实验CTAB法分离植物总基因组DNA本方法适用于从一系列的单子叶和双子叶植物中提取总DNA,产率一般为 100-200 n g/g鲜重组织药品试剂 液氮——2 X CTAB 缓冲液：100mmol/L Tris-HCL pH8. 0, 1. 4mol/L NaCl, 20mmol/L EDTApII8. 0, 2%CTAB, 0. 7%（v/v） B —筑基乙醇（用而加入）一一氯仿/异戊醇（24： 1） RNaseA：取 lOOmg RNase 溶于 10ml 含有 10mmol/L Tris（pH7. 5）, 15mmol/L NaCl的溶液中，配成lOmg/ml的浓度，100°C热处理15min除去残留的DNase 活性，分装成小份-20°C保存——异丙醇——76 % 乙醇+ 10mMNH.*c--70%乙醇——TE 缓冲液：10mmol/L Tris-HCL, lnunol/L EDTA pH8. 0仪器设备__天平 研钵和杵子一一离心管——37°C、65°C、水浴 液氮一一离心机（转速至少可达5000r）操作程序1、向装冇700-800mg磨碎的干燥植物组织（最好是经去淀粉处理）的50ml聚 丙烯离心管中加入20ml 65°C预热的1XCTAB提取缓冲液。
轻轻转动离心管使植物组织在提取缓冲液中均匀分散，65°C温育90min,并不时轻轻转动离 心管或者，将10g经去淀粉处理的新鲜植物材料用液氮速冻，在研钵中将其磨碎, 在化冻2而将粉末转移至一 50ml聚丙烯离心管中，然后加入20-40ml预热 至90°C的2XCTAB提取缓冲液轻轻转动离心管，混匀，然后置于65°C水浴 放置 60 —90mino2、 混合物冷至室温后加入等体积的氯仿/异戊醇温和摇动15-40min使之充 分混合室温下5000g离心10-15min分相3、 将上清（水相）转移至一干净离心管中，加入1/100体积RNase贮液，颠倒 混匀，37°C保温30mino4、 加入2/3体积的异丙醇，仔细泯匀，室温放置30niin沉淀DNA可在4°C冰 箱中过夜）5、 用一•玻璃钩将DNA钩出，并转移至一装冇5ml76%乙醇+ 10mM NH4Ac的干净 离心管中，一20°C放置20min,然后转移至一装有5ml70%乙醇的离心管中, 冰上旋转5min6、 将DNA转移至一干净管中，空气干燥，溶于尽可能少的TE缓冲液中（视DNA 的量和纯度而定）若要使DNA样品加速溶解并除去其中残留的DNase活性， 可置于65°C水浴加热lOmin, 4°C贮存。
注意事项1、 研磨好的植物材料细粉末在转入离心管之而不耍让它融化2、 氯仿/异戊醇抽提时，摇晃动作一定要轻柔，否则容易使DNA断裂降解离 心温度应保持不低于15°C,温度太低可能导致CTAB沉淀从而损失DNAo3、 本程序提取的DNA可以在4°C条件下储藏儿星期，一般不提倡冻起来，因为 低温冷冻会导致DNA分子断裂如果耍长时间保存，最好以乙醇沉淀的形 式保存在・20°C o4、 如果材料的色索物质特别多，口J适当提高抽提缓冲液中的號基乙醇浓度多 糖含量太高的材料，可在使用前将组织冷藏或冷冻保存5、 所获DNA沉淀不要完全干燥，否则极难溶解实验二核酸提取物浓度及纯度检测实验程序1、 预热紫外分光光度计20-30min2、 制作空白对照，取3mlTE于石英比色杯中，用以校正分光光度计零点及调满3、 DNA浓度及纯度测定1） 取15U1DNA或12 u 1 RNA待测样品加入另一比色杯中，补加TE至3ml, 混匀2） 测定待测样品在260、280、230nm的OD值3） 计算浓度：对于纯的 dsDNA, 10D26o—50p g/mlDNA样品浓度（ug/ul） =OD260X50ug/mlXN （样品稀释倍数）对于纯的 ssRNA, 10D26o=40 u g/mlRNA样品浓度（ug/ul） =OD26oX40ug/mlXN （样品稀释倍数）4、 测定纯度纯白勺 DNA OD260/ OD28o（A）= 1.8 OD260/ OD230（B）〉2.0若A〉1.9,表明冇RNA污染；A〈1.6表明有蛋白质或酚类物质污染；B〈2.0表明有残存的盐和小分了杂质，如核莒酸，氨基酸，酚类等。
纯的 RNA OD26o/ OD280（A）应介于 1.7〜2.0 OD26o/ OD23o（B）〉2.0若A太小，说明有蛋白质或酚类污染；A〉2.0可能被异硫氟酸弧等污染；B〈2.0表明有小分子和盐存在。