梅毒的实验室诊断,,1,优选内容,一、概述-梅毒病原体,（一）、名 词 由梅毒螺旋体感染引起的一种慢性全身性性传播疾病 是我国卫生部规定的8种重点防治性病之一 中华人民共和国传染病防治法规定的乙类传染病 世界卫生组织列为世界上最常见的50种传染病之一 梅毒螺旋体（Treponema pallidum，TP ） 是梅毒的病原体，因其透明，不易着色，故又称苍白螺旋体,2,优选内容,,（二）、生物学特性 小而纤细的螺旋状微生物 长520m，粗细<0.2m 有6 12个规则的螺旋 基本结构为一原生质的圆柱体，为两层膜所围绕 行动缓慢而有规律 - 围绕其长轴旋转中前后移动 - 伸缩其圈间之距离而移动 - 全身弯曲如蛇行,3,优选内容,,（三）、繁 殖 繁殖方式与其生活环境有关 近年来电子显微镜观察，在培养条件下或在体内适宜环境中为横断分裂，分裂时将躯干分裂成长短两段 分裂增代时间为3033小时 当条件不利时，以分芽子繁殖 生活发育周期:颗粒期、球形体期及螺旋体期，与所致疾病周期、隐伏发作及慢性病程有关,4,优选内容,,（四）、培 养 一般不能人工培养 Nichols株（有毒株）能接种在家兔睾丸中或眼前房内繁殖，能保持毒力 Reiter株能生长繁殖，已丧失致病力 Nichols株和Reiter株已广泛用作多种梅毒血清学的诊断抗原,5,优选内容,,(五）、生存条件 厌氧寄生物，在人体内可长期生存，体外不易生存 干燥、肥皂水及一般消毒剂如1：1000苯酚、新洁尔灭、稀酒精均可于短时间将其杀死 在血液中4经3日可死亡，故在血库冰箱冷藏3日以上的血液就无传染性 温度的影响：41-42时可生活1-2小时，在48仅半小时即失去感染力，100立即死亡。
对寒冷抵抗力大，在0时，可生活48小时，如将梅毒病损标本置于冰箱内，经1周仍可致病在低温（-78）保存数年，仍可保持其形态、活动及毒性 在封存的生理盐水稀释的组织液中可生活10小时左右 在潮湿的器具或湿毛巾中，亦可生存数小时 在干燥环境中可见迅速死亡 6,优选内容,,（六）、宿 主 梅毒螺旋体只感染人类 人是梅毒的唯一传染源,7,优选内容,,（七）、毒力因子 目前未证明具有内毒素或外毒素 粘多糖和粘多糖酶是其主要毒力因子,8,优选内容,,（八）、致 病 性 由于其表面有赖以生存的荚膜样的粘多糖， 由于粘多糖是宿主组织和血管支架的重要基质成分，粘多糖被梅毒螺旋体分解后，组织受到损伤破坏，从而引起血管的塌陷，血供受阻，造成管腔闭合性动脉内膜炎，动脉周围炎及坏死，溃疡等病变,9,优选内容,,（九）、抗 原 1表面特异性抗原：刺激机体产生特异凝集抗体及密螺旋体制动或溶解抗体，后者加补体可溶解螺旋体 2螺旋体内类属抗原：可产生补体结合抗体，与非病原性螺旋体有交叉反应 3，螺旋体与宿主组织磷脂形成的复合抗原：当螺旋体侵入组织后，组织中的磷脂可粘附在螺旋体上，形成复合抗原，此种复合抗原可刺激机体产生抗磷脂的自身免疫抗体，称为反应素（Aegagin），可与牛心肌或其他正常动物心肌提取的类脂质抗原起沉淀反应（康氏试验）或补体结合反应（华氏试验）,10,优选内容,,(十）、免 疫 以细胞免疫为主，体液免疫只有一定的辅助防御作用 当螺旋体从体内清除后可再感染，而且仍可出现一期梅毒症状 此病周期性潜伏与再发的原因可能与体内产生的免疫力有关,11,优选内容,二、检测方法-病原体检查,梅毒螺旋体检查是诊断早期梅毒的最佳方法。
