性或带血,部分涂片,可疑菌落,血清学鉴定,药物敏感试验,生化反应,形态观察,稀释后接种平,板分离培养,报告,结果,30,（一）标本的采集与送检,1、采样方法,生殖道分泌物,穿刺液标本,怀疑梅毒患者,前列腺液,2、送检,普通细菌、衣原体、支原体,淋病奈瑟球菌,厌氧菌,清洗尿道口外阴，棉拭子深入尿道口2-3cm采集；,阴道分泌物在阴窥镜下采集,盆腔脓肿者及子宫分泌物需穿刺采集,清洗生殖器，从溃疡底部挤出少许组织液,按摩前列腺后采集,七、生殖道标本细菌学检验,无法及时送检可冷藏保存,床边接种或保温后及时送检,室温，厌氧送检或床边接种,31,（二）细菌学检验,1、显微镜检查,2、分离培养及鉴定,3、结果报告,32,（一）标本的采集与送检,1、采样方法,1、常规培养不主张用肛拭子，自然排便后，挑取有脓液、粘液部位的粪便2-3g或液状粪便1-2ml；,2、直肠拭子法：不易获得粪便时或排便困难的患者及幼儿，可采用直肠拭子方法采集；,2、送检,不能及时送检放入卡-布运送培养基或pH7.0磷酸盐甘油运送或保存。
疑似霍乱弧菌，碱性蛋白胨水运送保存八、粪便标本细菌学检验,33,（二）细菌学检验,1、显微镜检查：,因,正常菌群多，一般不做，特殊菌可做如霍乱弧菌,制动试验和革兰染色,镜检；结核分枝杆菌,抗酸染色,；葡萄球菌、艰难梭菌、弯曲菌和酵母样菌,革兰染色,2、细菌培养：,根据需要检查的细菌选择粪便培养条件，一般需培养23天如有阳性菌生长，需进一步进行生化鉴定和药敏试验后报告34,重要知识点,各类临床标本采集及送检,临床标本常规细菌学检验程序及分级报告,35,。