诊断一期梅毒、二期梅毒时，可取患者的渗出液或淋巴结穿刺术得到的组织液，在暗视野显微镜下观察螺旋体的特征性形态和运动方式. 病原学检查的主要方法有暗视显微镜检查、镀银染色法和直接荧光法,12,优选内容,,暗视野显微镜检查、镀银染色和荧光抗梅毒螺旋体单克隆抗体等检查方法，直接镜检到梅毒螺旋体，在临床可确诊梅毒，且具有快速、方便、易操作的特点暗视野显微镜检查已被世界卫生组织指定为性病实验室必备项目之一 螺旋体检查是诊断早期现症梅毒的最佳方法，对于患者的早期诊断、及时治疗、预后和尽早切断传染源都有十分重要的意义 如未见到梅毒螺旋体，并不能排除患梅毒的可能性，,13,优选内容,14,优选内容,,暗视野显微镜检查,15,优选内容,镀银染色,16,优选内容,检测方法-血清学检测,根据检测所用抗原不同，临床血清试验分为两大类： 1.非梅毒螺旋体抗原血清试验 2.梅毒螺旋体抗原血清试验,,17,优选内容,检测方法-非梅毒螺旋体血清试验,性病研究实验室试验（VDRL） 不加热血清反应素试验（USR） 血浆反应素环状卡片试验（RPR、TRUST）,,18,优选内容,检测方法-非梅毒螺旋体血清试验,所有的非梅毒螺旋体血清试验的抗原基本成分都一样,其基本成分是心磷脂 、卵磷脂和胆固醇 抗原抗体结合形成复合物 凝集成网状沉淀颗粒 被肉眼所见 上述方法的敏感性和特异性都基本相似,,19,优选内容,检测方法-非梅毒螺旋体血清试验,RPR试验特点： 在USR试剂成分的基础上 加入黑色碳颗粒 作为沉淀的指示物 用白色的硬纸片替代玻片 血清不需要灭活 不需要显微镜观测结果 可作定量试验 有现成的试剂盒 携带方便 操作简单 价格便宜 试验的结果可长期保存,,20,优选内容,检测方法-非梅毒螺旋体血清试验,甲苯胺红试验(TRUST)特点： 其原理和成分与RPR试验相同 用红色的甲苯胺红替代了碳颗粒 其余的特点均与RPR相同,,21,优选内容,非梅毒螺旋体血清试验原理示意图,22,优选内容,RPR结果,23,优选内容,TRUST结果,24,优选内容,,检测方法非梅毒螺旋体血清试验临床意义,非梅毒螺旋体抗原血清试验方法简单、快速、敏感性和特异性较好。
适用于大量人群的筛查 早期梅毒硬下疳出现1周-2周后，血清可呈阳性 经治疗后血清滴度可下降并阴性，故可作为疗效观察、判愈、复发或再感染的指征25,优选内容,检测方法-非梅毒螺旋体血清试验特点,前带现象 指非梅毒螺旋体抗原血清试验中，有时血清中存在高浓度的抗体时出现的弱阳性、不典型或阴性反应的结果，而临床上又象二期梅毒，此时将血清稀释后再进行试验，出现了阳性的结果，该现象称为前带现象26,优选内容,,,27,优选内容,,,28,优选内容,检测方法-梅毒螺旋体血清试验,采用梅毒螺旋体作抗原，是特异性的抗原体反应 梅毒螺旋体血球凝集试验（TPHA） 梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验（TP-PA） 荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS）、 梅毒螺旋体抗体酶联免疫试验（ELSA-TP） 梅毒螺旋体蛋白印迹试验（WB-Test）,,29,优选内容,检测方法-梅毒螺旋体血清试验,TPPA TPPA试验原理与TPHA试验基本相同TPPA试验用梅毒螺旋体致敏明胶颗粒替代TPHA试验中致敏羊红细胞，此致敏颗粒与人血清中的抗梅毒螺旋体抗体结合，产生可见的凝集反应，具有较高的敏感性明胶粒子为洋红色，在操作部步上也较为方便，出结果较快。
检测IgM或IgG抗体,,30,优选内容,检测方法-梅毒螺旋体血清试验,FTA-ABS FTA-ABS试验是检测梅毒的“金标准”试验其原理是将有完整形态的梅毒螺旋体作为抗原，加上经吸收剂（用Reiter螺旋体制备而成）吸收过的梅毒患者血清形成抗原抗体复合物，再加入荧光素（FTIC）标记的抗人免疫球蛋白，与抗梅毒螺旋体抗体结合，形成荧光的抗原抗体复合物在荧光显微镜下，螺旋体显出苹果绿色的荧光，即为阳性反应31,优选内容,,,+,,,,,,,,,,,,,,,,,,Sheep red cell,T.pallidum,,,+,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,Sensitised cell,Sensitised cell,Specific Antibody,Hemagglutination,TPPA/TPHA,32,优选内容,检测方法-梅毒螺旋体血清试验,梅毒螺旋体抗体酶联免疫试验（ELSA-TP 抗原采用超声破碎的螺旋体抗原或重组抗原 检测IgM或IgG 敏感性和特异性与其他试剂基本一致 应作进一步评价,33,优选内容,梅毒诊断方法比较,RPR、TRUST、USR、VDRL TPHA、FTA-ABS 间接EIA、双抗原夹心EIA 牛心磷脂 完整病原体 纯化抗原 梅毒非特异性抗原 梅毒特异性抗原 梅毒特异性抗原 特异性中 特异性高 特异性高 敏感性低 敏感性中 敏感性高 肉眼判读结果 肉眼判读结果 机器判读结果 自动化程度低 自动化程度低 自动化程度高 单独适用血液筛查 单独不适用血液筛查 单独适用血液筛查 适用少批量样本检测 适用少批量样本检测 适用大批量样本检测 价格低 价格高 价格中 注：反应素存在生物学真阳性反应、生物学假阳性反应、人工假阳性反应。
34,优选内容,,梅毒各期血清学检验的阳性率（%） 试验 一期梅毒 二期梅毒 三期梅毒 RPR 85 100 75 FTA-ABS 86 100 97 TPHA 77 100 100,35,优选内容,2008年梅毒试剂评估,参比试剂： 1. 美国BD公司生产的“梅毒快速血浆反应素环状卡片试验诊断试剂盒(RPR试剂盒)(批号：8095883) ” 2. 日本富士株式会社生产的“梅毒螺旋体抗体诊断试剂(凝集法)(TPPA试剂盒)(批号：VN80807) ” 3. 抗梅毒螺旋体抗体(IgG)检测试剂盒(免疫印渍法)(16人份/盒)（批号：D081009A1）,36,优选内容,非梅毒螺旋体抗原血清学检测用试剂敏感性和特异性,试剂名称 生产厂家 生产批号 敏感性(%) 特异性(%) 梅毒快速血浆反应素环状 上海科华生物技术有限公司 20070620 97.2 93.4 卡片试验诊断试剂盒(RPR) 梅毒甲苯胺红不加热血清 上海荣盛生物技术有限公司 20070501 95.4 95.1 试验诊断试剂盒(TRUST) 梅毒甲苯胺红不加热血清 兰州生物制品研究所 20070201 92.2 96.2 试验诊断试剂盒(TRUST) 梅毒甲苯胺红不加热血清 英科新创(厦门)科技有限公司 2008067602 97.2 93.4 试验诊断试剂(TRUST) 梅毒甲苯胺红不加热血清 郑州安图绿科生物工程有限公司 20070509 87.1 94.4 试验诊断试剂盒(TRUST),37,优选内容,梅毒螺旋体血清学检测用试剂(ELISA法)的敏感性和特异性,试剂名称 生产厂家 生产批号 敏感性(%) 特异性(%) 梅毒螺旋体抗体诊断试剂 珠海丽珠试剂有限公司 20080618 99.6 99.6 (双抗夹心法)(ELISA-TP) 梅毒螺旋体抗体诊断试剂 英科新创(厦门)科技有限公司 2008077506 99.6 98.3 (双抗夹心法)(ELISA-TP) 梅毒螺旋体抗体诊断试剂 北京华大吉比爱生物技术有限公司 20080912 99.6 97.1 (双抗夹心法)(ELISA-TP) 梅毒螺旋体抗体诊断试剂 北京万泰生物药业有限 N20080606 99.2 99.6 (双抗夹心法)(ELISA-TP) 梅毒螺旋体抗体诊断试剂 北京现代高达生物技术 200806003 98.9 99.6 (双。